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【摘要】 目的 探讨甘麦大枣汤及其加味方对嗅球摘除所致抑郁症大鼠行为学及海马氨基酸类递质含量的影响。方法 采用嗅球摘除的方法制造抑郁症大鼠模型，对模型大鼠分别灌服甘麦大枣汤及其加味方，并进行旷场行为测定、糖水消耗试验以及HPLC荧光法测定海马氨基酸类递质含量。结果 模型组水平运动显著增加（P<0.05），糖水消耗显著减少（P<0.01），海马Asp含量显著下降（P<0.05）。各用药组与模型组比较，水平运动减少，糖水消耗显著增加（P<0.01），并接近于正常组;疏肝组Asp含量显著低于正常（P<0.05），化痰组、疏肝组γ-GABA/GLu比值下降。结论 甘麦大枣汤及其加味方能够纠正嗅球摘除所致抑郁症模型大鼠行为学变化，但不同加味药对氨基酸类递质含量的影响存在不同。
关键词 甘麦大枣汤 抑郁症 行为学 氨基酸类神经递质
Effects of Ganmai Dazao Decoction on behaviors and amino acid
neuro-transmitters in olfactory bulbectomized rat model of depression
Zhang Xueli，Jin Guoqin，Dai Weiwei，et al.
Department of Biochemistry，College of Basic Medicine，Shanghai University of TCM，Shanghai200032.
【Abstract】 Objective To study effects of Ganmai Dazao Decoction（GDD）on behaviors and amino acid neuro-transmitters in olfactory bulbectomized rat model of depression.Methods A depression rat model was produced by olfactory bulbectomy，GDD and its supplemented recipes were feed to different rat groups.Behaviors of rats were deˉtected by open-field test and sucrose consumption test，concentrations of amino acid neurotransmitters were measured by HPLC.Results Comparing with normal group，scores of ambulation increased significantly（P<0.05），while suˉcrose consumption（P<0.01）and concentrations of Asp in hippocampus（P<0.05）lowered significantly in model group.In different groups feed drugs，scores of ambulation decreased，sucrose consumption increased significantly（P<0.01）and was access to normal group，concentrations of Asp in group feed liver clearing drugs lowered significantly（P<0.05），γ-GABA/Glu decreased in group feed phlegm-reducing drugs and group feed liver clearing drugs.Conclusion Supplemented GDD can correct behavioral changes in rat model of depression，but the mechanism of different supplemented recipes may be different.
Key words Ganmai Dazao Decoction depression behavior amino acid neuro transmitter 甘麦大枣汤源自汉代医圣张仲景的《金匮要略》，系治疗脏躁之名方。脏躁之病与现代的抑郁性疾病相接近。本研究以嗅球摘除所致抑郁症大鼠为模型，探讨甘麦大枣汤及其加味方对抑郁症大鼠行为学及海马氨基酸类神经递质含量的影响。
1 材料和方法
1.1 药物制备 甘麦大枣汤方药由甘草、淮小麦、大枣组成，甘麦大枣汤加化痰活血祛瘀方药由甘草、淮小麦、大枣、菖蒲、远志、丹参等组成，甘麦大枣汤加疏肝理气解郁方药由甘草、淮小麦、大枣、柴胡、郁金、知母等组成。方药制成煎剂，临用稀释。
1.2 大鼠分组及喂药 选用清洁级SD雄性大鼠，体重约200g，随机分为5组:（1）正常对照组;（2）嗅球摘除模型组（模型组）;（3）模型+甘麦大枣汤组（甘麦组）;（4）模型+甘 麦大枣汤+化痰组（化痰组）;（5）模型+甘麦大枣汤+疏肝组（疏肝组）。其中（3）、（4）、（5）组按体重比为正常人的10倍剂量灌服药液，每日1次。
1.3 大鼠造模 参照文献［Pharmacol Biochem Behavior，1997，58（2）:355］，稍加改进。大鼠用2%（W/V）戊巴比妥麻醉，暴露头颅骨，于嘴侧至前囟5mm、离中线外侧2mm处（相当于两眼眶后缘处），左右钻2个直径为2mm的洞，用吸气泵小心吸出双侧嗅球。用海绵堵塞洞口止血，将土霉素粉末撒在伤口上直至闭合。
1.4 旷场行为测定（Open-field test） 参照文献［Pharmacol Bioche Behav，1997，58（2）:355］，将大鼠置于高40cm、直径80cm、周壁为黑色、底面被分成面积相等的25块组成的旷场里，试验室内隔音，60W灯泡光照，观察每只大鼠3min内水平活动和垂直运动得分。
1.5 糖水消耗实验 参照文献［Psychopharmacology，1987，93:358-364］，计算动物24h饮用1%蔗糖溶液的量。
1.6 海马氨基酸类递质含量测定 大鼠海马匀浆，取上清液，应用Waters600高效色谱仪、Waters474荧光检测仪进行检测，控制色谱分析软件Millennium32分析检测结果并折算成含量。
1.7 统计学处理 应用SPSS10.0软件进行数据分析，以 ˉx±s表示，组间差异用t检验。
2 结果
2.1 行为学变化 见表1。表1 行为学变化比较 （ˉx±s）组别 n 敞箱试验（次/3min）(略)
由表1可知，与正常对照组比较，模型组水平运动显著增加，糖水消耗显著减少;各用药组与模型组比较，水平运动减少，糖水消耗显著增加并接近于正常组。
2.2 海马氨基酸递质含量变化 见表2。
表2 海马氨基酸递质含量（μmol/g湿重组织）变化比较（ˉx±s）(略)
由表2可知，与正常对照组比较，模型组海马Asp含量显著下降;疏肝组Asp含量显著低于正常组，化痰组、疏肝组γ-GABA/Glu比值下降。
3 讨论
抑郁症发病机制复杂，单纯某一药物很难达到满意疗效，且副作用多，需针对发病不同而采取不同治疗手段，中医辨证论治不失为一较好方案。抑郁症属中医郁证范畴，中医对郁证的认识与治疗，几千年来积累了丰富的经验。当代名老中医胡建华教授在总结前人经验的基础上，结合自己50余年的临床经验，临证以甘麦大枣汤为基础加入菖蒲、远志、丹参或配伍柴胡、郁金、枳壳，分别治疗抑郁兼夹痰浊、血瘀之证，抑郁兼夹气滞之证，多年临床应用表明疗效显著。因此我们采用抑郁症动物模型，对此有效方进行动物实验研究，以期为中医药辨证论治在抗抑郁方面的临床运用奠定实验基础。
有关抑郁症动物建模的方法有很多，如强迫游泳、孤养、冷冻、电击、嗅球摘除或利血平化等。由于嗅球是与大脑边缘系统有密切联系的脑分区 ［1］ ，嗅球的摘除可直接影响大鼠边缘系统———额皮层、海马、杏仁核和下丘脑等脑区神经化学物质的变化，引起神经内分泌、免疫等功能紊乱，产生与抑郁症病理特征十分相似的病理变化，而且还出现与临床抑郁症患者类似的诸如活动、摄食、进取性、兴趣、快感和奖赏性等行为学异常 ［2～4］ 。因此，近年来认为，嗅球摘除大鼠是较理想的抑郁症动物模型 ［2，5］ ，常用来评价抗抑郁药的作用。本研究证实嗅球摘除大鼠出现水平运动显著增加、糖水消耗显著减少等行为学异常。 有关引起抑郁症的生物学病因，多年来国内外学者进行了大量的研究工作。研究表明抑郁症患者除脑内单胺类递质失衡、递质受体基因表达异常外，其氨基酸类递质含量及基因表达也存在异常现象 ［6～8］ 。本研究证实抑郁症模型大鼠海马Asp含量显著下降。
研究表明，灌喂甘麦大枣汤或其加味方对嗅球摘除大鼠行为学异常有不同程度的纠正，如水平运动减少、糖水消耗接近正常，但不同加味药对氨基酸类递质含量的影响存在不同。化痰组、疏肝组γ-GABA/Glu比值下降，即用药造成大鼠γ-GABA转化率降低，这可能与方药对抑郁症大鼠异常行为纠正相关。
应该看到，抑郁症发病机制复杂，牵涉到众多递质，这些递质可能形成一个相互影响的网络。中医方药可能对这一网络多个节点存在作用，从而达到抗抑郁效果。本研究结果显示疏肝组Asp含量和模型组一样显著低于正常，但行为学表现却趋向正常，表明疏肝方药可能通过影响Asp以外节点，而使网络趋于平衡;而化痰方药的影响节点则不同于疏肝方药。抑郁症复杂发病机制给其治疗带来很大困难，中医方药的多节点调节可为抗抑郁治疗提供一条新思路。
参考文献
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基金项目:上海市教委青年基金资助项目（No.2000QN91）
作者单位:200032上海中医药大学基础医学院生化教研室
上海中医药大学附属龙华医院