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电泳法是生物化学三大技术的一种,是用来分离那些化学性质相近,结构相似,用一般方法难以分离的物质,如蛋白质、氨基酸、核酸等[1]。通常电泳法只能测得各蛋白之间的百分比,而其真实含量则不能求得,通过改良此法,可以测得血清白蛋白的真实含量,并与BCG法进行比较,结果发现差异无显著性。
1 材料与方法
1.1 材料 DYY-Ⅲ型电泳仪(北京六一仪器厂);723分光光度计(上海光谱仪器有限公司);LG电冰箱(韩国庆兰冒原市加陪丁洞391-2);微量加样器(上海荣泰生化工程有限公司);HH-2数显恒温水浴锅(常州国华有限公司);醋酸纤维素薄膜(浙江台州);白蛋白(ALB)测定试剂盒;10份新鲜正常血清。
1.2 方法 (1)将11条醋酸纤维素薄膜按程序进行浸泡,浸透后取出,用滤纸吸干,于无光泽面距薄膜端1.5 cm处,用微量加样器准确加5 μl血清点样,每份血清点10条薄膜带,再用微量加样器准确用5 μl标准白蛋白点样,按程序进行电泳,然后进行染色、漂洗、剪带、洗脱、比色,记录实验结果。共做10份血清。(2)同样的血清,用白蛋白(ALB)测定试剂盒—BCG法测定其白蛋白含量,每份血清做10管,并与电泳血清一一对应。
1.3 统计学方法 统计资料用t检验进行组间比较,实验结果用均数±标准差(x±s)表示。
2 结果
血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳测定白蛋白的结果与血清蛋白试剂盒测定白蛋白结果的比较,见表1。
从表1可以看出,血清白蛋白醋酸纤维素薄膜电泳法测定的结果[2]与BCG法测定白蛋白的结果差异无显著性。即血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳法完全可以用来测定血清白蛋白的准确值。
3 讨论
电泳法是生物化学中常用的一种技术,但过去一般只用此法测定血清蛋白之间的百分比,而蛋白的准确值不能测定,通过改良此法,就可以用此法测定蛋白准确值。电泳法与BCG法比较,其缺点为时间较长,通常为2~3 h。优点为电泳法测定血清蛋白时,不仅能测得白蛋白的准确值,表1 电泳法和BCG法测定结果(略)而且可以测得α1、α2、β、γ球蛋白的准确值。
[参考文献]
1 俞建瑛,蒋宇,王善利.生化实验技术.北京:化学工业出版社,2005,81-83.
2 卿亮荣,芮代莉,梁秀云,等.乙酸纤维素薄膜电泳法鉴别十种动物类药材.广西中医药,1995,18(1):48-49.
作者单位: 712083 陕西咸阳,陕西中医学院
(编辑:宋 青)