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【摘要】 目的 研究猴菇菌丝体的水溶性多糖化学结构。方法 采用DEAE纤维素和sephadex柱分离纯化，通过理化常数、化学和光谱分析研究其化学结构特征。结果 从猴菇菌丝体中分离得到5个多糖均一体，其成分HEPb分子量5.3×10 4 ，为以葡萄糖为主的杂多糖，HEPc分子量3.7×10 4 ，为杂多糖肽，均一体单糖间的苷键构型均以α-苷键为主。结论 猴菇菌水溶性多糖由5个多糖均一体构成。其中HEPb及HEPc均为杂多糖。
关键词 猴菇菌丝体 杂多糖 多糖肽
Study on chemical composition of water soluble polysaccharide from Hericuim Erinaceus
Zeng Xianping
The People’s Hospital of the Autonomous District in West of Hunan Province，Jishou416000.
【Abstract】 Objective To study the chemical composition of water soluble polysaccharide constituents in Herˉicuim Erinaceus.Methods Individual constituent was isolated and purified by DEAE-cellulose and sephadex chroˉmatography，and its structural features were further studied by physicochemical constants，and spectral analysis.Reˉsults Five polysaccharides were obtained from Hericuim Erinaceus.The molecular mass of two polysaccharides named HEPb and HEPc was5.3×10 4 and3.7×10 4 ，respectively.HEPb and HEPc were complex heteropolysacˉcharide and glycopeptide，respectively.They were mainly composed of glucose.Conclusion The composition of polysaccharides HEPb and HEPc obtained from Hericuim Erinaceus is reported for the first time.
Key words mycelium of Hericuim Erinaceus heteropolysaccharide glycopeptide
猴头系多孔菌目齿菌科真菌，临床应用猴头子实体及菌丝体提取物治疗消化性溃疡、萎缩性胃炎、肝炎及癌症辅助治疗均有较好效果 ［1］ 。文献报道猴头的化学成分主要为多糖类、萜类及其苷类、蛋白质、氨基酸及苯骈吡咯酮衍生物等。药理研究证明猴菇菌丝体多糖具有显著的免疫调节作用，和抗癌作用 ［2～4］ 。因此研究猴菇菌丝体多糖具有重要的临床意义。我们从猴菇菌丝体中分离得到5个多糖均一体，对其中HEPb及HEPc的理化性质、化学组成及结构进行了测定。
1 材料与仪器
猴菇菌丝体由烟台生物技术研究所提供，为人工深层发酵培养，经烟台生物技术研究所鉴定为Hericuim Erinaceus（BullexFr）Pers。各单糖标准品均购自Sigma公司，纯度均大于99%。Bruker IFS66V型红外扫描仪（KBr压片），岛津shiˉmadzu GC-9A气相色谱仪，日立835-50型氨基酸自动分析仪，国产721分光光度计。DEAE-cellulose（Budapest Hunˉgary产品），标准Dextran及Sephadex G50，G100（Pharmacia产品），试剂均为国产分析纯。
2 实验方法
2.1 多糖的提取、分离、纯化 猴菇菌丝体粗粉研细、过筛，取1000g，热水提取5次，离心，收集上清液，减压浓缩，乙醇沉淀过夜，离心收集沉淀。沉淀溶于水，水溶液逆向流水透析，Sevag法除蛋白质，加与溶液等体积乙醇沉淀，沉淀物依次以乙醇、丙酮洗涤，得总多糖HEP。HEP溶于水，硼酸型DEAE-cellulose柱（3.2cm×100cm）分离，依次用水、0.01～0.05mol/L硼砂及0.05mol/L氢氧化钠梯度洗脱，蒽酮试剂比色测定，合并各组分;氢氧化钠洗脱部分以氧化还原法脱色，透析，再经Sephadex G50柱，蒸馏水洗脱，脱盐。各组分浓缩，冷冻干燥。水洗脱部分得HEPa、HEPb;硼砂洗脱部分得HEPc;氢氧化钠洗脱部分得HEPd、HEPe。对HEPb和HEPc进行组成结构鉴定。
2.2 纯度及分子量测定
2.2.1 纯度测定 1mg各多糖水溶解，上样于0.1%氯化钠平衡的Sephadex G150柱（1cm×40cm），0.1%氯化钠洗脱，流速0.5ml/min，蒽酮试剂比色测定。
2.2.2 分子量测定 Sephadex G150柱（50cm×1cm）用0.1%氯化钠溶液平衡3d，流速3ml/h，测得各已知标准分子量Dextran（49.4×10 4 ，22.1×10 4 ，7.9×10 4 ，4.0×10 4 ，1.0×10 4 ）流出体积V e ，及蓝葡聚糖（200×10 4 ）流出体积V o ，得V e /V o 对logW的标准曲线。HEPb和HEPc各1mg，按标准品法上样，洗脱，得V e 值，由标准曲线测定各分子量。
2.3 结构测定 ［5］
2.3.1 糖组分分析 气层条件SE-54（30m×0.25mm）柱，载气N 2 ，196kPa，柱温150℃～230℃，FID检测器，气化温度250℃。各多糖约15mg，加1mol/L硫酸2ml，充氮气后封管，100℃加热14h，除硫酸，浓缩，水解产物及单糖标准品分别制成糖醇乙酸酯衍生物，测得各均一体单糖及标准单糖的糖醇乙酸酯保留时间及单糖组成的GC峰面积比。
2.3.2 糖苷键构型测定 （1）酶化学法:β-苦杏仁苷酶水溶液，分别加入各均一体溶液中，以龙胆双糖为阳性对照，35℃～37℃酶解72h，酶解产物以纸色谱检识［溶剂系统:①正丁醇∶醋酸∶水（4∶1∶2）;②乙酸∶乙酯∶吡啶水（2∶1∶2），显色剂草酸苯胺试剂］。（2）红外光谱扫描:扫描波长为:800～4000nm。
2.3.3 肽多糖的氨基酸分析 各多糖1mg，加稀盐酸溶解，充N 2 气，封管，110℃水解24h，反应液蒸干，氨基酸自动分析仪测定。
3 结果
3.1 纯度及分子量测定 HEPb和HEPc分子量分别为53200和37400。以洗脱液收集的管号为横坐标，吸收值为纵坐标画洗脱曲线见图1、图2，HEPb和HEPc的洗脱曲线都只有一个单峰，可视为纯品。
3.2 糖组分 见表1。
图1 HEPb在Sephadex G150柱上的洗脱曲线 略
图2 HEPc在Sephadex G150柱上的洗脱曲线略
表1 各多糖水解物糖醇乙酸酯的GC分析 （略）
3.3 糖苷键构型 酶水解结果显示HEPb有阿拉伯糖单糖斑点，HEPc有甘露糖单糖斑点。此说明HEPb的糖键中至少有部分阿拉伯糖以β-苷键相连;HEPc的糖键中至少有部分甘露糖以β-苷键相连。
红外光谱:HEPb除多糖吸收峰外，有845cm -1 吸收，为α-吡喃环CH变角振动;HEPc除多糖吸收峰外，有1630cm -1 吸收，为酰胺键的伸缩振动，有849cm -1 吸收，为α-吡喃环CH变角振动。此说明HEPc中有多肽与糖相连。3.4 氨基酸分析 HEPc肽键的氨基酸组成结果（%）:Asp（12.3），Ser（9.6），Arg（8.7），Gly（11.7），Thr（8.0），Pro（15.2），Glu（18.33），Ala（7.1），Leu（3.2）等11种氨基酸，肽的含量占总肽多糖的5.6%。
4 小结
HEPb为白色粉末状结晶，易溶于水，不溶于乙醇、丙酮等有机溶剂，分子量5.3×10 4 ;红外光谱及酶解后纸色谱说明糖键部分仅阿拉伯糖以β-苷键相连，其它多为α-构型，气相色谱分析有鼠李糖、阿拉伯糖、木糖和葡萄糖存在，摩尔比依次为4.2∶1.6∶7.9∶20.3，是以葡萄糖为主的杂多 糖。HEPc为类白色无定形晶体，易溶于水，不溶于乙醇、丙酮等有机溶剂，分子量3.7×10 4 ;红外光谱、酶解后纸色谱及氨基酸测定说明糖键部分仅甘露糖以β-苷键相连，而其它单糖间以α-苷键相连;气相色谱分析，单糖组成摩尔比为木糖:甘露糖:半乳糖=5.1∶3.9∶15.8;为一杂多糖肽，单糖间主要以α-苷键相连。
参考文献
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作者单位:416000吉首湖南省湘西土家族苗族自治州人民医院
（收稿日期:2004-10-05） （编辑田 雨）