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肌酐是肌肉中的磷酸肌酸（肌酸大部分存在于肌肉占98%）通过自发和不可逆反应转化而形成的，除非肌肉质量有较大的变化。一般情况下，所形成的肌酐量是相对恒定的，通常不受蛋白摄入量及尿量的影响，游离肌酐在体内代谢中不能被重吸收，在体内是一种废物，主要由肾小球滤过，随后经尿液排出。因此肌酐的循环量完全依赖于它的排泄速度，从而测定血清中的肌酐含量（临床上与尿素测定一同进行）用于肾功能检查，来作为各种肾疾患检查以及用作化疗药物肾损害的早期指征和肾移植排斥反应监测指征之一。
1 碱性苦味酸测定肌酐的机制
碱性苦味酸法（即Jaffe反应）对肌酐的测定是目前应用最广泛的方法之一，其原理是肌酐有酮式、烯醇式两种，在碱性介质中均以烯醇式肌酐形式存在，再与碱性苦味酸反应，产生一种红色的苦味酸肌酐复合物，所形成的红色与肌酐浓度成正比，并可在波长500～520nm处测定。
2 碱性苦味酸测定肌酐影响因素及相应措施
2.1 假肌酐 肌酐在碱性溶液中与苦味酸形成的红色反应，此法的主要缺点是特异性不高，血中的维生素C、丙酮酸、丙酮、葡萄糖、乙酰乙酸、果糖、蛋白质、氨基马尿酸及很多其他化合物亦能与碱性苦味酸生成红色，这些不是肌酐而能起红色反应的物质统称为假肌酐。在红细胞、血清或血浆及尿液中假肌酐物质各约为60%、20%及50%，相当于大量的假肌酐存在于红细胞中，故测定血液肌酐时用血清或血浆为好，为避免结果的误差，血清样品应注意溶血发生。
对于这些假肌酐的干扰，应用初始速度法来测定，即读取起始吸光度（Ai），再过120s读取终末吸光度（Af），计算时用Af-Ai=ΔA，那么肌酐的含量为:肌酐（μmol/L）=样品ΔA/标准ΔA×标准浓度（μmol/L）。通过初始速度法特异性将得到改进，有效地消除了这些假肌酐带来的结果偏高的影响。
2.2 高胆红素 高胆红素对测定结果也有很大影响，往往使结果偏低，尤其新生儿血清中的高胆红素，常会出现结果负值。这是因为Jaffe反应生成的红色复合物，通常在波长510nm处根据测定时间内血清和标准液吸光度的增加量来计算肌酐的含量，而胆红素在波长510nm处也有较强光吸收，并且在氢氧化钠的作用下逐渐转化为波长620nm处有强光吸收的胆绿素，而胆绿素在波长520nm处只有很弱的光吸收，这就掩盖了肌酐本身的显色反应，导致测定结果偏低。新生儿的肌酐含量比成人要低，本身的显色反应弱，干扰相对就严重，所以会出现负值。对于因高胆红素带来的负影响，一般的苦味酸试剂中都加入了各种氧化物（包括过氧化物酶、胆红素、氧化酶、高铁氰化钾等），使胆红素被氧化成胆绿素，来降低其干扰。
2.3 试剂自身原因 试剂本身对结果也有较大的影响，质量差的苦味酸空白试剂吸光度偏高，影响测定结果的准确度。氢氧化钠的用量及浓度对显色反应有影响，显色时氢氧化钠浓度高假肌酐显色增加，结果偏高。氢氧化钠浓度低，与肌酐显色减少，结果偏低。因此试剂严格保持恒温及拧紧试剂瓶盖，防止氢氧化钠在空气中被酸化降低浓度。
总之，肌酐测定中有许多因素影响结果的准确性，因此必须严格遵守操作规范，以取得准确结果。另外除了实验室本身的质量保证外，还要重视取得临床医护人员及患者的配合，实际上这是实验室前质量控制的一个重要环节。
（编辑建 伟）
作者单位:226121江苏省海门市第二人民医院检验科