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首页合作平台在线期刊中华现代中西医杂志2004年第2卷第12期中医中药

地黄的组织培养研究

来源:中华实用医药杂志
摘要:地黄[Rehmanniaglutinosa(Gaert)Libosch]为玄参科多年生草本植物,主要分布于我国河南、山东、河北、辽宁、陕西、甘肃、安徽、湖北、浙江等省区,其新鲜块根或块根的加工品作为鲜地黄、生地黄或熟地黄入药,具有止血、保肝、降压、利尿、抗炎、抗辐射、抗氧化、抗缺氧、镇定、抗真菌、降血糖等功效,为大宗常用药材......

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   地黄[Rehmannia glutinosa(Gaert)Libosch]为玄参科多年生草本植物,主要分布于我国河南、山东、河北、辽宁、陕西、甘肃、安徽、湖北、浙江等省区,其新鲜块根或块根的加工品作为鲜地黄、生地黄或熟地黄入药,具有止血、保肝、降压、利尿、抗炎、抗辐射、抗氧化、抗缺氧、镇定、抗真菌、降血糖等功效,为大宗常用药材之一。
   
  地黄已有数百年的栽培历史,在生长过程中,易受多种病害侵袭,其中病毒病最为严重,通常田间感染率达100%,生产上用块根繁殖使病毒在植物体内代代相传,致使地黄种质严重退化 [1]  。利用组织培养技术生产无毒试管苗是解决地黄病毒病的有效途径之一。

  1 材料与方法
   
  1.1 实验材料 地黄(Rehmannia glutiosa L.),取其嫩块根为外质体进行组织培养研究。

  1.2 实验方法 [2,3]
    
  1.2.1 培养基和培养条件 试验采用MS培养基为基本培养基,附加不同种类和浓度的激素,根据使用的激素种类和浓度,在愈伤组织的诱导阶段共设A、B、C、D、E、F、G7种处理,见表1。在愈伤组织分化苗阶段共设a、b、c、d、e、f、g、h8种处理,见表2。在初代培养时,为防止材料褐化,在培养基中加入5mg/L抗坏血酸和1%活性炭。
   
  愈伤组织的诱导在温度为23℃~25℃,每天光照10h,光照强度2000lx;苗分化及生根培养在25℃~28℃,每日光照10h,光照强度3000lx条件下进行。
   
  1.2.2 接种的方法 初代培养时,取直径2.0cm左右的地黄嫩块根,剪成3~5cm长的根段,置自来水下冲洗干净,然后用2%洗洁精摇动浸泡5min,水冲后,用90%酒精灭菌10min,再用0.1%氯化汞溶液灭菌10min,无菌水冲洗4~5次,最后用无菌吸水纸吸干表面水分,放在灭菌过的培养皿中的无菌吸水纸上,用锋利的解剖刀将其切成厚约0.2~0.3cm的圆片,分别接种于不同处理的培养基上进行培养,每隔10d左右换1次,经30d诱导培养后进行统计。

  2 结果与分析
   
  2.1 不同激素配比对诱导率的影响 试验设置的7个处理组所形成的愈伤组织块的统计结果见表1。结果显示,7种处理中D处理(MS+0.5mg/L BA+0.2mg/L NAA)诱导率最高,达64%;其次为E处理(MS+1.0mg/L BA+0.2mg/L2,4-D+0.2mg/L NAA)诱导率为58%,其他处理的诱导率均低于50%。
   
  2.2 不同激素配比对愈伤组织分化苗的影响 试验设置的8个处理分化苗数量统计结果见表2。可以看出,8个处理中以h处理(MS+2.0mg/L BA+0.2mg/L NAA)分化率最高,达96.3%;其次是f处理(MS+2.0mg/L BA+0.5mg/L NAA),分化率为87.5%;其他处理的分化率均较低。

  表1 不同处理方法对愈伤组织形成的影响处理(略)

  表2 不同处理对苗分化率的影响处理(略)
   
  2.3 生根与完整试管苗形成情况 当上述分化出的苗长到高约3~4cm时,转接到生根培养基中。经试验,最合适的生根培养基为1/2MS+0.1mg/L NAA+0.3%活性炭。转到此培养基后,约经过20d开始发根,逐渐长成完整的植株,成活率达90%以上。
   
  3 小结

  以上结果表明:MS培养基附加BA和NAA的不同浓度配比,能获得较高的愈伤组织诱导率及试管苗的分化率。1/2MS附加一定浓度NAA有很好的生根效果,可获得根、茎、叶健壮的试管苗用于移栽,且移栽成活率较高。因此,利用组织培养方法生产试管苗是地黄无毒快繁的一条有效的途径。

  参考文献
    
  1 温学森,杨世世.地黄病毒并及其亟待解决的问题.中草药,2001,(7):28.
   
  2 肖培根,连文琰.地黄、中药、植物原色图鉴.北京:中国农业出版社,1999,92.
   
  3 夏海武,赵月玲,战克勤,等.半夏的组织培养研究.中国中药杂志,1994,(12):39.
    
  (收稿日期:2004-08-14)

  作者单位:261061山东省潍坊学院生物系 

  (编辑一 坤)

作者: 万永霞 2005-9-21
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