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首页医源资料库在线期刊中国民康医学2007年第19卷第19期

乙肝患者外周血T淋巴细胞上CD28表达及临床意义

来源:《中国民康医学》
摘要:【摘要】目的:研究乙肝患者外周血CD4+T淋巴细胞亚群、CD8+T淋巴细胞亚群CD28分子表达变化。探讨外周血T淋巴细胞CD28的表达对乙型肝炎患者的免疫学意义及临床意义。方法:应用流式细胞仪检测乙肝患者。结果:急性乙型肝炎患者CD8+、CD28+T淋巴细胞明显高于正常对照组和慢性乙型肝炎患者(P<0。...

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【摘要】  目的:研究乙肝患者外周血CD4+T淋巴细胞亚群、CD8+T淋巴细胞亚群CD28分子表达变化。探讨外周血T淋巴细胞CD28的表达对乙型肝炎患者的免疫学意义及临床意义。方法:应用流式细胞仪检测乙肝患者。结果:急性乙型肝炎患者CD8+、CD28+T淋巴细胞明显高于正常对照组和慢性乙型肝炎患者(P<0.01)。慢性乙型肝炎轻中度和重度患者CD4+、CD28+T淋巴细胞、CD8+、CD28+T淋巴细胞明显低于正常对照组(P<0.01),CD8+、CD28-T淋巴细胞明显高于正常对照组(P<0.01)。乙型肝炎患者CD4+/CD8+T淋巴细胞的比值明显低于正常对照组(P<0.01)。结论:乙型肝炎患者存在免疫功能紊乱。外周血淋巴细胞CD28的表达情况可以作为判断乙型肝炎病情的重要参考依据。

【关键词】  乙型肝炎 CD4 CD8 CD28分子 T细胞

  The clinical significance and the expression of CD28 on the peripheral blood lymphocytes in the patients with hepatitis B

  HAO Feng, FANG Fang, LI Yan, et al

  (Jilin medicine college, Jilin 132013, China)
   
  【Abstract】  Objective:To study the expression of CD28 on the peripheral blood lymphocytes in the patients with hepatitis B. To probe the immunological in the patients with hepatitis B. Methods:CD28 expression on the peripheral blood lymphocytes was detected by Flow Cytometry (FCM) in the patients with hepatitis B and the controls.Results: CD8+CD28+ T lymphocytes in patients with acute hepatitis B are significantly higher than those in patients with chronic hepatitis B and the controls. The CD4+CD28+ T lymphocytes and CD8+CD28+ T lymphocytes in patients with chronic hepatitis B is significantly lower than those in the controls, but CD8+CD28- T lymphocytes is significantly higher than those in the controls. The ratio between CD4+ and CD8+ T lymphocytes in the patients with hepatitis B is significantly lower than the controls.Conclusions: The immune function of the patients with hepatitis B is abnormal. CD28 expression on the peripheral blood lymphocytes plays an important role in patients with hepatitis B and it could be an important index to evaluate the state of the patients with hepatitis B.
   
  【Key words】Hepatitis B; CD4、CD8、CD28 molecule;  Iymphocytes

  病毒性肝炎是全球性传染病[1]。T淋巴细胞在清除病毒的过程中作用十分关键,静止T细胞必须接受抗原提呈细胞(APC)提成的双信号才能活化,第一信号是抗原特异性的;第二信号是由T细胞上的CD28与抗原呈递细胞上的B7分子的结合而提供的。只有两个信号同时存在时,T细胞开始增殖并分泌相应细胞因子。若没有协同刺激分子提供第二信号,T细胞识别抗原后不能充分活化并表现效应功能。本实验应用流式细胞仪直接检测正常对照组、乙型肝炎患者外周血T淋巴细胞。通过检测CD28在CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群的表达情况,探讨CD28表达对乙型肝炎患者的影响。为研究乙型肝炎患者病情、病理损伤机制以及相关的诊断和治疗提供帮助。

  1  资料和方法

  1.1  材料  健康人和乙肝患者血液由北华大学附属医院提供,其中正常健康献血员17例作为正常对照组, 急性期乙型肝炎15例,慢性肝炎轻中度慢性乙型肝炎患者31例、重度乙型肝炎患者15例作为病人组。FITC标记的CD28单克隆抗体、PC5标记的CD4单克隆抗体、PC5标记的CD8单克隆抗体(苏州市苏医生物基因有限公司);Ficoll淋巴细胞分离液(中国医学科学院血液学研究所);RPMI-1640细胞培养液(Gibco);流式细胞仪(Beckman Coulter Epics XL 美国)

  1.2  方法  PBMC的分离:在被检测者抗凝血中加入等体积 Hank's液,混和均匀。取一个10 ml无菌离心管,加入4 ml Ficoll液于离心管底部,用移液管将稀释的血液缓慢加入到Ficoll液上层,此时试管内的液体分为两层,上层为稀释的血液,下层为Ficoll液。静止10 min。盖上试管帽,把试管放到水平离心机中,1 700 rpm离心20 min。离心后,上清液分为5层,分别为:血浆层、单个核细胞层、Ficoll液层、粒细胞层和红细胞层。弃去血浆,将单个核细胞转移到另外一个灭菌试管中,用Hank's液洗涤,1 700 rpm离心,弃上清,共洗涤三次,获得单个核细胞。
   
  CD4,CD8和CD28表达的检测:流式细胞仪检测正常对照组和乙型肝炎患者PBMC中T细胞表面CD4,CD8和CD28分子的表达

  2  结果

  2.1  检测CD4+CD28+T细胞、CD8+CD28+T细胞和CD8+CD28-T细胞,结果见表1。

  表1  对照组与各乙肝患者组T淋巴细胞检测情况(略)

  (1)急性乙肝组CD4+CD28+T淋巴细胞没有显著性差异(P>0.05);慢性乙型肝炎轻中度组和重度组CD4+CD28+T淋巴细胞显著降低(P<0.01)。
   
  (2)急性乙肝组CD8+CD28+T淋巴细胞显著增高(P<0.01);慢性乙型肝炎轻中度组和重度组CD8+CD28+T淋巴细胞显著降低( P<0.01)。
   
  (3)急性乙肝组CD8+CD28-T淋巴细胞没有显著性差异(P>0.05);慢性乙型肝炎轻中度组和重度组CD8+CD28-T淋巴细胞显著增高(P<0.01)。

  3  讨论
   
  CD28是T细胞初始活化的不可缺少的第二信号,在病毒感染初期,T细胞在活化信号的作用下克隆增殖,CD8+CD28+T淋巴细胞增多,为T细胞清除病毒做准备,因此急性期CD8+CD28+T淋巴细胞显著增加。而慢性乙型肝炎患者,随着病情的加重,CD4+T淋巴细胞减少,导致CD4+CD28+T淋巴细胞显著下降,但是CD4+CD28+/CD4+T淋巴细胞的百分比并没有显著意义的改变。同时发现CD8+T细胞并没有显著性变化,但是CD8+CD28+T淋巴细胞显著下降,而CD8+CD28-T淋巴细胞显著增多。
   
  细胞免疫反应在乙型肝炎患者中起到了关键性的作用,而且CD8+ T细胞介导的细胞毒作用对肝细胞的损伤和病毒的清除尤其重要[2]。慢性乙型肝炎患者CD8+CD28+T淋巴细胞减少的一种解释是针对HBV特异性的CD8+CD28+T淋巴细胞迁移到了肝脏或者针对CD8+CD28+T淋巴细胞特异性的抗原聚集的地方。类似的报道见于类风湿性关节炎中[3],但KUROKOHCHI K[4]等在研究HCV患者的时候发现渗透到肝组织中的单个核细胞中的CD8+CD28+ T细胞并没有增多,只是在肝门区域有所增多,但在肝小叶中的CD8+CD28+ T淋巴细胞与外周血单个核细胞相比没有差异。CD8+CD28-T淋巴细胞与肝细胞的病理损伤的相关性最大,相关系数达到0.694。Cacopardo B等[6]发现慢性迁延性丙型患者CD8+CD28+T淋巴细胞高于慢性活动性丙型患者;在乙型肝炎中也有类似报道[7]。
   
  CD8+CD28-T细胞在出生时并不存在,可因病毒慢性感染等因素而增多,研究中没有发现CD28- T细胞可以转变为CD28+T细胞。Posnett DN[8]发现CD8+CD28+T细胞是CD8+CD28-T细胞的前体细胞,CD8+CD28+T细胞的增殖活性较强。有研究表明相当大比例的CD8+CD28-T细胞表达胞内穿孔素,具有较强的细胞毒作用,增殖活性较弱,但CD8+CD28-T细胞是否都是细胞毒性效应T细胞,或者其比例还不是很清楚[9]。有文献CD28+CD27+T细胞是初始T细胞,然后转变为CD28-CD27+T细胞,最后转变为完全分化的CD28-CD27-T细胞[10]。因此我们认为在乙型肝炎病毒感染的患者的CD8+CD28+T淋巴细胞是初始T细胞,在转变为CD8+CD28-T淋巴细胞后转变为效应性T细胞。排除年龄因素,乙型肝炎患者CD8+CD28-T淋巴细胞的增多,主要是由于病毒对T细胞的刺激导致CD8+CD28+T淋巴细胞活化增殖最后转变为具有更强杀伤活性的CD8+CD28-T淋巴细胞(效应性CTL细胞), CD8+CD28-T淋巴细胞的增多可能使效应性CTL增加,加重肝细胞的损伤。因此CD8+CD28-T淋巴细胞在乙型感染患者体内的情况能够在一定程度上说明患者的病情。本文中的慢性乙型肝炎轻中度、重度患者CD8+CD28-T淋巴细胞也是随病情的进展逐渐增多,且明显高于正常对照组。

【参考文献】
    [1] Slavik JM, Hutchcroft JE , Bierer BE. CD28/CTLA-4 and CD80/CD86 Families Signaling and Function[J]. Immuol Res, 1999,19:1-24.

  [2] Brunet JF,Denizot F , Luciani MF, et al. A new member of the immunoglobulin superfamily CTLA-4[J]. Nature,1987,328:267-270.

  [3] Greene JL ,Leytze GM , Emswiler J , et al. Covalent dimerization of CD28/ CTLA24 and oligomerization of CD80/CD28 regulate T cell costimulatory interactions[J]. J Biol Chem , 1996,271 :26762 - 26771.

  [4] Chuang E ,Alegre ML ,Duckett CS ,et al . Interaction of CTLA-4 with the clathrin-associated protein AP50 results in ligand-independent endocytosis that limits cell surface expression[J]. J Immunol,1997, 159 (1):144-151.

  [5] Xia M , Gasser J , Feige U. Dexamethasone enhances CTLA-4 expression during T cell activation[J]. Cell Mol Life Sci , 1999 ,55 (12):1649-1656.

  [6] Collins M,Carreno BM. The B7 family of ligands and its receptors :new pathways for costimulation and inhibition of immune responses[J]. Ann Rev Immunol , 2002 ,20:29.

  [7] Hutloff A , Dittrich AM, Beier KC , et al . ICOS is an inducible T-cell costimulatory receptor structurally and functionally related to CD28[J]. Nature, 1999 ,397:263.

  [8] Yoshinaga SK, Wallin JJ, Abbasa CA, et al. T cell costimulation through B7RP-1 and ICOS[J]. Nature, 1991, 402: 827-832.

  [9] Grimbacher B ,Hutloff A ,Schlesier M,et al . Homozygous loss of ICOS is associated with adult-onset common variable immunodeficiency[J]. Nature Immunol ,2003 ,4(3) : 261-268.

  [10] Shin T ,Kennedy G,Gorski K,et al. Cooperative B7-1/ 2 (CD80/ CD86) and B7-DC costimulation of CD4+ T cells independent of the PD-1 receptor[J]. J Exp Med ,2003 ,198(1):31-38.

  [11] Suh WK, Gajewska BU ,Okada H ,et al . The B7 family member B7-H3 preferentially down- regulats T helper type 1-mediated immune responses[J]. Nat Immunol ,2003 ,4 (9) :899-906.


作者单位:吉林医药学院,吉林 吉林 132013

作者: 郝峰 2008-5-29
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