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【摘要】 目的 建立肝速康胶囊中齐墩果酸的含量测定方法。 方法 高效液相色谱法（HPLC），流动相为甲醇∶0.4%磷酸溶液（90∶10）;检测波长为210nm，柱温40℃。 结果 齐墩果酸线性范围为0.42～2.52μg，平均回收率98.28%，RSD为2.05%。 结论 方法可靠、简单可行，为控制肝速康胶囊的内在质量提供了科学依据。
关键词 肝速康胶囊 齐墩果酸 高效液相色谱法
Content determination of oleanolic acid in Gansukang capsules by HPLC
Tao Huaming，Wang Lishu，Cheng Dongyan，et al.
College of Chemistry and Chemical Engineering，Hunan Normal University，Changsha410081.
【Abstract】 Objective To set up a method for determining oleanolic acid in Gansukang capsules.Methods HPLC，mobile phase:methanol-0.4%H 3 PO 4 solution（90∶10），detection wavelength:210nm.Results The standard curve was linear in the range of0.42～2.52μg.The average recovery and RSD were98.28%and2.05%.Conclu-sion This method is accurate，reliable and provide a scientific index for controlling the qualities of Gansukang cap-sules.
Key words Gansukang capsules oleanolic acid HPLC
肝速康胶囊收载于部颁标准上（标准号WS 3 -B-2527-97），由齐墩果酸粗品及云芝多糖两味组成。本品具有降酶、降浊、调整机体免疫功能，改善代谢障碍、肝病症状及加速肝功能恢复等作用，用于急、慢性及迁延性肝炎有较好疗效。齐墩果酸粗品为处方中君药，原标准以香草醛-高氯酸比色法测定其含量，不具有专属性，为了确保药品质量使临床疗效稳定可靠，我们以高效液相色谱法（HPLC）测定了齐墩果酸的含量［1］ ，为控制其内在质量提供了科学依据。
1 仪器与试药
岛津LC-10AT高效液相色谱仪，SPD-10Avp紫外可见检测器;日立U-3400型分光光度计;齐墩果酸对照品，由中国药品生物制品检定所购入（供含量测定用，批号0709-9803）;肝速康胶囊，吉林省中医中药研究院中药剂型研究室制备;所用试剂乙腈为色谱纯，其它试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 岛津VP-ODS色谱柱（150L×4.6），以甲醇∶0.4%磷酸溶液（90∶10）为流动相，检测波长为210nm，柱温40℃。理论板数按齐墩果酸计算，应不低于4000。在此条件下，齐墩果酸和样品中的其它物质可以得到良好的分离，而阴性液无干扰。
齐墩果酸对照品、样品及阴性液（取处方中除去齐墩果酸粗品以外的其它药材，同成品胶囊制备方法制成齐墩果酸阴性胶囊，并同样品供试液制法制成阴性液）HPLC图见图1。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取齐墩果酸对照品4.2mg，置10ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
2.3 供试品溶液的制备 ［2～5］ 取装量差异项下的内容物粉末约40mg，精密称取，置25ml量瓶中，加入流动相（功率250W，频率50kHz）超声处理20min，置冷，以流动相稀释至刻度，摇匀，静置，取上清液，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取滤液作为供试品溶液。
2.4 线性关系的考察 精密吸取对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2ml，分别置2ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为系列对照品溶液。分别吸取上述6份对照品溶液各10μl，按2.1项下色谱条件测定，以进样量（μg）为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程:Y=-14286+306079X，r=0.9995，结果表明，齐墩果酸在（0.42～2.52）μg范围内线性关系良好。
2.5 精密度实验 精密吸取同一供试品溶液10μl，在上述同一色谱条件下，连续进样6次，测定RSD=1.88%（n=6），证明精密度良好。
2.6 稳定性实验 精密吸取供试品溶液在0、2、4、6、8h分别进样，进行测定，结果其RSD=0.98%，可见供试品溶液中齐墩果酸在8h内含量稳定。
2.7 重复性实验 分别称取本品同一批号样品6份，按供试品溶液制备方法制备，依法进样测定，结果RSD=2.38%（n=6），说明本方法重现性良好。
2.8 回收率实验 在已知含量的样品粉末中，定量加入一定量的齐墩果酸对照品，按供试品溶液制备方法制备，进样，测定，计算回收率（加标供试品溶液进样5μl），结果见表1。
图1 高效液相色谱图谱（略）
表1 齐墩果酸回收率测定结果（略）
本方法平均回收率99.28%，且RSD<3%，说明本方法回收率良好。
2.9 样品的含量测定 分别称取不同批号的样品，分别按供试品溶液制备方法制备，另取齐墩果酸对照品适量，精密称取，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液。分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，计算肝速康胶囊中齐墩果酸含量，依法测定10批样品，结果见表2。
表2 肝速康胶囊中齐墩果酸的测定结果（略）
3 讨论
3.1 供试品溶液的处理方法的选择 曾采用如下供试品溶液的处理方法:（1）取本品内容物约40mg，精密称取，置于25ml量瓶中，加入流动相超声处理20min，置冷，以流动相稀释至刻度，摇匀，静置，取上清液，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取滤液作为供试品溶液。（2）取本品内容物约40mg，精密称取，加氯仿30ml超声处理20min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇溶解并定量转移至25ml量瓶中，作为供试液。（3）取本品内容物约40mg，精密称定，置锥形瓶中，加氯仿30ml回流提取15min，滤过，残渣用氯仿洗涤3次，每次10ml，洗液与滤液合并，蒸干，残渣加甲醇溶解并定量转移至25ml量瓶中，加甲醇至刻度，混匀，作为供试液。
结果表明以（1）处理方法制得的供试品溶液进样测定分离效果好且峰面积积分值最高，故决定采用（1）法制备供试液。
3.2 流动相选择 在实验过程中，曾采用乙腈∶水（13.5∶86.5）、甲醇∶0.3%冰醋酸（85∶15）等多种流动相，色谱峰分离效果均不理想，而未被采用。经实验摸索甲醇∶0.4%磷酸溶液（90∶10）为流动相分离效果较好，且保留时间较短，而被采用。
参考文献
1 国家药典委员会.中华人民共和国药典.北京:化学工业出版社，2000，138.
2 谭永红，姜云平.高效液相色谱法测定胃炎停胶囊中齐墩果酸、熊果酸的含量.中国医院药学杂志，2004，24（2）:71-72.
3 应帮智，张振凌.山茱萸不同炮制品中齐墩果酸含量的比较.中草药，2004，35（2）:159-160.
4 徐天玲，谢云.高效液相色谱法测定肝肾康胶囊中齐墩果酸的含量.江西中医学院学报，2003，15（4）:51-52.
5 皮文霞，蔡宝昌.HPLC测定山茱萸胶囊中熊果酸和齐墩果酸的含量.中草药，2003，34（12）:1103.
（编辑文 静）
作者单位:410081湖南长沙湖南师范大学化学化工学院
130021吉林长春吉林省中医中药研究院（* 通讯作者）