巫山淫羊藿及其不同炮制品中绿原酸的含量分析*

　　【摘要】  目的  对巫山淫羊藿生品及其4种炮制品中绿原酸的含量进行测定与比较。方法  采用高效液相色谱法测定含量。结果  绿原酸的含量为：盐蒸品>酒炙品>盐炙品>生品>羊脂炙品。结论  淫羊藿炮制品中，除羊脂炙品中绿原酸的含量有降低外，其余均有一定增幅。临床用药历代均以炮制品为主，上述情况当是重要原因，值得临床深入研究。

　　【关键词】  淫羊藿；炮制；绿原酸；高效液相色谱
   
　　淫羊藿为常用中药，临床使用多用炮制品。淫羊藿的药效成分主要为黄酮类化合物，此外还有绿原酸等。对淫羊藿中淫羊藿苷的研究报道较多，但对其中绿原酸的研究报道却很少见［1］。巫山淫羊藿是淫羊藿的一个品种。本实验采用高效液相色谱法，对黔产巫山淫羊藿的生品和4种炮制品中绿原酸的含量进行了测定，并做比较分析，现报告如下。

　　1  仪器、试剂与药材

　　1.1  仪器  HP1100高效液相色谱仪，DAD检测器。

　　1.2  试剂  乙腈为色谱纯；甲醇、乙醇、磷酸均为分析纯；水为重蒸馏水。

　　1.3  对照品  绿原酸，购自中国药品生物制品检定所，标号为753-9305。

　　1.4  药材  巫山淫羊藿采自贵州省雷山县雷公山。经我院研究员鉴定为小檗科淫羊藿属植物巫山淫羊藿（Epimedium wushanense T.S.Ying）。本试验均用其叶片。

　　1.5  炮制品的制备  盐炙、盐蒸、酒炙、羊脂炙品，均按1990年版、2000年版《中国药典》规定自行炮制。辅料：羊脂油用炼油；酒为绍兴黄酒≥14.5度（浙江省绍兴县第三酒厂）；盐用食盐。生品及4种炮制品均分别在50℃下干燥4h，粉碎，过40目筛备用。

　　2  方法与结果

　　2.1  色谱条件 色谱柱HypersilC18，25.00cm×0.40cm，柱温30℃。流动相为乙腈-0.1%磷酸（13∶87），流速1ml/min。检测波长为325nm，在上述色谱条件下绿原酸对照品及巫山淫羊藿生品的HPLC色谱（见图1）。

　　2.2  对照品溶液的制备  精密称取绿原酸对照品3.00mg，用甲醇配制成0.03mg/ml的绿原酸对照品溶液。

　　2.3  供试品溶液的制备  分别精密称取巫山淫羊藿生品及4种炮制品粉末约0.4g，置于50ml具塞三角瓶中，精密加入50%乙醇25ml，称定重量，超声提取1h后称重补失量，过滤，弃掉初滤液，续滤液用0.45μm的微孔滤膜过滤，做供试品溶液。

　　2.4  线性关系  用0.03mg/ml的绿原酸对照品溶液分别进样1、3、5、7、9、11μl。以色谱峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，绘制工作曲线得Y=2.78×103X+5.35，r=0.9998。结果表明绿原酸在0.03~0.33μg之间有良好的线性关系。

　　2.5  精密度试验  精密吸取绿原酸对照品溶液5μl进样分析，重复5次。测得绿原酸峰面积的RSD值为0.86%（n=5）。

　　2.6  重复性试验  取同一巫山淫羊藿生品5份，按2.3项下方法制备供试品溶液，吸取5μl进样分析，结果巫山淫羊藿生品中绿原酸平均含量为0.26%，RSD为0.90%（n=5）。

　　2.7  稳定性试验  精密吸取绿原酸对照品溶液5μl，分别于0、1、4、8、16h进样分析，测得绿原酸峰面积的RSD值为1.0%（n=5），表明绿原酸在16h内稳定。

　　2.8  回收率试验  精密称取巫山淫羊藿生品粉末5份，每份约0.4g，分别精确加入一定量的绿原酸对照品，依法测定绿原酸的回收率。其结果见表1。

　　表1  绿原酸回收率试验（略）

　　2.9  含量测定与结果  用巫山淫羊藿生品及4种炮制品的供试品溶液进行测定，每次进样5μl。结果见表2。

　　表2  巫山淫羊藿生品及4种炮制品中绿原酸含量  （略）

　　3  讨论

　　实验显示，巫山淫羊藿不同炮制品中，有3种的绿原酸含量与生品相比，有不同程度的增加，其增加率分别为盐炙品20.77%，盐蒸品39.62%，酒炙品27.69%；而羊脂炙品中绿原酸的含量则有所降低，下降率为25%。

　　中医药学认为，淫羊藿入肝、肾二经，具有补肾壮阳、祛风、除湿、通经络的功效。巫山淫羊藿盐炙品、盐蒸品中，绿原酸的含量高于生品，与中医药理论中“盐咸入肾”之说相吻合。

　　绿原酸具有抗氧化（如保护肾上腺素免受氧化等）、抗诱变、抗心血管病、保肝利胆、抗菌、抗病毒的药理作用，还具有肾上腺素的类似作用［2］。另据笔者对巫山淫羊藿不同炮制品与生品中的主要有效成分淫羊藿苷的含量分析比较［3］，都有相当程度的增加，增加率分别为：盐炙品51.60%，盐蒸品77.63%，酒炙品17.35%，羊脂炙品78.08%。临床用淫羊藿历代均以炮制品为主，因此，综合考虑用盐蒸品应是最佳选择。

　　（本文图片见封三）（略）

　　【参考文献】

　　1  沙明，曹爱民，杨松松.高效液相色谱法测定朝鲜淫羊藿中绿原酸的含量.中国中药杂志，1996，21（2）：108.

　　2  高锦明，张鞍灵，张康健，等.绿原酸分布、提取与生物活性研究综述.西北林学院学报，1999，14（2）：73-82.

　　3  高言明，陈惠玲，魏升华，等.巫山淫羊藿及其不同炮制品中淫羊藿苷的含量测定.贵阳中医学院学报，2005，4：11-12.

　　(编辑：魏  冉)

　　*基金项目：贵州省教育厅科学研究基金资助项目（编号：黔教科2002219）

　　作者单位： 550002 贵州贵阳，贵阳中医学院药学系