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【摘要】 目的：通过对复融后的冰冻机采血小板的质量研究，为临床正确保存和使用冰冻机采血小板提供依据。方法：冰冻血小板制剂自超低温冰箱取出后，立即浸泡在42 ℃恒温水浴箱中，轻柔的不断的摇动直至完全融解；融解后的血小板制剂于百级净化台用一次性无菌空袋留样3份，其中一份保存于22 ℃，一份保存于4 ℃ 4小时后取出置于室温，另一份保存于4 ℃ 24小时后取出置于室温，分别检测血小板计数、血块收缩试验（血浆法）。结果：冰冻机采血小板复融后置于22 ℃，保存48小时内血小板计数无显著性差异（t＜0.01，P＞0.05 ），其血块收缩试验保存2小时内为80%以上，保存4小时后呈明显下滑。冰冻机采血小板复融后置于4 ℃保存4小时和24小时后取出置于室温，其血小板计数在刚取出时无明显变化，其后血小板数量呈明显减少，取出4小时后血小板数量几乎全部受破坏，血块收缩试验在刚取出时为70%左右，很快呈现明显下滑。结论：冰冻机采血小板复融后最好置于22 ℃保存，越快输注效果越好，尽量缩短运输和保存时间，尽量在复融后2小时内输注完毕，避免低温保存和体外放置时间过长，防止血小板输注无效。
【关键词】 输血；冰冻机采血小板；复融；应用
由于机采血小板制备时间长、费用高且保存期短，近年来开发的用DMSO作冷冻保护剂的冰冻血小板，其止血效果已得到临床证实，其在紧急抢救大出血等危重患者时发挥重要作用，为临床急救赢得宝贵时间［1-3］。如何保证冰冻血小板制剂的质量，如何正确保存和使用冰冻血小板制剂，是冰冻血小板制剂能否发挥其高效止血功能的关键，值得广大输血工作者和临床医护人员的高度重视。
1 材料与方法
1.1 冰冻机采血小板制备
选择符合国家规定体检标准的献血者20例，要求BPC计数≥150×109/L，血块收缩试验（血浆法）＞40%，按操作规程用Trima Accel自动血液收集系统采集机采血小板，每袋血小板含量为（2.5～3.0）×1011 ；以DMSO为冷冻保护剂于百级净化台制备成冰冻机采血小板，置于-80 ℃超低温冰箱保存。
1.2 仪器及试剂
Trima Accel自动血液收集系统（5.0版，Trima公司，美国），血小板恒温振荡保存箱（Forma公司，美国），CELL-DYN 1800血细胞分析仪（雅培公司，美国），ULTRA LOW超低温冰箱（SANYO公司，日本），百级净化台（珠江公司,广州），电热恒温水温箱（康乐公司，上海），定量可调移液器(芬籣)。Trima Accel自动血液收集系统一次性配套管路（批号04N3118，Trima公司，美国），DMSO(批号070608，Y72850，70716, 美国)，0.05 mol/L 氯化钙溶液。
1.3 方法
1.3.1 冰冻血小板制剂自超低温冰箱取出后，立即浸泡在42 ℃恒温水浴箱中，轻柔的不断的摇动直至完全融解；融解后的血小板制剂于百级净化台用一次性无菌空袋留样3份，其中一份保存于22 ℃，一份保存于4 ℃ 4小时后取出置于室温，另一份保存于4 ℃ 24小时后取出置于室温，分别检测血小板计数、血块收缩试验（血浆法）。
1.3.2 血小板计数按CELL-DYN 1800血细胞分析仪标准操作规程进行检测；血小板功能试验采用血块收缩试验（血浆法）［4］。
1.4 统计学处理
1.4.1 血块收缩（血浆法）计算公式［4］：
血块收缩（%）= 析出血清的体积/PRP体积× 100%
1.4.2 检测结果以均数±标准差（x±s）表示，组间比较用t检验进行显著性分析。
2 结果
2.1 冰冻机采血小板复融后置于22 ℃，保存48小时内血小板计数无显著性差异（t＜0.01，P＞0.05 ）见表1；血块收缩试验方面，保存2小时内为80%以上，保存4小时后呈明显下滑，见图1。表1 冰冻机采血小板复融后置于22 ℃保存的血小板变化情况（略）
2.2 冰冻机采血小板复融后置于4 ℃保存4小时后取出置于室温，其血小板计数在2小时内无明显变化，2小时后血小板数量呈明显减少，见表2；血块收缩试验在刚取出时为72.4%，很快呈现明显下滑，见图2。表2 冰冻机采血小板复融后置于4 ℃保存4小时后的血小板变化情况（略）
2.3 冰冻机采血小板复融后置于4 ℃保存24小时后取出置于室温，其血小板计数在刚取出时无明显变化，其后血小板数量呈明显减少，取出4小时后血小板数量几乎全部受破坏，见表3；血块收缩试验在刚取出时为68.5%，很快呈现明显下滑，见图3。表3 冰冻机采血小板复融后置于4 ℃保存24小时后的血小板变化情况（略）
3 讨论
机采血小板的浓度高、纯度也高，止血效果明显，而不良反应较小，已经广泛应用于血液病患者及抢救大出血等危重患者［5-7］。输注机采血小板可有效地预防和治疗出血及血小板减少，常规保存机采血小板较冰冻保存机采血小板对血液病患者具有更好的疗效［8］，冰冻血小板治疗急性出血患者效果优于新鲜血小板，预防性输注效果显著差于新鲜血小板［2］。而有关血小板输注无效（PTR）的情况，已引起国内外有关专家的重视和深入研究；目前认为导致PTR主要有两大原因：① 非免疫性血小板消耗，多发生在脾肿大、发热、感染、出血和DIC（弥漫性血管内凝血）患者中；② 免疫性同种抗体或自身抗体导致血小板寿命显著缩短；还有学者提出血小板贮存损伤也是导致PTR的重要原因；笔者在临床输血工作中发现，当前仍有相当部分临床医护人员，特别是基层医务人员对血小板制剂的认识还很不够，未能正确保存和使用冰冻血小板制剂，也是导致血小板输注无效的一个影响因素，这一情况值得我们重视。
研究表明，血小板计数不能真实反映血小板制品的质量情况，机采血小板在常规或冰冻保存条件下，采用常规的血小板功能评价指标不能真实反映血小板的活化［9］；血块收缩试验是反映血小板功能的重要实验，血块收缩不佳见于血小板无力症、血小板减少症状、低（无）纤维蛋白原血症、严重凝血障碍等［4］。笔者针对冰冻机采血小板复融后在不同保存温度下的血小板计数和血块收缩试验进行研究观察，发现冰冻机采血小板复融后置于22 ℃，保存48小时内血小板计数无显著性差异（t＜0.01，P＞0.05 ）见表1；血块收缩试验方面，保存2小时内为80%以上，保存4小时后呈明显下滑，见图1。冰冻机采血小板复融后置于4 ℃保存4小时后取出置于室温，其血小板计数在2小时内无明显变化，2小时后血小板数量呈明显减少，见表2；血块收缩试验在刚取出时为72.4%，很快呈现明显下滑，见图2。 冰冻机采血小板复融后置于4 ℃保存24小时后取出置于室温，其血小板计数在刚取出时无明显变化，其后血小板数量呈明显减少，取出4小时后血小板数量几乎全部受破坏，见表3；血块收缩试验在刚取出时为68.5%，很快呈现明显下滑，见图3。机采血小板的常规保存条件是22 ℃振荡保存，与本研究结果相符，冰冻机采血小板复融后置于4 ℃保存对血小板的损伤较大，冰冻机采血小板经反复冻融后其寿命已经缩短，不宜在室温长期保存，宜及时输注，以发挥其快速止血功效。
综上所述，笔者认为，冰冻机采血小板复融后最好置于22 ℃保存，越快输注效果越好，尽量缩短运输和保存时间，尽量在复融后2小时内输注完毕，避免低温保存和体外放置时间过长，防止血小板输注无效。
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作者单位：广东省汕头市中心血站，广东 汕头 515064