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【关键词】 复发性生殖器疱疹
复发性生殖器疱疹(RGH)主要是单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)感染人体后易在骶神经根区潜伏,受到激活造成生殖器、肛周部位的红斑、水疱、糜烂、溃疡等改变,并反复发作。HSV-2在人体潜伏和复发的机制尚不清楚,除了病毒本身的因素外,机体的免疫状况可能对其有关键性作用。本研究通过流式细胞仪检测RGH患者发作期和静止期外周血T淋巴细胞亚群, 并分析其临床意义。
1 资料与方法
1.1 病例选择
发作期病例组:20例RGH患者均来自2006年10月～2007年10月我科性病门诊,符合我国卫生部疾病控制司和全国性病麻风病控制中心联合颁布的RGH诊断标准,近半年发病次数在3次以上(包括3次)。半年内未使用任何免疫抑制剂、免疫增强剂与免疫调节剂,同时除外妊娠及哺乳期妇女、严重心肝肾疾病或全身衰竭、结核、肿瘤、器官移植、自身免疫性疾病者。其中，男11例,女9例，年龄22～40岁，平均30.4岁;病程6个月～3年9个月。
静止期病例组:上组患者仅予以喷昔洛韦搽剂外用和单磷酸阿糖腺苷(5～10mg/kg，1次/d，共7天)静点治疗而未予全身免疫调节药物,就诊后1个月复诊而病情稳定者入选。正常对照组:在我科门诊随机选择年龄、性别相仿,无生殖器疱疹者20例,其中，男11例,女9例;年龄21～41岁，平均33.5岁。
1.2 检测方法
试剂:CD3-PE-CY5、CD8-PE、CD4-FITC及同型阴性对照, MsIgG-PE-CY5、MsIgG-FITC均购自美国贝克曼库尔特有限公司。流式细胞仪型号为EPICS XL型(美国贝克曼库尔特有限公司)。
采集患者及健康人外周静脉血2ml,肝素抗凝。室温下放置24h内检测。检测T淋巴细胞亚群时取专用的试管3支,分别加入试剂CD3-PE-CY5,CD4-FITC,CD8-PE及同型阴性对照MsIgG-PE-CY5, MsIgG-FITC试剂20μl;立即在3支试管加入肝素抗凝血100μl,充分混匀,室温下避光放置30min后每管加入溶血剂(0.7%氯化铵)2～3ml充分混匀,室温下避光放置15min后,离心取上清液,用PBS洗涤2次后,加PB试剂1ml,30min内上机检测,流式细胞仪计数。检测前常规对流式细胞仪进行尽量监控和双色荧光补偿,使其均置于允许的范围内。
1.3 统计学处理
采用SPSS12.0统计软件进行统计分析。
2 结果
见表1。RGH患者外周血T淋巴细胞亚群中的CD3+和 CD4+百分数在发作期、静止期差异有统计学意义（P＜0.05）；而CD8+百分数和对照组的差异无统计学意义（P＞0.05）。表1 RGH患者外周血T淋巴细胞亚群检测结果（略）注：t值为与对照组比较，P<0.05
3 讨论
在机体免疫系统中,T淋巴细胞是最重要的免疫细胞。当T淋巴细胞亚群的数量和功能发生异常时,可导致机体免疫功能的紊乱和一系列病理变化［1］ 。现代免疫学认为,外周血中T淋巴细胞亚群的数目是估计机体免疫调节平衡状态很有意义的参数之一，也是疾病严重程度和预后的重要标志之一［2］。本研究采用多参数流式细胞仪进行胞内细胞因子检测分析,是目前唯一可在单个细胞水平上观察新鲜分离的T淋巴细胞对特异性抗原刺激产生细胞因子效应的方法［3］。
本研究结果显示，病变组不论在发作期或静止期，其CD3+T淋巴细胞及辅助性T淋巴细胞(CD4+T)活性均低于正常对照组。说明机体受到疱疹病毒抗原刺激后，活化及产生了特异性抗疱疹病毒的细胞毒性T细胞，参与对皮肤疱疹病毒感染的细胞免疫反应。本文还发现，CD8+T淋巴细胞无明显变化，提示与CD4+T淋巴细胞相比，CD8+T淋巴细胞在抗HSV-2中的作用不明显。有研究报道，在人类生殖道存在高滴度的CD8+T淋巴细胞仍不能控制HSV-2的复制， CD8+T不是控制HSV-2所必需的细胞［4］ 。本研究结果证实，患者细胞免疫功能下降,与RGH的发病及其复发有一定关系,通过提高患者免疫功能有助于RGH的治疗和防治其复发。
因此，动态检测RGH患者发作期和静止期外周血T淋巴细胞亚群，不仅对RGH患者的治疗及其病程发展具有重要临床参考价值，而且也为进一步深入探讨RGH患者的免疫功能状态与其发病及复发的关系提供一定的实验依据。
【参考文献】
［1］黄永初,徐祖森.单纯疱疹病毒2型感染和淋巴细胞作用的进展［J］.国外医学·皮肤性病学分册,2005,31(3)：142-144.
［2］钱起丰,张明霞.复发性生殖器疱疹患者外周血T细胞抗原受体γδT细胞的检测［J］.中华皮肤科杂志,2002,35(3)：229-230.
［3］邓云华,陈兴平,许成蓉,等.复发性生殖器疱疹患者外周血单一核细胞CD40和CD40L的表达［J］.中华皮肤科杂志,2004,37(5)：268-269.
［4］赖伟红,叶顺章,韩国柱. 生殖器疱疹临床研究的某些新进展［J］.国外医学·皮肤性病学分册,2000,26(3)：162-166.
作者单位：(北华大学附属医院,吉林 吉林 132000)