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【摘要】 目的 探讨栝蒌薤白半夏汤（GXBD）对心肌缺血大鼠内源性血管活性因子及心肌病理形态学的影响。 方法 通过结扎大鼠冠状动脉左前降支造成急性心肌缺血模型，用不同剂量的GXBD处理，造模后1h采血测血浆内皮素（ET）和血清一氧化氮（NO），并进行心肌病理形态学观察。 结果 急性心肌缺血模型组ET明显升高，NO明显下降，GXBD可以对抗心肌缺血大鼠ET的升高，提高NO的水平，与模型组比较差异有显著性（P<0.01或P<0.05）;GXBD可以有效的保护缺血心肌纤维结构和功能，与模型组比较差异有显著性（P<0.01或P<0.05）。 结论 GXBD能改善心肌缺血大鼠的内皮功能及心肌损伤，并能调节ET和NO分泌的失衡。
关键词 栝蒌薤白半夏汤 急性心肌缺血大鼠 内源性血管活性因子 心肌病理形态学
Influence of Gualou Xiebai Banxia Decoction on the endothelial vaso-active factors and myocardial pathomorphology of acute myocardial ischemia rats
Zhang Bingtian，Li Xinhui，Du Jianfang，et al.
Hunan College of Traditional Chinese Medicine，Changsha410007.
【Abstract】 Objective To investigate the effects of Gualou Xiebai Banxia Decoction（GXBD）on the endothe-lial vaso-active factors and myocardial pathomorphology of acute myocardial ischemia rats.Methods The left anteri-or descending coronary arterywas ligated to make a model of acute ischemic myocardium.Blood would be collected for assaying the plasma endothelin（ET）and the nitric oxide（NO），and myocardial pathomorphological examination would be preceded after the myocardial ischemia models being set up for one hours.Results GXBD could decrease not only the levels of plasma ET and increase the concentration of serum NO，but also ameliorate myocardial patho-morphological changes in acute myocardial ischemia rats，compared with those of the control group（P<0.01，P<0.05respectively）.Conclusion GXBD might play an important role in the modulation of plasma ET and NO as well as in the amelioration of myocardial injury and vascular endothelial function in acute myocardial ischemia rats.
Key words Gualou Xiebai Banxia Decoction acute myocardial ischemia rats endothelial vaso-active factors myocardial pathomorphology
栝蒌薤白半夏汤（GXBD）出自东汉医家张仲景所著《金匮要略》，现代多用于治疗心肌缺血。心肌缺血是冠状动脉供血不足，心肌急剧、暂时缺血、缺氧所引起，其中血管狭窄、斑块破裂、血栓形成及血管内皮功能异常是其重要的发病原因 ［1］ 。本实验用不同剂量GXBD处理，观察处理后急性心肌缺血大鼠内皮素（endothelin，ET）、一氧化氮（nitric ox-ide，NO）和心肌病理形态学变化，并阐明GXBD防治心肌缺血部分机制，为临床治疗提供实验依据。
1 材料与方法
1.1 实验动物 SD系大鼠60只，雌雄各半，体重（250±30）g，购于上海斯莱客实验动物有限责任公司，清洁级（clean animal），合格证号:SOXK（沪）2003-0008。
1.2 实验仪器 小动物人工呼吸机，DW-2000型，上海嘉鹏科技有限公司生产;低速自动平衡离心机，TDZ4-1.8A型，长沙天创仪器制造有限公司生产;电热恒温水槽，SSW型，上海博迅实业有限公司生产;紫外线/可见光分光光度计，UV-754型，中国上海第三分析仪器厂生产。
1.3 实验试剂及药物 血浆内皮素（ET-1）试剂，由北京北免东雅生物技术研究所提供;一氧化氮（NO）试剂（硝酸还原酶法），由南京建成生物工程研究所提供;地奥心血康胶囊，成都地奥制药集团有限公司生产，批号:0408046，每粒含甾体总皂苷100mg，临用前取胶囊内容物用蒸馏水配成所需浓度混悬液;GXBD（栝蒌30g，薤白15g，半夏10g，白酒30ml），由湖南中医学院附一医院制剂室提供;乌拉坦为市售化学纯试剂。
1.4 实验方法
1.4.1 实验分组 将大鼠按性别和体重分层，再用随机数字表法随机分为5组:假手术组（正常组）、模型组、GXBD低剂量组和高剂量组、对照组（地奥心血康组），每组12只大鼠，雌雄各半。
1.4.2 实验造模 参照文献 ［2］ 造模。于最后1次喂药30min后以20%乌拉坦（1.0g/kg）采用腹腔注射麻醉，仰卧位固定于手术台上。颈部去毛，分离颈部皮肤，行气管切开，立即与人工呼吸机（频率54次/min，呼吸量2ml/100g）相连通。然后于胸骨左缘剪去毛，在胸骨左缘2mm，第2、3肋骨处开胸，小心撕开胸膜及心包膜，挤出心脏，在主动脉圆锥与左心耳之间用5-0号线穿过冠脉左室支，结扎左冠状动脉（假手术组只穿线不结扎）后，把心脏放回胸腔，维持人工呼吸1h。
1.4.3 给药剂量及方法 灌胃法给药，每日1次，连续14d，给药剂量根据人临床剂量，按动物体表面积换算，GXBD低剂量组灌胃剂量为10ml/（kg·d）［相当于生药含量5.58g/（kg·d）］，高剂量组为40ml/（kg·d）［相当于生药含量22.32g/（kg·d）］，地奥心血康对照组灌胃剂量为10ml/（kg·d）［相当于生药含量0.06g/（kg·d）］，假手术组和模型组每日灌胃等容量蒸馏水。低剂量和高剂量分别相当人临床剂量与人临床剂量4倍。
1.5 实验指标测定
1.5.1 GXBD对心肌缺血大鼠ET和NO的影响 方法是造模后1h，由颈动脉抽血4ml，其中取2ml测定NO，方法严格按试剂盒说明书操作，用2ml血在1500rpm离心10min，分离血清，-30℃冻存待测;另取2ml血测定ET，方法严格按试剂盒说明书操作，把2ml血置预冷的含1%EDTA二钠30μl和40μl抑肽酶的试管中，4℃3000rpm离心10min，取血浆置-30℃冰箱中待测ET。
1.5.2 GXBD对心肌缺血大鼠心肌病理形态学的影响 方法是造模后1h将动物处死取心肌组织置于10%福尔马林液中固定，石蜡包埋，切片，二甲苯脱蜡，常规HE染色，树脂封片。在光镜下以HP-10×40依参考文献 ［3，4］ 对病理变化进行5级观察，即0级无病变;Ⅰ级为心内膜下局灶性病变;Ⅱ级为心肌大范围灶性病变，肌纤维肿胀和断裂;Ⅲ级为心肌广泛融合性病变;Ⅳ级为心肌变性坏死。
1.6 统计学方法 计量资料数据用均数±标准差（ˉx±s）表示，用SPSS11.50版统计软件在计算机上进行，多组间两两比较用单因素方差分析，方差齐时，两两比较用q检验;方差不齐时和等级资料用秩和检验。
2 结果
2.1 对急性心肌缺血大鼠ET和NO的影响 见表1。
表1 对急性心肌缺血大鼠ET和NO的影响 （略）注:与正常组比较， △ P<0.05， △△ P<0.01;与模型组比较， * P<0.05， ** P<0.01;与低剂量组比较， ▲ P<0.05， ▲▲ P<0.01;因有死亡每组取10只结果表明，造模后模型组较正常组ET明显升高（P<0.01），NO明显降低（P<0.01）;各治疗组与模型组比较，ET均降低，其中低剂量组和对照组降低（P<0.01），高剂量组降低（P<0.05）;NO均升高，低剂量组升高（P<0.01），高剂量组和对照组升高（P<0.05）;低剂量组与高剂量组和对照组比较，ET降低显著（分别P<0.01和P<0.05），NO 升高也显著（P<0.05）。说明低剂量组在降低ET和升高NO作用均优于高剂量组和对照组。
2.2 对心肌病理形态学的影响 在光镜下，正常组0级占80%，心肌组织未见充血、出血或炎细胞反应，可见心肌肌原纤维排列整齐，肌节长度一致、排列规整，肌纤维清晰;染色质清楚，见图1;模型组Ⅱ级占80%，Ⅱ级表现为心肌较大范围灶性病变，肌纤维肿胀和断裂，有少许充血或出血，见图2;1只Ⅲ级，有广泛融合病变，有不同程度因缺血而引起心肌损害，主要表现为心肌纤维变长呈波浪形，排列紊乱和断裂;肌纤维间距增宽，肌节缩短，排列不规整;间质水肿、充血或出血，有炎症细胞浸润，与正常组比较差异有显著性（P<0.01），见图3;各治疗组虽有心肌损害，但和模型组比较差异有显著性（P<0.05和P<0.01），以Ⅰ级居多，低剂量组占70%，高剂量组占60%，对照组占80%，Ⅰ级表现为大鼠心肌肌原纤维排列较规整，肌节排列亦较为整齐，只是心肌局灶出血，为心内膜下局灶性病变，见图4，而各治疗组之间差异无显著性（P>0.05），比较结果见表2。
表2 对急性心肌缺血大鼠心肌病理形态学影响（略）注:与正常组比较， △ P<0.05， △△ P<0.01;与模型组比较， * P<0.05， ** P<0.01;与低剂量组比较， ▲ P>0.05
3 讨论
ET和NO是新近发现的一对效应相反的内皮源性血管活性因子。其中ET是迄今所知作用最强、持续最久的缩血管活性多肽。已有大量的实验研究和临床资料证实了其在冠状动脉粥样硬化及缺血性心脏病发生、发展中起着重要作用 ［5～7］ 。NO是内皮源性舒张因子的主要成分。Morishita R研究发现，NO可以促进血管平滑肌细胞的凋亡，减少平滑肌的生成，减少血管重构，减轻动脉硬化 ［8］ ，Wbo也观察到NO可使血管舒张，抑制细胞增生及黏附作用，并有抗氧化还原作用 ［9］ ，经研究表明二者的平衡对全身和局部血流调节起着十分重要作用，若二者失衡会导致心肌缺血等多种心血管疾病 ［10］ 。目前西医治疗主要聚焦在溶栓、抗凝、抗血小板、调脂和介入治疗等，但溶栓、抗凝、抗血小板治疗容易导致出血等不良反应;介入治疗极易出现再狭窄，所以远期效果尚有待进一步观察。另外西医治疗价格比较昂贵 ［11］ 。因此迄今为止尚未发现理想的防治心肌缺血的方法。心肌缺血，属中医“胸痹心痛、厥心痛和真心痛”的范畴，中医认为其病机多为心阳亏虚、痰瘀阻络，中医辨证施治，应以温通心阳、化痰通络为其基本治法。GXBD是治疗胸痹的名方，具有温通心阳、化痰通络的功效，本方由栝蒌、薤白、半夏等组成，以往实验药理研究证明各单味药及其类方对心肌缺血有保护作用 ［12～14］ 。本实验通过结扎大鼠冠状动脉左前降支，造成急性心肌缺血模型，根据血液循环系统中NO和ET水平的变化来反映GXBD对血管内皮功能的影响，同样通过心肌病理形态学来观察其对缺血心肌的保护作用。研究结果表明，模型组与正常组比较NO的水平显著降低，ET的水平明显升高，各治疗组与模型组比较NO的水平显著升高，ET的水平明显降低，且低剂量组优于高剂量组;心肌病理形态学显示，模型组心肌纤维有不同程度的紊乱和断裂，肌间质有较多水肿、充血和出血:各治疗组肌纤维排列较为规整，只是灶性出血。由此可见，GXBD有抗心肌缺血作用，能调节NO和ET失衡，改善血管内皮功能以及能保护心肌的结构和功能，改善心肌血液循环，至于其抗心肌缺血的确切机制有待进一步研究。 （本文图片见附页1）
参考文献
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（编辑建 伟）
作者单位:410007长沙湖南中医学院
032600山西省左权县人民医院