HPLC－UV法测定治偏痛颗粒中芍药苷含量

　　【摘要】 

　　目的  建立HPLC-UV法测定治偏痛颗粒中芍药苷含量的方法。

　　方法  采用C18反相柱；流动相为甲醇:水(1∶3)，流速为1.0ml/min,检测波长230nm。

　　结果  芍药苷标准品进样量在0.4～2.4μg之间，进样量与峰面积呈良好线性关系，样品加样回收率达99.5%，重现性试验RSD%值为1.1%。

　　结论  HPLC-UV联用方法稳定可靠，可以用于芍药苷定量。

　　【关键词】  HPLC-UV;治偏痛颗粒;芍药苷;含量测定

　　治偏痛颗粒由白芍等八味药组成，以白芍为主药，柴胡、白芷、香附、郁李仁、白芥子、甘草诸药相佐使，具有活血、行气、止痛之功效［1］，临床上广泛用于血管性头痛及各种偏头痛。白芍性微寒，味苦酸，功能养血柔肝、缓急止痛［2］，用于头痛眩晕、胸胁疼痛、腹痛、四肢挛痛。白芍中含有多量芍药苷，是其中主要活性成分。现代药理研究表明［3］：芍药苷具有明显镇痛作用，能增加心肌营养血流量，扩张冠状血管，降低麻醉犬血压和心率，显著增强小鼠对常压缺氧的耐受力，具有对抗惊厥作用。所以，选定芍药苷作为含量测定成分。

　　1  方法学考察

　　1.1  色谱条件的选择［4］  根据芍药苷的理化性质，选用C18反相柱(4.6mm×250mm,5μm),芍药苷与其他成分完全分离，理论塔板数达4000以上。通过紫外全波长扫描，芍药苷在230nm处强吸收峰。据此，确定色谱条件如下：色谱柱：C18-BDS(4.6mm×250mm，5μm)；流动相为甲醇：水(1∶3)；检测波长230nm；流速1ml/min；柱温：室温。

　　1.2  仪器与试药  Waters510高效液相色谱仪；Waters486紫外检测器；HS色谱数据分析系统；USC-302超声波清洗仪。芍药苷(购自中国药品生物制品检定所)；治偏痛颗粒(本厂自制)；空白对照样品(本厂自制)；甲醇为色谱纯；水为重蒸水。

　　1.3  对照品溶液的制备  精密称取芍药苷对照品约30mg，置25ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，即得1ml含芍药苷120μg的对照品溶液。

　　1.4  制备供试品溶液  取本品内容物适量，研细，取约10g，精密称定，置碘量瓶中，精密加甲醇10ml，称定重量， 超声处理45min，取出，放冷，用甲醇补足缺失的重量，摇匀，离心，吸取上清液，通过0.45μm滤膜滤过，收集续滤液作为供试品溶液。

　　1.5  空白试验  按本制剂处方比例及制备工艺，不加入白芍药材，制得缺白芍的空白样品。按样品溶液制备方法制备空白对照溶液。分别精密吸取芍药苷标准对照溶液、样品溶液和空白对照溶液各20μl，分别进样测定，结果表明：芍药苷峰位在13min左右，样品溶液有同样的吸收峰，而空白溶液在相应位置无吸收。在此条件下，芍药苷的吸收不受杂质成分影响，适于定量。

　　1.6  芍药苷线性考察  精密称取芍药苷对照品5.0mg，置于25ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度。分别精密吸取上述溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml，置10ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，即得不同浓度的芍药苷标准溶液。分别精密吸取上述各浓度的标准溶液20μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，以峰面积为纵坐标，芍药苷进样量为横坐标。绘制标准曲线，并计算回归方程为A=-8178.9+1469245.7c，r=0.9997。表明芍药苷进样量在0.4～2.4μg之间，两者线性关系良好。

　　1.7  系统精密度考察  精密称取芍药苷对照品约1.5mg，置于25ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度。精密吸取20μl连续进样5次，测定峰面积，计算精密度，峰面积如下：1862712.7、1852972.6、1862485.4、1861694.4、1854723.9；RSD值为0.25%，结果表明精密度良好。

　　1.8  回收率试验  采用加样回收测定方法，精密称取6份已知含量的同批(批号20040803)样品各1.0g，分别添加芍药苷标准溶液(浓度1.04mg/ml)各1ml，按供试品溶液制备方法，制备供试液，并依法测定，结果见表1。

　　表1  加样回收试验结果

　　注：RSD=1.7%

　　1.9  重现性试验  分别取5份同批（批号20040803）样品各约1.0g，精密称定，按供试品溶液制备方法，制备供试液，依法测定，含量测得值依次为22.3、21.9、22.0、21.7、221mg，RSD值为1.1%。方法的重现性较好。

　　1.10  系统稳定性试验  取样品1.0g，精密称定。按供试品溶液制备方法制备供试液，分别于1、4、8、12、24h后进样，测得峰面积依次为1977463、1964488、1932726、1955881、1977246，RSD值为0.94%，表明样品溶液至少在24h内稳定。

　　2  样品含量测定

　　按上述测定方法，对三批成品定量，结果见表2。

　　表2  样品含量测定结果

　　3  分析与总结

　　(1)所建立方法重现性好，RSD值为1.1%；加样回收率高达99.5%。方法简便、准确、稳定、可靠，可作为本制剂芍药苷的定量方法。(2)经三批治偏痛的含量测定，芍药苷含量均＞20.0mg/袋。据此确定本制剂芍药苷的含量标准，更准确控制成品质量。

　　【参考文献】

　　1  国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部).北京：化学工业出版社，2000，99.

　　2  苏强，倪艳，王瑞明，等.祛斑洁颜胶囊的薄层鉴别和黄芩苷的含量测定.中成药,2003,25(1):30-31.

　　3  林念良,耿小秀,李文彬,等.乳核消胶囊质量标准的研究.中成药,2003,25(1):35-37.

　　4  陈定一.分析化学.北京：学苑出版社,1995，97.

　　作者单位： 221007 江苏徐州，徐州颐海药业有限责任公司

　　(编辑：苜  紫)