超细三七粉胶囊的安全性毒理学评价

    【摘要】 目的 研究超细三七粉胶囊作为保健食品的安全性。方法 通过急性毒性试验，Ames试验，小鼠骨髓微核试验，小鼠精子畸形试验、30天喂养试验，观察超细三七粉胶囊的毒理作用。结果 雌雄大、小鼠急性经口LD 50  >10000mg/kg体重，属无毒级;Ames试验、小鼠骨髓微核试验和精子畸形试验等3项遗传毒性试验结果均为阴性;30天喂养试验未见有明显毒性。结论 超细三七粉胶囊无明显毒性，符合保健食品的安全性要求。

    关键词 超细三七粉 微核 精子畸形 Ames试验

    Toxicological assessment of superfine powder  capsule of radix notoginseng 

    Cui Xiuming，Ke Jinhu，Zhu Yan，et al.

    Wenshan Prefecture Sanqi Research Institute，Yunnan663000.

    【Abstract】 Objective To evaluate the edible safety of superfine powder of radix notoginseng as health food.Methods Genetic toxicity test、acute toxicity test and thirty days feeding tests were performed.Results The oral LD 50  in mice or rats was greater then10000mg/（kg.bw）and belonged to the nonpoisonous.The negative results were obtained in yenetic toxicity test，including Ames test，Micronucieus test and Sperm shape abnormality test.There was no singnificant toxicity observed in thirty days feeding tests.Conclusion Superfine powder capsule of radix notoginˉseng is edible.

    Key words superfine powder of radix notoginseng micronucieus sperm shape abnormality ames test  

三七Panax notoginseng（Burk）F.H.Chen是我国名贵中药材，具有活血化瘀、消肿定痛、免疫调节等多方面的药理作用 ［1，2］  。近年来，三七逐步应用于保健食品的开发。三七粉是传统的饮片剂型，随着超细技术粉碎技术在中药材加工上的应用，我们拟将其应用于三七保健食品的开发。据报道，超细三七粉具有色泽好 ［3］  ，有效成分溶出度高 ［4］  ，吸收效果好 ［5］  等特点。为了进一步开发三七的保健食品，我们根据国家《食品安全性毒理学评价程序和方法》 ［6］  ，通过急性毒性试验、遗传毒性试验、30天喂养试验和传统致畸试验对超细三七粉胶囊进行安全性毒理评价，为其保健食品开发提供依据。

    1 材料与方法

    1.1 仪器与试剂 电子秤（TCS-500），电子分析天平（AE-240），721分光光度计。

    1.2 药物 超细三七粉胶囊，浅黄色粉状物，人体推荐剂量为5g/（人·d），由云南文山赛参生物科技公司提供。各试验均用蒸馏水作溶剂。

    1.3 实验动物 昆明种小白鼠，由中科院昆明动物研究所提供（动物合格证号:滇实动证第9712号，普通级）。Wistar大白鼠，由中科院昆明动物研究所提供（动物合格证号:滇实动证第9714号，普通级）。实验菌株，Salmonella typhimuriˉum组氨酸基因缺陷型测试菌株，由美国加利福尼亚大学Ames实验室提供。

    1.4 方法

    1.4.1 急性毒性试验 （1）小鼠急性毒性试验:昆明种小白鼠，动物体重18～22g，50只，雌雄各半。随机分5组，每组雌雄各5只。霍恩氏法，剂量系列为10000、4640、2150、1000、464mg/kg。灌胃前16h禁食，饮水不限，至第2天以0.2ml/10g小鼠体重一次经口灌胃，观察14天，记录动物所出现症状及死亡情况。（2）大鼠急性毒性试验:Wistar大白鼠，动物体重180～220g，50只，雌雄各半。随机分5组，每组雌雄各5只。霍恩氏法，剂量系列为10000、4640、2150、1000、464mg/kg。灌胃前16h禁食，饮水不限，于第2天以2ml/100g。大鼠体重一次经口灌胃，观察14天，记录动物所出现症状及死亡情况。

    1.4.2 遗传毒性试验

    （1）Ames试验:平板参入法。试验设5000、1000、200、40、0.2μg/皿5个剂量组和自发回复突变组、溶剂对照组、阳性对照组。阳性剂为:NaN3，2-AF，9-芴酮，MMC，1，8-二羟蒽醌。（2）小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验:昆明种小白鼠，由中科院昆明动物研究所提供（动物合格证号:滇实动证第9711号，普通级）。动物体重26～30g，60只，随机分6组，每组10只，雌雄各半。设剂量组为5000，2500，1250、625（mg/kg.bw），另设阴性对照组和阳性对照组。采用30h二次灌胃法（阳性对照为环磷酰胺40mg/（kg·bw）腹腔注射一次，阴性对照蒸馏水灌胃）。于第2次灌胃后6h断颈法处死动物，取胸骨骨髓常规制片镜检。每只小鼠计数1000个嗜多染红细胞（PCE）中的微核数。（3）小鼠精子畸形试验:昆明种小白鼠，由中科院昆明动物研究所提供（动物合格证号:滇实动证第9711号，普通级）。动物体重25～30g，25只，随机分为5组。设剂量组为5000、2500、1250mg/（kg·bw）另设阴性对照组和阳性对照组。阳性对照为环磷酰胺50mg/（kg·bw）腹腔注射，每天1次，连续5天。阴性对照组蒸馏水灌胃。各剂量组连续灌胃染毒5天，第35天处死动物，取双侧附睾常规制片镜检。每只小鼠镜检1000条精子，记录畸形精子和畸形类型。

    1.4.3 30天喂养试验 SD大白鼠，由昆明医学院重点药物实验室提供（动物合格证号:滇实动证第9805号，清洁级）。动物体重59～65g，80只，随机分为4组，每组20只，雌雄各半。设剂量组为8340、2500、625mg/（kg·bw）（分别相当于人体推荐剂量的100倍，30倍，7.5倍），另设阴性对照组。动物适应性喂养4天后，每天按2ml/（100g·bw）经口灌胃给予受试物，阴性对照给予蒸馏水。自由摄食、饮水，记录食物消耗量，每周称重。给受试物的第30天，称取末体重，取血做血液细胞学和血液生化学分析。处死动物并称取肝、肾重量，并取肝、肾、胃、肠等脏器固定做组织病理学检查。

    1.4.4 传统致畸试验 Wistar大白鼠。雌性大鼠体重范围220～297g。选用性成熟大鼠按雌雄性别1:1比例合笼配对。次日晨检查阴栓和精子，从发现阴栓和精子之日为妊娠0天，将受孕动物随机分为4组，每组12只。设剂量组为8400、2500、625mg/（kg·bw）（相当于人体推荐剂量的101倍，30倍，7.5倍），另设一阴性对照组。于受孕第7～16天，每天经口给予受试物，阴性对照组给予蒸馏水，受孕第0、7、12、16、20天分别称重并记录。于受孕第20天处死动物，称子宫重，并检查记录胚胎外观、活胎数、吸收胎数、死胎数、胚胎体重体长等。每窝的1/2活胎固定处理待胎鼠内脏检查，1/2固定处理待胎鼠骨骼检查。

    1.4.5 实验数据统计 精子畸形和微核采用χ 2 检验。30天喂养实验和传统致畸试验采用t检验、χ 2 检验及方差分析。

    2 结果

    2.1 急性毒性试验

    2.1.1 小鼠急性毒性试验 通过14天的观察，各剂量组均未见试验动物发生中毒和死亡情况（见表1），LD 50  >10000mg/kg，依毒性分级超细三七粉胶囊属实际无毒。

    表1 超细三七粉胶囊对小鼠经口急性毒性试验结果(略)

     2.1.2 大鼠急性毒性试验 在观察期间，未见试验动物发生中毒和死亡情况（见表2），LD 50  >10000mg/kg，依毒性分级超细三七粉胶囊无任何毒性。

    2.2 遗传毒性试验

    2.2.1 Ames试验 超细三七粉胶囊各剂量组对鼠伤寒沙门氏菌TA97、TA98、TA100、TA102试验菌株未呈现诱发组氨酸缺陷基因回复突变的能力。

    2.2.2 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验 各试验组微核细胞率与阴性对照组比较差异无显著性（P>0.05），阴性对照组与阳性对照组比较差异有显著性（P<0.01）。

    2.2.3 小鼠精子畸形试验 各试验组精子畸形率均小于阴性对照组，各剂量组间无剂量反应关系。试验结果表明，超细三七粉胶囊的三项遗传毒性试验结果均为阴性。

    表2 超细三七粉胶囊对大鼠经口急性毒性试验结果（略）

    2.3 30天喂养试验 30天喂养试验以8340、2500、625mg/（kg·bw）剂量喂食动物，在观察期内，各组动物生长发育良好，血常规、血生化指标在正常值范围内，各脏器系数未见异常，肝、肾、胃、肠等脏器病理组织学观察未见有意义的病理改变。

    2.4 传统致畸试验 以8400、2500、625mg/（kg·bw）剂量进行致畸试验，观察期内各组孕鼠体重增长正常，胎鼠形成、骨骼发育、内脏形成无异常改变。说明在本试验条件下超细三七粉胶囊无致畸作用。

    3 讨论

    上述试验结果表明，超细三七粉胶囊无明显毒副作用，符合国家保健食品的安全要求，与已有对三七毒性研究的结果相符 ［7］  。由于超细三七粉胶囊方便加工，又可提高其生物利用度，不仅可作为保健食品进行开发，还可作为三七的新型饮片剂型使用。

    参考文献

    1 奉建芳.三七的药理研究进展.福建中医药，1991，22（5）:45-48.

    2 王嘉明，白丰沛，陈志，等.三七对小鼠免疫功能的影响.中国医药学报，1989，4（4:29-30.

    3 李春华，林强，裴重华.中药三七的超细粉碎工艺与产品物性研究.中国粉体技术，2001，7（6）:20-23.

    4 刘产明，杨洪员.不同粉碎度三七体外溶出试验.中成药，1998，20（2）:17-18.

    5 陈旭.三七超微粉碎对生物体内吸收影响的初步试验.西北药学杂志，2002，17（5）:203.

    6 中华人民共和国卫生部.食品安全性毒理学评价程序和方法，GB15193.1-15193.19-94.

    7 魏均娴，杜元冲.三七—现代科学研究及应用，昆明:云南科技出版社，1996，414.

    （收稿日期:2003-12-16） （编辑夫 凡）

    作者单位:663000云南省文山州三七研究所
                  云南省文山赛参生物科技公司