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【摘要】 目的 研究鳖甲多糖对S180荷瘤小鼠免疫调节作用的影响。 方法 制备S180荷瘤小鼠动物模型，随机分为荷瘤对照组（Ⅰ）、低剂量组（Ⅱ）、中剂量组（Ⅲ）、高剂量组（Ⅳ）;通过测定荷瘤小鼠的瘤重、抑瘤率及瘤体比观察鳖甲多糖对肿瘤生长的影响;通过检测半数溶血值（HC 50 ）和T淋巴细胞转化功能，研究鳖甲多糖对荷瘤小鼠体液免疫和细胞免疫功能的影响。 结果 鳖甲多糖能使S180荷瘤小鼠的瘤重、瘤体比减小，明显抑制肿瘤的生长，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组的平均抑瘤率分别为30%、37%、45%;鳖甲多糖能明显改善S180荷瘤小鼠半数溶血值（P<0.05）;鳖甲多糖能明显提高荷瘤小鼠T淋巴细胞的转化功能（P<0.05）。 结论 鳖甲多糖能明显抑制S180荷瘤小鼠肿瘤的生长，其作用机制可能是增强荷瘤小鼠的体液免疫功能和细胞免疫功能。
关键词 鳖甲多糖 肿瘤 小鼠 免疫调节
癌症患者本身机体抵抗力就低，经过放疗和（或）化疗以后抵抗力就更低，严重影响到患者的康复和预后。中药鳖甲具有抗肿瘤作用 ［1］ ，本文探讨了鳖甲中的功效成分—鳖甲多糖对肿瘤生长的影响及其对荷瘤小鼠的免疫调节作用。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 鳖甲多糖 ［2］ 自行提取棕色粉末，纯度87%。
1.1.2 动物 Balb/c小鼠，雌性，体重18～22g，由浙江大学医学院动物实验中心提供。
1.1.3 瘤株S180 由中国科学院上海药物研究所提供。
1.2 方法
1.2.1 S180荷瘤小鼠动物模型的制备与分组 ［3］ 取Balb/c小鼠30只，其中24只右前腋下皮下接种S180细胞悬液（5×10 6 /ml）0.2ml，次日称重编号，随机分组，每组6只。荷瘤对照组（Ⅰ）用蒸馏水灌胃;低剂量组（Ⅱ）、中剂量组（Ⅲ）、高剂量组（Ⅳ）分别灌以100mg/kg、200mg/kg、400mg/kg的鳖甲多糖;未接种瘤株的6只小鼠作为正常对照组（Ⅴ）。
1.2.2 鳖甲多糖对荷瘤小鼠体液免疫功能的影响 采用半数溶血值（HC 50 ）测定方法 ［4］ ，动物连续给药10天。在给药5天后，小鼠腹腔注射羊红细胞0.2ml致敏，在致敏后第4天摘眼取血，收集血清，测定小鼠半数溶血值（HC 50 ）。
1.2.3 鳖甲多糖对荷瘤小鼠细胞免疫功能的影响 采用T淋巴细胞的转化功能测定方法 ［5］ ，小鼠连续给药10天，停药次日，颈椎脱臼处死小鼠，无菌操作取脾脏，制备脾细胞悬液，然后将脾细胞悬液加到96孔培养板中，200μl/孔，每一份样品分装6孔，3孔加刀豆蛋白素（ConA，5μg/ml），另3孔不加刀豆蛋白素作为对照。置5%CO 2 37℃孵箱中培养72h，培养结束前6h，每孔加入 3 H-TdR20μl。用多头细胞收集器收集细胞于49型玻璃纤维滤纸上，滤纸片充分干燥后置测量瓶中并加入7ml闪烁液，用液闪仪测定每分钟脉冲数（Cpm），结果用刺激指数（SI）表示。
1.3 统计学方法 用SPSS软件进行统计分析，对各组数据进行t检验，显著性界值定为0.05。所有数据以均数±标准差（ˉx±s）表示。
2 结果
2.1 鳖甲多糖对荷瘤小鼠瘤重、瘤体比及抑瘤率的影响 见表1。由表1可见，3种剂量的鳖甲多糖都有明显抑制肿瘤生长的作用，与荷瘤对照组比较在统计学上差异有显著性。
表1 鳖甲多糖对S180荷瘤小鼠瘤重、瘤体比及抑瘤率的影响 （略）
注: * P<0.05
2.2 鳖甲多糖对荷瘤小鼠半数溶血值的影响 见表2。3种剂量的鳖甲多糖都有明显改善荷瘤小鼠半数溶血值的作用，HC 50 明显提高，与荷瘤对照组比较在统计学上差异有显著性。
2.3 鳖甲多糖对荷瘤小鼠T淋巴细胞转化功能的影响 见表3。3种剂量的鳖甲多糖都有明显提高荷瘤小鼠T淋巴细胞转化功能的作用，与荷瘤对照组比较在统计学上差异有显著性。
表2 鳖甲多糖对S180荷瘤小鼠半数溶血值的影响 （略）
注:与荷瘤对照组（Ⅰ）比较， * P<0.05;与正常对照组（Ⅴ）比较， # P<0.05
表3 鳖甲多糖对S180荷瘤小鼠T淋巴细胞转化功能的影响 （略）
注:与荷瘤对照组（Ⅰ）比较， * P<0.05;与正常对照组（Ⅴ）比较， # P<0.05
3 讨论
研究结果表明:100mg/kg、200mg/kg、400mg/kg3种剂量的鳖甲多糖对S180荷瘤小鼠都有明显抑制肿瘤生长的作用，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ三个组与荷瘤对照组（Ⅰ）比较在统计学上差异有显著性。随着剂量的增大，瘤重、瘤体比逐渐减小，抑瘤率逐渐增大，但3种剂量之间作用在统计学上差异无显著性，这可能因为鳖甲多糖作用较强，本次实验所选的3个剂量偏大，也有可能鳖甲多糖的作用没有剂量效应。
鳖甲多糖能明显改善被羊红细胞致敏的荷瘤小鼠半数溶血值（HC 50 ），Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ三个组与荷瘤对照组（Ⅰ）比较在统计学上差异有显著性。表明鳖甲多糖对荷瘤小鼠的体液免疫功能有明显的提高作用。3种剂量改善荷瘤小鼠HC 50 作用在统计学上同样差异无显著性;而且中、高剂量组与正常对照组（Ⅴ）比较在统计学上差异无显著性，说明中、高剂量的鳖甲多糖能使S180荷瘤小鼠的半数溶血值几乎恢复到正常水平，在荷瘤小鼠半数溶血值测定实验中显示出鳖甲多糖的作用有剂量效应。
本次实验，3种剂量的鳖甲多糖都有明显提高荷瘤小鼠T淋巴细胞转化功能的作用，与荷瘤对照组比较在统计学上差异有显著性。表明鳖甲多糖对S180荷瘤小鼠的细胞免疫功能有明显的增强作用。但3种剂量之间这种作用在统计学上差异无显著性。
鳖甲多糖能明显抑制S180荷瘤小鼠肿瘤的生长，其作用机制可能是增强了荷瘤小鼠的体液免疫功能和细胞免疫功能。
参考文献
1 赵长琦，许有玲，王亚洲.抗肿瘤植物药及其有效成分.北京:中国医药科技出版社，1997.138-146.
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4 周淑英，卢振初，王俏.黄芪多糖抗肿瘤作用的实验研究.药物生物技术，1995，2（2）:22-25.
5 Lim HY，Joo HJ，Choi JH，et al.Increased expression of cyclooxyge-nase-2protein in human gastric carcinoma.Clin Cancer Res，2000，6:519-525.
（编辑陆 华）
* 基金项目:浙江省中医药管理局2004年科研资助项目（编号:2004C003）
作者单位:310053浙江杭州浙江中医学院药学系
310031浙江杭州浙江大学医学院