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首页医源资料库在线期刊中国民康医学2008年第20卷第21期

水飞蓟宾-磷脂酰胆碱复合物对大鼠脑缺血-再灌注损伤的研究

来源:《中国民康医学》
摘要:【摘要】目的:探讨水飞蓟宾-磷脂酰胆碱复合物(Silybin-PhosphatidylcholineCompound,SPC)对大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤的保护作用。方法:采用线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞模型。以伪手术组做对照,观察两种剂量的SPC对大鼠脑缺血-再灌注损伤模型,脑组织含水量、病理学改变、细胞调亡的影响。结果:除伪手术......

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【摘要】    目的:探讨水飞蓟宾-磷脂酰胆碱复合物(Silybin-Phosphatidylcholine Compound,SPC)对大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤的保护作用。方法:采用线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞模型;以伪手术组做对照,观察两种剂量的SPC对大鼠脑缺血-再灌注损伤模型,脑组织含水量、病理学改变、细胞调亡的影响。结果:除伪手术组外各组受试大鼠均出现明显脑水肿改变。模型组脑组织含水量明显高于SPC各剂量组。低剂量组脑组织含水量高于高剂量组。TUNEL染色缺血再灌注组细胞凋亡发生率明显增加,SPC组凋亡率显著下降。结论:SPC对大鼠脑缺血再灌注脑损伤具有保护作用。

【关键词】  水飞蓟宾-磷脂酰胆碱复合物;脑缺血-再灌注损伤

  脑缺血再灌注后神经损伤的机制是一个复杂的多因素病理生理过程[1,2]。目前已知再灌注引起进一步损伤的可能机制有:脑水肿、自由基生成增多,兴奋性氨基酸毒性,能量代谢障碍,免疫炎症损伤等有关。1993年Linnik提出缺血性神经元死亡与细胞凋亡有关[3]。导致严重的神经功能障碍[4]。水飞蓟宾具有多种药理作用[5,6],抗自由基损伤[7],抗脂质过氧化[8],治疗糖尿病并发症[9],高血脂,抗炎等作用,水飞蓟宾-磷脂酰胆碱复合物[10]具有较好的生物利用度,为临床治疗缺血性脑血管病探索新的药物获得初步数据。

  1  对象和方法

  1.1  对象 

  健康SD大鼠80只,体重(350±20)克,雌雄各半,由新乡医学院实验动物中心提供。随机分为4组,伪手术组、单纯缺血再灌注模型组、缺血再灌注低剂量SPC组(SPC-1)、缺血再灌注高剂量SPC组(SPC-2) 、大鼠大脑中动脉阻断局灶缺血模型(MCAO)的制备参考Longa等方法。用尼龙线栓塞右侧大脑中动脉造成大鼠大脑中动脉梗死,使其所支配区域脑组织缺血,即建立MCAO模型。

  1.2  给药方法 

  伪手术组、单纯缺血再灌注组分别给予0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)10 ml/Kg灌胃;分别给予SPC-1组100 mg/(Kg·d)、SPC-2组200 mg/(Kg·d)(用0.5%CMC-Na配成混悬液10 ml/Kg)灌胃,连续3天。

  1.3  观察指标

  1.3.1  脑组织形态学观察 

  缺血再灌注24 h后的大鼠行过量麻醉,直接断头后取脑,将双侧脑组织沿中线矢状切开,取右侧脑组织置于10%的甲醛溶液中固定24 h。将固定后的脑组织进行石蜡包埋后,切成4 um厚的切片、摊片、脱蜡。HE染色,封片。待光镜下观察脑组织形态学改变。

  1.3.2  脑组织含水量的测定 

  采用干湿重法,即将缺血再灌注24 h后的大鼠行过量麻醉,直接断头后取脑,称量右半脑湿重。放烘箱中,100 ℃烘烤24 h至恒重,精确称量干重,计算含水量。脑组织含水量=(湿重-干重)/湿重×100%。

  1.3.3  TUNNEL  检测细胞凋亡

  1.3.3.1  标本制作过程 

  具体步骤按TUNNEL 染色凋亡试剂盒(购于北京中山生物试剂公司)说明操作。

  1.3.3.2  细胞计数 

  在显微镜下通过对TUNNEL记数,对染色结果进行半定量分析。方法为:选择20×物镜对每张切片表达区域每视野内阳性细胞记数,共计数十个不同的视野,求其平均数作为最后的阳性结果, 胞核中棕黄色颗粒者为阳性细胞。

  1.4  统计学处理

  实验数据以均数±标准差(x±s)表示,各组间比较采用单因素方差分析,P<0.05为差异有显著性意义。

  2  结果

  2.1  脑组织含水量变化 

  由表1可见,右脑组织含水量SPC各剂量组均低于模型组,说明SPC能有效降低脑含水量,减轻脑水肿。表1  SPC对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤脑水肿的影响(略) 

  2.2  HE染色结果
 
  伪手术组脑组织神经元及胶质细胞正常,核膜清楚,核仁明显,未见神经变性、坏死等明显病理改变(图1);脑缺血再灌注模型组呈缺血性改变,可见神经元结构模糊,胞体肿胀,存在不同程度的核固缩深染,间质疏松,大量神经元脱失(图2);高剂量组与脑缺血再灌注模型组比较神经元脱失少,正常与坏死细胞相间存在(图4);低剂量组与高剂量组比较缺血坏死程度略高而低于脑缺血再灌注模型组(图3)。TUNEL染色检测结果见图5~8。表2  对脑缺血再灌凋亡细胞数的影响(略)

  3  讨论

    脑血管疾病是严重威胁人类健康的三大致死病因之一,其中缺血性脑血管疾病占绝大多数,脑组织缺血缺氧后。细胞内渗透压和乳酸增加,导致脑组织酸中毒和脑水肿[11]。脑缺血早期,导致血脑屏障的损害和引起脑组织水的潴留和脑水肿,脑水肿能反映脑组织损害的程度,测定脑含水量的多少可以用来判断脑损害的轻重。本实验将脑含水量作为观察指标,结果显示脑缺血再灌注模型组脑含水量明显高于假手术组(P<0.05),可知MACO方法制作的脑缺血再灌注大鼠能引起明显的脑组织水肿,而SPC各剂量组脑组织含水量显著低于模型组(P<0.01)。表明SPC有维护血脑屏障的功能,减轻脑水肿程度,保护脑缺血损伤。
   
  脑缺血后的病理形态改变是形成缺血核心区和缺血半暗带。核心区的细胞已发生死亡 , 是不可逆过程。半暗带是能量代谢保存而血供受抑制的区域。半暗带的细胞未完全坏死,但功能受损 , 呈可逆过程。正是半暗带的存在使我们运用脑保护剂减轻脑损伤和减少脑梗死面积成为可能, 而细胞凋亡是半暗带内细胞死亡的一种主要方式, 能在脑缺血/ 再灌注前或再灌注时给予脑保护剂,抑制神经元的凋亡及脑组织的炎症反应,对缺血后大脑功能的恢复将起重要的作用。该药物试验数据结果表明SPC具有保护脑细胞,抑制神经元的调亡。为临床急性期治疗及使用阻断凋亡发展的药物提供了依据。

【参考文献】
    [1]王维治,罗祖明.神经病学[M].第五版.北京:人民卫生出版社,2004:126-163.

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  [4]Preston E,Sutherland G,Finsten A. Three openings of blood-brain barrier produced by forebrain ischemia in the rat[J].Neurosci Lett, 1993, 149(1): 75-78.

  [5]孙铁民,李 铣.水飞蓟素药理研究进展[J].中草药,2000,31(3):229-231.

  [6]Wellington K, Jarvis B. Silymarin: a review of its clinical properties in the management of hepatic disorders[J].Bio Drugs, 2001, 15(7): 465-468.

  [7]Soto C, Recoba R, Barron H,et al. Silymarin increases antioxidant enzymes in alloxan-induced diabetes in rat pancreas[J].Comp Biochem Physiol Toxicol Pharmacol, 2003, 136(3): 205-212.

  [8]Kravchenko LV, Morozov SV, Tutel,yan VA.Effects of flavonoids on the resistance of microsomes to lipid peroxidation in vitro and ex vivo[J].Bull Exp Biol Med,2003, 136(6): 205-212.

  [9]Di Giulio AM, Lesma E, Germani E ,et al. Inhibition of high glucose-induced protein mono-ADP-ribosylation restores neuritogenesis and sodium-pump attivity in SY5Y neuroblasoma cells[J].Neurosci Res, 1999, 57(5): 663-669.

  [10]陈正跃,张光军,许建文.水飞蓟宾-磷脂酰胆碱复合物的制备及理化性质研究[J].新乡医学院学报,2000,17(4): 237-239.


作者单位:(新乡市第二人民医院,河南 新乡 453002)

作者: 许树兰,李金霞
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