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【摘要】 目的 通过对赋形剂甘露醇加入前后胸腺肽溶液中多肽浓度的检测，确定甘露醇对多肽的影响程度，从而指导生产或进行生产工艺的改进。 方法 按国家药品标准规定的检测方法（Folin-酚法），模拟生产配方，进行多肽浓度的检测。 结果 甘露醇对注射用胸腺肽中多肽检测有不同程度的干扰。 结论 甘露醇的加入对多肽检测有影响，且随加入甘露醇的量的变化而变化。
关键词 胸腺肽 甘露醇 多肽 干扰
注射用胸腺肽是从小牛（或猪）胸腺中提取的分子量<1000道尔顿的多肽制剂 ［1］ ，因为甘露醇具有良好的冻干赋形特性，各生产厂家多以甘露醇为赋形剂进行冻干。在按《国家药品质量标准化学药品地标升国标WS 1 -042-2000-2003》中规定的Folin-酚法进行多肽含量检测时，发现加入甘露醇会影响其检测结果。
1 材料与方法
1.1 实验材料 紫外分光光度计UV-2450，恒温水浴箱、机械秒表、具塞试管、移液管、试管架;牛血清白蛋白对照品（中检所分发，配制浓度为0.304mg/ml），甘露醇（原产地:法国，批号:E13JA）、碱性铜试液（按标准规定自配）、酚试剂（1→16、按标准规定自制并稀释）、胸腺肽超滤液（本公司生产）、牛血清白蛋白（BSA，华美生物工程公司Lot No:0102）。
1.2 方法 为考察甘露醇在以Folin-酚法检测多肽时的空白影响，以水为溶剂，配制含4%、5%、8%的甘露醇溶液进行多肽含量检测。
参照标准规定的方法，为保证检测结果的可靠性，将多肽浓度稀释至0.1～0.15mg/ml左右。考虑到甘露醇对多肽检测的影响，先以水为空白检测不含甘露醇的胸腺肽溶液中多肽的含量，然后以该胸腺肽溶液为空白对照，直接检测不同浓度的甘露醇在对该胸腺肽溶液中多肽的影响（检测时消除多肽的吸收度值）。
为排除检查中可能因工艺原因带入影响检测的其他干扰物质，以华美生物工程公司的牛血清白蛋白配制成一定浓度的多肽溶液进行检测，并加入不同浓度的甘露醇进行对照实验。同时考察不同多肽浓度下含一定量甘露醇的检测结果。
1.3 标准曲线的制备和样品的检测 标准曲线的制备按标准规定的方法进行，同时对配制好的样品进行多肽浓度的检测。
2 检测结果
2.1 标准曲线的制备 见图1。
y=0.95677x+0.03922r2相关系数=0.99629
图1 标准曲线（略）
2.2 用水配成的甘露醇溶液不同浓度下多肽检测结果 以水为空白，用水配制成含4%、5%、8%、10%的甘露醇溶液，检测结果见表1。
表1 用水配成的甘露醇溶液不同浓度下多肽检测结果（略）
2.3 以自产的胸腺肽溶液多肽含量检测结果 见表2。其中多肽检测结果1为本公司生产胸腺肽超滤液进行配制的溶液，多肽检测结果2为以华美生物工程公司提供的BSA进行配制的溶液;0%下的浓度是指配液所用胸腺肽超滤液（或BSA）中含多肽的检测结果，4%、5%、8%下的浓度中不含多肽的浓度。
表2 以自产的胸腺肽溶液多肽含量检测结果（略）
2.4 两种多肽溶液对检测结果的影响比较 以华美生物工程公司提供的BSA进行配制不同浓度的多肽溶液，并同时配制含甘露醇为5%的溶液进行对照，检测结果见表3。
表3 两种多肽溶液对检测结果的影响比较（略）
3 讨论
从以上检测结果可以看出，按Folin-酚法，加入甘露醇后对多肽溶液检测有一定程度的影响:以水为空白，配制不同浓度的甘露醇溶液时，基本不影响其多肽检测结果（0.2mg/ml左右）;但在多肽溶液中加入甘露醇后，其含量变化较大，随溶液中含甘露醇量的不同（4%、5%、8%）其影响程度也不同，且随甘露醇浓度的增加影响加大;在不同浓度的多肽溶液中加入相同比例的甘露醇（5%），进行含量检测，其影响并不相同。
黄瑾等 ［2］ 对胸腺素制剂按双缩脲法、半微量凯氏定氮法、福林酚法三种方法进行了含量检测对比，认为溶液氨基酸中的芳香族氨基酸被灵敏度很高的福林酚法同时检出，从而干扰了对BSA的测定。
周淑平等 ［3］ 认为胸腺肽的λmax均在260nm附近，而牛血清白蛋白对照品的λmax为278nm，这是蛋白质中酪氨酸和色氨酸的吸收，而文献报道胸腺肽中含芳香族氨基酸甚微，因而使用牛血清白蛋白作为标准品是不恰当的。
参考文献
1 国家药品监督管理局.国家药品标准·化学药品地标升国标第16分册，2003，119-120.
2 黄瑾，倪宏.胸腺素含量测定方法比较.中国生化药物杂志，1998，（6）:387-390.
3 周淑平，苏芳.胸腺肽制剂含量测定方法的研究.中国生化药物杂志，1993，（4）:37-40.
（编辑商志伟）
作者单位:723000汉中陕西东盛生物制品有限公司