龙眼参粗多糖抗衰老作用的实验研究

关键词 龙眼参多糖 抗衰老

The experimental study of LYS polymaccharides on anti-aging

Huang Zhongshi，Huang Renbin，Lin Xing，et al.

The Biochemistry of Youjiang Medical College for Nationalities，Guangxi533000.

【Abstract】 Objective To study the anti-aging effects and mechanism of LYS polymaccharides on mice.Methods LYS polymaccharides were isolated from Millettia Pulcha Kurz vur，Laxior（Dunn）Z.Wei.After the mice were treated P.O with LYS polymaccharides0.425g/kg，0.85g/kg，1.70g/kg for8days continually，the effects of the swimming time，resist anoxic time and resist heat time were investigated，theactivity of serum SOD and GSH-Px and the content of MDA were determined.ResultsLYS polymaccharides could obviously prolong the swimming time，resist anoxic time and resist heat time，increase the activity of serum SOD and GSH-Px and decrease the con_ˉtent of MDA.Conclusion LYS polymaccharides has anti-aging effects.

Key words LYS polymaccharides anti-aging

龙眼参（LYS）为碟形花科植物疏叶崖豆［Millettia Pulcha Kurz vur，Laxior（Dunn）Z.Wei］的块根，生长于山坡、荒地阳光充足的地方，主要分布于广西、广东等地，是广西壮族习用药材，具有补气、补血、提高免疫力、抗衰老、抗应激、改善大脑记忆等功能，用于治疗老年健忘、小儿智力低下、强身健体消除疲劳、体弱多病及病后、产后虚弱等 ^［1］ 。龙眼参成分复杂，其主要活性成分有多糖、氨基酸、苷类等 ^［2］ 。本研究从龙眼参提取其多糖成分，并进行了抗衰老作用实验，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 龙眼参粗多糖的提取 取一定量的龙眼参干片，加5倍体积的水浸泡1h后煮沸，再改用微火煮1h，连续提取3次，合并滤液，3000r/min离心10min，经纱布过滤，并于旋转蒸发器减压浓缩，置冰箱中放置（4℃）24h以上，离心除去沉淀，加大约5倍量的95%乙醇于提取液中，使乙醇终浓度为80%，静置24h。抽滤，收集药渣，再用无水乙醇、丙酮洗涤5次，定性测定药渣仅含多糖和蛋白质，用Sevage法去除蛋白（加氯仿-正丁醇4:1）进行回流45min，然后抽滤，弃去滤液，该操作重复约5次，上清液用蒸馏水透析48h，除去小分子杂质及色素，透析后浓缩至适当体积，加5倍无水乙醇，醇析多糖，水溶解后再醇析，重复3次，直至紫外分析无280nm、260nm杂蛋白和核酸吸收峰为止，过滤，收集沉淀物，真空干燥得白色龙眼参粗多糖。收率为0.30%。

1.1.2 试剂与仪器 试剂:SOD、MDA、GSH-Px测试盒由南京建成生物工程研究所提供。仪器:RE-52AA旋转蒸发器，DZF-250型真空干燥箱，TU-1800SPC紫外可见分光光度计，RA-50半自动化分析仪。

1.1.3 动物 昆明种小鼠，雌雄各半，体重20±2g，由广西医科大学实验动物中心提供（许可证号:桂动许字2000第001号）

1.2 方法

1.2.1 动物分组及给药方式 将动物随机分为对照组和3 个实验组，每组10只，实验组分别以0.425g/kg、0.85g/kg、1.70g/kg剂量给予龙眼参粗多糖。实验组按剂量用生理盐水稀释龙眼参粗多糖，以0.25ml/10g灌胃，1天1次;对照组按等量生理盐水灌胃，连续8天，于末次灌胃2h后进行下列实验。

1.2.2 动物实验 （1）游泳实验:将小鼠尾部束一重物（体重的10%）放入一水深20cm，水温30±1℃的玻璃缸内，以小鼠体力耗竭（小鼠头部沉入水中10s不能浮出水面）为指标，记录小鼠生存时间。（2）耐缺氧实验:将小鼠放入250ml的广口瓶内，每瓶1鼠，瓶内装有10g无水氯化钙，用凡士林涂抹瓶口，盖严密封，立即记时，以呼吸停止（小鼠胸部不起伏）为指标，记录小鼠存活时间。（3）耐高温实验:将小鼠放入50±1℃的恒温箱中的玻璃缸内，以小鼠呼吸停止为指标，记录小鼠存活时间。（4）生化指标测定:于末次给药2h后眼眶取血，3000prm离心10min，取上层血清按试剂盒操作说明测定其SOD、GSH-Px和MDA含量。

2 结果

2.1 多糖提取的结果 龙眼参经上述提取，沉淀，抽滤，洗涤及真空干燥后得到的粗多糖，用费林反应及茚三酮反应实验均不产生颜色变化。而将样品在1mol/L H ₂ SO ₄ 封管100℃水解6h后，再做该二项测定，明显出现砖红色沉淀，无紫色反应。说明该多糖经过反复去蛋白、醇沉、洗涤后，去除了蛋白质、氨基酸、单糖、双糖及小分子杂质。薄层分析结果表明龙眼参多糖是由鼠李糖、葡萄糖组成的多糖。紫外光谱分析结果见图1:在260nm和280nm处未见吸收峰，说明样品中不含蛋白质和核酸。

图1 龙眼参多糖紫外光谱分析结果

2.2 游泳实验 结果见表1。

表1 龙眼参多糖对小鼠游泳时间的影响

注:与对照组比较 ˇ P<0.05， ˇˇ P<0.01（t检验，下同）。

2.3 耐缺氧时间 结果见表2。

表2 龙眼参多糖对缺氧小鼠存活时间的影响

2.4 耐高温实验 结果见表3。

表3 龙眼参多糖对小鼠耐高温时间的影响

2.5 生化指标 结果见表4。

表4 龙眼参多糖对小鼠血清SOD、GSH-Px及MDA的影响

3 讨论

多糖具有广泛的药理作用。如作为免疫调节剂，激活巨噬细胞、T淋巴细胞、LAK细胞等多种免疫细胞，促进细胞因子生成，活化补体;抗肿瘤、抗病毒、抗感染、抗消化性溃疡、抗氧化、防衰老、降血糖血脂等，而且毒性相对较低，因此越来越受到研究人员的重视 ^［3］ 。本研究从龙眼参中提取的多糖成分，具有很强的抗疲劳抗衰老作用，它能显著地延长小鼠负重游泳时间，缺氧小鼠的存活时间及耐高温时间，与正常对照组比较，差异均具有显著性（P<0.05），提示龙眼参多糖能使脑的耗氧量减少，增强脑组织的耐缺氧能力，增强体力等作用。

衰老的机制很多，其中自由基理论认为:随着年龄的增长，机体抗氧化酶活性不断下降，导致体内氧自由基不能及时清除，生成过氧化脂质等过氧化物，从而引起细胞的衰老和死亡，加速机体的衰老 ^［4，5］ 。超氧化物歧化酶（SOD）是体内清除自由基的重要抗氧化酶，可以保护细胞免受损伤，谷胱甘肽过氧化物酶是机体广泛存在的一种重要的催化H ₂ O ₂ 分解的酶，它特异地催化还原型谷胱甘肽对H ₂ O ₂ 的还原反应，可以起到保护细胞膜结构和功能完整的作用。MDA是过氧化脂质的降解产物，其含量与细胞损伤的程度呈正相关，本研究通过对小鼠血清SOD、GAH-Px及MDA测定，结果表明龙眼参多糖具有提高小鼠血清SOD、GAH-Px，减少MDA含量的作用，能较好地清除氧自由基，对防止细胞损伤、延缓衰老具有较好的作用。

参考文献

1 孔晓龙，蒋伟哲，黄仁彬，等.龙眼参对自发性高血压大鼠和SD大鼠血压的影响.中草药，2001，32（8）:727.

2 张靖贤，孔晓龙，蒋伟哲.龙眼参中多糖的含量测定.中国现代应用药学杂志，2002，19（2）:108.

3 周林珠，杨祥良，周井炎，等.多糖抗氧化作用研究进展.中国生化药物杂志，2002，23（4）:210.

4 马岩，尹若峰，李晓林.凤尾菇水溶性多糖抗衰老作用比较研究.吉林医学，2003，24（2）:154.

5 蒋伟哲，孔晓龙，段小群，等.龙眼参对机体氧自由基清除作用的研究.中国药房，2001，12（8）:453.

 作者单位:533000广西右江民族医学院生化教研室