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关键词 脉通方 糖尿病下肢动脉硬化闭塞症 血栓素A 2 前列环素 内皮素
Effects of Maitongfang on platelet function and femoral artery
endotheliumconformation of DM rats induced by high-sugar，
high-fat and high-cholesterol diet
Qi Luguang，Wang Yongshan，Guan Qingbao，et al.
Chengdu University of Traditional Chinese Medicine，Sichuan610075.
【Abstract】 Objective To investigate the affection of Maitongfang on the early stage of Diabetic lower limbs atherosclerosis obliterans（DLASO），mainly the changes of thromboxane A 2 （TXA 2 ），prostacyclin（PGI 2 ）and plasm Endothelin（ET）.Methods The SD rats were fed with high-sugar，high-fat and high-cholosterol feeding stuff，and then induced by Alloxan intraperitoncally to be diabetic rat models.The rats were randomly divided into five groups，ic.Model control，low dosage of Maitongfang，high dosage of Maitongfang，and Cilostazol group respectively.Normal control group was also established.The effect of different medicines on the following parameters were detected by radioimmunoassay，biochemistrydetect method，Histomorphometry，etc.which were Blood Glucose，TXA 2 ，PGI 2 ，ET and tectology of femoral artery.Results The actions of lowering the level of Blood Glucose and plasm ET and the raˉtio of TXA 2 /PGI 2 were observed.Conclusion Through the action of improving metabolism of Blood Glucose and inˉhibiting platelet aggregation and regulating Vasomotor function，Maitongfang contributes to the prevention and treatment of DLASO by doing intervention job on the very first link of DLASO.
Key words Maitongfang DLASO ET NO
糖尿病下肢动脉硬化闭塞症（DLASO）是糖尿病严重的大血管并发症，临床发展的最终结果往往是因坏疽而截肢。有资料显示，DLASO的发病率比非糖尿病下肢动脉硬化闭塞症的发病率高7～10倍，且发病年龄早、病情进展快、病变更严重，截肢率高 ［1］ 。近年来的研究表明，糖尿病血管并发症的发生与内皮细胞的损伤有关 ［2］ 。血管内皮细胞损伤时，血小板被激活变形，发生粘附、释放、聚集反应，血栓素A 2 （thromboxane A 2 ，TXA 2）、前列环素（prostacyclin，PGI 2 ）和内皮素（endothelin，ET）等分泌失衡，导致血管痉挛、血栓形成与动脉粥样硬化发生 ［3］ 。本文观察了脉通方对高糖高脂高胆固醇饲料喂养的糖尿病大鼠股动脉内皮病理形态以及TXA 2 、PGI 2 与ET水平的影响，为探求脉通方治疗糖尿病下肢动脉粥样硬化的作用机制提供实验依据，现报道如下。
1 材料与方法
1.1 动物 SD大鼠80只，雌雄各半，体重130～150g（70～90日龄），本校动脉实验中心提供。合格证号:川实动管字第008号。
1.2 试剂 Alloxan由美国SIGMA公司生产，批号:A7413。内皮素放免试剂盒由天津九鼎医学生物工程公司提供。6-酮-前列腺1α试剂盒由北京北方生物技术研究所提供。血栓素B 2 试剂盒由北京北方生物技术研究所提供。脉通方煎取液:黄芪、当归、银花藤、泽泻等。西洛他唑片:由中国大冢制药公司生产，规格:50mg/片。
1.3 饲料及饲养环境 高糖高脂高胆固醇饲料配方为10%蔗糖，10%猪油，2.5%胆固醇（购自上海生工生物工程有限公司），由本校动物实验中心配制。普通饲料由本校附属医院动物实验室提供。各组大鼠自由摄食、饮水，雌雄分笼喂养，室温18～22℃，空气流通，相对湿度55%～70%，12h光照维持，昼夜循环。
1.4 方法
1.4.1 造模与分组 大鼠驯化喂养1周，继之喂以高糖高脂高胆固醇饲粒4周，选择体重在180～220g之间，然后禁食12h，Alloxan新鲜配制成2.5%生理盐水溶液，按120mg/kg体重隔日2次腹腔注射，5天后断尾取血，用Sure step plus血糖仪测试血糖，选择血糖值>16.7mmol/L者入选。合格入选的DM大鼠按血糖高低、性别不同，随机分为4组，即糖尿病模型对照组、中药低、高剂量组、西洛他唑对照组，另设正常对照组，每组10只。
1.4.2 给药方法 造模成功后，中药低剂量组与高剂量组分别按照2.9g/kg体重、14.5g/kg体重予中药煎取液灌胃，即相当于临床成人剂量与5倍成人剂量;西药对照组予西洛他唑混悬液，按1.67g/kg体重灌胃，相当于临床成人剂量;模型对照组与正常对照组灌胃同体积的生理盐水。每周测1次血糖，称1次体重，根据体重调整给药剂量。
1.5 观察指标及检测方法
1.5.1 血糖 大鼠断尾取血，用美国强生公司生产的Sure step plus血糖仪测试血糖。
1.5.2 内皮素 造模8周后，大鼠内眦静脉取血2ml，放入已含有7.5%EDTA·Na 2 30μl和抑肽酶40μl的试管中混匀，4℃3600rpm离心10min，分离血浆，-20℃保存。测定前，使样本置于室温或冷水中复融，再次4℃3600rpm离心5min，取上清测定。
1.5.3 TXA 2 、PGI 2 测定 造模8周后，大鼠内眦静脉取血1.5ml，放入已含有EDTA抗凝剂的试管中，抗凝剂与血量之比为1:9。轻摇，混匀，迅速离心（3500r/min，15min），取上清。由于TXA 2 、PGI 2 在血中极不稳定，半衰期很短，一般通过测定二者稳定的代谢产物血清TXB 2 、6-Keto-PGF1 来反映。
1.5.4 股动脉病理组织学检测 各组大鼠处死后，取出距左侧髂股动脉分叉处之远端5～10mm的股动脉，剔除肌肉、筋膜等软组织，用生理盐水冲洗，放入10%中性福尔马林试管中，原位固定48h，逐级酒精脱水，二甲苯透明，浸蜡石蜡包埋，常规切片4μm。分别做HE及Masson染色，做光 镜检查。
1.6 统计处理 所有数据均用统计软件SPSS11.0进行统计学处理，各项指标结果以ˉx±s表示，组间比较采用t检验。
2 结果
2.1 大鼠血糖变化 用药4周后，与正常组相比的其余各组血糖水平仍然很高（P<0.01），与模型组差异无显著性。用药8周后，中药治疗组血糖均明显降低，与模型组相比差异有极显著性（P<0.01），但与正常组相比仍有差异，低剂量组差异较大（P<0.01），高剂量组差异较小（P<0.05）。西药组血糖值与模型组相比差异无显著性（P>0.05），见表1。
表1 不同病程中大鼠血糖的比较 （mmol/L，ˉx±s）
2.2 对血小板功能的影响 与正常组相比，模型组TXB 2 含量明显升高（P<0.05）;较之模型组，中药高剂量组、西药对照组TXB 2 水平显著降低（P<0.05），接近于正常对照组（P>0.05）;西药组与中药高剂量组之间差异无显著性（P>0.05）。与模型组相比，仅西药组可明显提高6-Keto-PGF 1a 水平（P<0.05）;中药低、高剂量组虽在一定程度上使血6-Keto-PGF 1a 含量有所上升，但差异无显著性（P>0.05）;除此之外，各组之间差异均无显著性（P>0.05），见表2。
表2 各组大鼠血清TXB 2 、6-Keto-PGF 1a 水平的比较 （pg/ml，ˉx±s）
2.3 大鼠血浆内皮素水平与正常组相比，模型组血浆ET水