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【摘要】 目的：建立高效液相色谱法测定复合维生素胶囊中叶酸含量。方法：KR100-5 C18 柱分离，以甲醇:水（含2%冰醋酸、0.1%辛烷磺酸钠、0.2%乙二胺，25：75）为流动相，流速0.5 mL/min，二极管阵列检测器检测波长：285 nm 。结果：叶酸在0.5 μg/mL~50 μg/mL有良好的线性关系，相关系数为0.9997。检出限为7.3 ng，最低检出浓度为1.5 mg/kg。样品测定的精密度为2.8%~3.0%；样品加标回收率为94.7%~97.7%，平均回收率为96.2%。结论：建立的高效液相色谱法具有良好的精密度和准确度，适用于复合维生素胶囊中叶酸含量的测定。
【关键词】 高效液相色谱法；胶囊；复合维生素
Determination of Folic acid in Complex Vitamin Capsules by HPLC
SHAO Sheng-wen, WANG Yan
(Hubei Provincial Center for Diseases Control and Prevention, Hubei 430079,China)
【Abstract】 Objective：To develop a HPLC method for the determination of folic acid in complex vitamin capsules. Methods:The determination was performed on a KR100-5 C18 column（4.6×250 mm，5μm）with the mobile phase consisting of methanol- 2% acetic acid aqueous solution（containing 0.1% 1-octanesulfonate,sodium salt and 0.2% ethylenediamine）（25:75，v/v） with a flow rate of 0.5mL.min-1,the determination was made by a U.V. detector at 285nm wavelength.Results: The method offered good linearity from 0.5~50μg.mL-1,relativity coefficient was 0.9997,the detection limit was 7.3 ng,the average recovery was 96.2%.the precision of method was from 2.8%~3.0%(n=6).Conclusions: The developed HPLC method was accurate and precision,and could be used for the determination of Folic acid in Complex Vitamin Capsules.
【Key words】HPLC; Folic acid; Complex Vitamin Capsules
测定婴幼儿配方食品和乳粉中叶酸含量的国家标准方法是微生物法［1］，由于所需设备复杂、操作烦琐，许多单位都很难应用实施。参照相关文献，结合工作实际，我们对液相色谱法测定复合维生素胶囊中叶酸含量的方法进行了探讨，取得较好的效果。结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 仪器与试剂
高效液相色谱仪，Varian Prostar ，配有二极管阵列检测器或紫外检测器；甲醇，色谱纯；冰醋酸，分析纯； 乙二胺，分析纯； 辛烷磺酸钠，分析纯；冰醋酸，分析纯；吐温80，分析纯；磷酸钾，分析纯；0.01 mol/L磷酸钾溶液（按0.2%比例加入吐温80，用磷酸调pH至7.6）。
1.2 标准制备
准确称取0.0250 g 叶酸（SUPELCO产品），以0.01 mol/L磷酸钾溶液溶解并定容至10 mL，临用前稀释至0.0250 mg/mL，进样50 μL。以保留时间定性，峰面积定量。
1.3 色谱条件
色谱柱： KR100-5 C18 柱（4.6 mm×250 mm，SUPELCO公司生产）；检测器：PDA检测器，波长 285 nm；流动相：甲醇:水（含2%冰醋酸、0.1%辛烷磺酸钠、0.2%乙二胺）=25：75；流速 0.5mL/min。
1.4 样品制备
准确称取样品，加0.01 mol/L磷酸钾溶液100 mL于摇床上振摇1小时，过0.45 μm滤膜，进样50 μL。以保留时间定性，峰面积定量。
1.5 计算公式
X=A1 CA2×nVm
式中:X：样品中叶酸含量,mg/g；A1：样品中叶酸的峰面积；A2：标准溶液中叶酸的峰面积；C：标准溶液的浓度,mg/mL；n：样品稀释倍数；V：样品定容体积,mL；m：称取样品的质量,g。
2 结果与讨论
2.1 色谱条件的选择 本方法选用实验室常用的反相C18柱，用二极管阵列检测器检测其在285 nm处有一最大吸收峰,选用本方法色谱条件，分离效果很好(叶酸保留时间约为8.84 min，图1、图2)。
2.2 样品处理方法试验
吐温80是一种良好的扩散剂、润湿剂和非离子型表面活性剂，对于粘稠性的样品，加入少量的吐温80可以改善样品分散的均匀性，从而增大样品中水溶性的维生素与提取溶剂的接触面，进而提高样品中叶酸的萃取率。本法通过比较试验，加入0.2%的吐温，叶酸的提取比例与不加吐温比提高10余倍，测定结果与添加情况相符。
2.3 方法的线性范围和检出限
按1.2方法配制叶酸标准系列：0.005 mg/mL、0.010 mg/mL、0.015 mg/mL、0.025 mg/mL、0.050mg/mL，每个浓度各进样50 μL，重复3次，取峰面积均值，与对应浓度值作直线回归处理，其标准曲线回归方程为：y=-453067.8+1664165869.0x，r=0.9997。在本分析条件下，方法检出限为7.3 ng（以3倍噪声计），最低检出浓度为1.5 mg/kg（按取样5 g，定容50 mL计）。
2.4 样品测定的精密度试验
按本法色谱条件测定样品2份，每份各测定6次，计算其相对标准偏差，分别为2.8%、3.0%（表1）。表1 精密度测定结果（略）
2.5 样品测定的准确度试验
准确称取三份经过含量测定的样品，分别加入适量的标准品，按本法色谱条件分离测定其叶酸含量，计算加标回收率，求得平均回收率为96.2%（表2）。表2 回收率试验结果（略）
【参考文献】
［1］中国标准出版社第一编辑室.中国食品工业标准汇编乳制品和婴幼儿食品卷［M］.北京：中国标准出版社，2003：288-291.
作者单位：湖北省疾病预防控制中心，湖北 武汉 430079