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【摘要】 目的 建立琥珀安神丸中五味子醇甲的含量测定方法。方法 采用反相高效液相色谱法，用汉邦C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色谱柱，以甲醇∶水（65∶35）为流动相，流速0.8 ml/min，检测波长250 nm，柱温30 ℃。结果 在该条件下，五味子醇甲在0.02204～0.1102 μg范围内，呈良好线性关系（r=1.0000），平均加样回收率为98.0％，RSD为0.9％（n=6）。结论 本方法操作简单，重现性好，可作为该制剂的含量测定方法。
【关键词】 色谱法；琥珀安神丸；五味子醇甲
琥珀安神丸是由地黄、当归、五味子、柏子仁等十八味药材组成的复方制剂，原质量标准收载于《卫生部药品标准中药成方制剂第十三册》［1］，五味子为方中主药，具有收敛固涩，益气生津，补肾宁心的功能。用于久嗽虚喘，梦遗滑精，遗尿尿频，久泻不止，自汗，盗汗，津伤口渴，短气脉虚，内热消渴，心悸失眠等病症，与本品的功能主治有密切关系。原标准中没有含量测定的方法，为了更有效地控制该制剂的内在质量，本实验选用反相高效液相色谱法［2］测定五味子药材中五味子醇甲的含量，具有操作简便，合理、重现性好的特点，可作为控制琥珀安神丸内在质量的定量指标。
1 仪器与试药
日本岛津LC-2010AHT高效液相色谱仪；紫外检测器；岛津UV-2450紫外分光光度计；KQ-100型超声波清洗器；五味子醇甲对照品（批号171242-200404购自中国药品生物制品检验所）；甲醇为色谱纯，水为纯化水，其他试剂均为分析纯；琥珀安神丸（吉林省某药业生产）。
2 方法
2.1 对照品溶液的制备 精密称取五味子醇甲对照品适量，加甲醇制成每1 ml含11.02 μg的溶液。
2.2 供试品溶液的制备 取本品（批号20060201）重量差异项下的大蜜丸，剪成长约5 mm的碎条，取5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 ml，称定重量，超声处理40 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液2 ml，置中性氧化铝柱（100～200目，1.5 g，内径1 cm）上，用50％甲醇洗脱，收集洗脱液约9 ml，置10 ml量瓶中，加50％甲醇至刻度，摇匀，即得。
2.3 色谱条件
2.3.1 测定波长的选择 取对照品溶液，依法用岛津UV-2450紫外分光光度计在200～400 nm范围内进行扫描，结果五味子醇甲在250 nm波长处有最大吸收，故选择250 nm为本实验的测定波长。
2.3.2 系统适用性实验 分别采用色谱柱：（1）汉邦C18（4.6 mm× 250 mm，5 μm）；（2）迪马钻石 C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），以甲醇-水（65∶35）为流动相，检测波长为250 nm，柱温30 ℃。精密吸取对照品溶液10 μl，供试品溶液20 μl分别注入液相色谱内，测得对照品与供试品的五味子醇甲色谱峰的理论板数分别为：（1） 8537，9515；（2）5821，7734。由此确定合理的理论板数，理论板数按盐酸麻黄碱色谱峰计算应不低于3000。
2.4 方法学考察
2.4.1 标准曲线制备 精密吸取对照品溶液2、4、6、8、10 μl，分别注入液相色谱仪，以进样量为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程为Y=-257.2＋2580880X （r=1.0000）结果表明五味子醇甲在0.02204～0.1102 μg范围内，呈良好的线性关系。
2.4.2 阴性对照实验 按供试品溶液制备方法，制成不含五味子药材的阴性对照溶液。吸取该溶液20 μl，注入液相色谱内，依法测定结果，在与五味子醇甲色谱峰相应的保留时间附近无干扰峰出现。
2.4.3 稳定性实验 取同一供试品溶液，在0、5、10、15、20 h，分别进样20 μl，按五味子醇甲色谱峰面积计，峰面积平均值为230502，RSD为1.2%。结果表明20 h内供试品中的五味子醇甲的含量稳定。
2.4.4 精密度实验 取同一供试品溶液20 μl，重复进样6次，测得五味子醇甲色谱峰面积的平均值为235940，RSD=1.0%。测定结果表明该方法精密度良好。
2.4.5 重现性实验 取同一供试品，按供试品溶液制备方法，平行制备6份，对照品溶液进样10 μl，供试品溶液进样20 μl，依法测得样品中五味子醇甲含量的平均值为0.122（mg/g），RSD=1.5%，表明该方法重现性良好。
2.4.6 回收率实验 精密称取经同法测定，已知含量的供试品2.5 g（批号为20060201，含量为 0.112 mg/g）6份，分别精密加入新配制的五味子醇甲对照品溶液（12.92 μg/ml）25 ml，按供试品溶液的制备方法制备，对照品溶液进样10 μl，供试品溶液进样20 μl，依法测定，计算回收率，五味子醇甲的平均回收率为98.0％，RSD=0.9％。结果表明本方法准确可行。
2.4.7 样品测定结果 取5批琥珀安神丸样品，分别按供试品溶液制备方法制备。对照品溶液进样10 μl，供试品溶液进样20 μl，每批测定2次，五味子醇甲的平均含量见表1。表1 样品测定结果
3 讨论
在供试品溶液的制备过程中，首先对加入溶剂的量进行了实验，取供试品5 g，2份，分别加入5倍量和10倍量的甲醇，依本文所述的方法处理并依法测定，结果基本一致。但是加入10倍量甲醇的供试品中的五味子醇甲色谱峰面积大小，与对照品色谱峰的峰面积相差过大，会影响结果的准确性，因此选用5倍量为好。另外在制备供试品溶液时，还对是否用中性氧化铝柱处理进行了实验，首先选用供试品加溶剂超声处理，滤过后直接上样的方法，然后再用本文所述的上中性氧化铝柱的方法，两者所测得的结果基本一致，但未经中性氧化铝柱处理的供试品，色谱图上显示杂质多，并在五味子醇甲色谱峰附近有杂质峰干扰，会影响结果的准确性，因此选用了上中性氧化铝柱的方法。
【参考文献】
1 卫生部药典委员会.卫生部药品标准中药成方制剂（第十三册）.北京：人民卫生出版社，1989，198.
2 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）附录.北京：化学工业出版社，1995，38-40.
作者单位：134300 吉林白山，白山市药品检验所（△通讯作者）