高效液相色谱法测定银黄颗粒中黄芩苷的含量

【摘要】  目的 建立银黄颗粒中黄芩苷的含量测定方法。方法 HPLC法测定银黄颗粒中黄芩苷的含量。采用C18柱，以甲醇-水-磷酸（50∶50∶0.2）为流动相，检测波长为274 nm。结果 在0.251～1.503 μg/ml范围内线性关系良好（r=0.9997，n=6），平均回收率为98.1%（RSD=0.58%，n=6）。结论 该方法简便、准确，可为标准的修订提供可行的依据。

【关键词】  高效液相色谱法；银黄颗粒；黄芩苷；含量测定

     Determination of baicalin in Yinhuang particle by HPLC

    PENG Xi.Central Hospital of Shaoyang，Shaoyang 422000，China

    ［Abstract］  Objective  To establish the determination method for baicalin  in Yinhuang particle.Methods  The content of baicalin in Yinhuang particle was determined by HPLC.We carried out the experiment with C18 column and acetonitrile-water-phosphoric acid（50∶50∶0.2）as the mobile phase.The detection wavelengh was 274 nm.Results  The linear range was 0.251～1.503 μg/ml（r=0.9997，n=6）.The average recycling rate was 98.1%，RSD=0.58%，n=6）.Conclusion  The method is simple and accurate.It can offer the feasible basis for revision of the standard.

    ［Key words］  high-performance liquid chromatography;Yinhuang particle;baicalin;determination

    银黄颗粒是由金银花提取物和黄芩提取物制成的颗粒，具有清热、解毒、消炎的功能。用于急慢性咽炎、上呼吸道感染。但该制剂现行质量标准无含量测定项目，为了有效控制药品质量，确保该制剂的疗效，本文以方中主药黄芩的有效成分黄芩苷为定量控制指标，采用高效液相色谱法（HPLC）测定银黄颗粒中黄芩苷的含量，方法简便、准确，现报告如下。

    1  仪器和试药

    1.1  仪器  Agilent 1100 Series高效液相色谱仪；METTLER AE 240电子分析天平;SB 3200超声波清洗器。

    1.2  试药  黄芩苷对照品由中国药品生物制品检定所提供（批号110715-200212，供含量测定用）；流动相所用甲醇为色谱纯；水为重蒸馏水；其他试剂均为分析纯。银黄颗粒3批（湖南三九南开制药有限公司，批号20060122，成都市湔江制药厂，批号060502-294，南昌济顺制药有限公司，批号20060806）。

    2  方法与结果

    2.1  波长的选择  取黄芩苷对照品进行紫外线扫描（200～400 nm），结果在274 nm波长处有最大吸收，参考文献［1～3］选择274 nm作为检测波长。

    2.2  色谱条件［4］  色谱柱：NUCLEOSIL C18（10 μm，4.6 mm×250 mm）；流动相：甲醇-水-磷酸（50∶50∶0.2）；检测波长：274 nm;流速：1.0 ml/min；柱温：25 ℃；进样量：10 μl。

    2.3  溶液的制备与测定法

    2.3.1  对照品溶液的制备  取黄芩苷对照品10 mg，精密称定，置100 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5 ml，置10 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml含黄芩苷50 μg）。

    2.3.2  供试品溶液的制备  取本品装量差异项下内容物，研细，取约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加水20 ml，称定重量，加热使溶解，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，精密加入乙醇20 ml，摇匀，放置过夜，取上清液，滤过，取续滤液，即得。

    2.3.3  空白对照溶液的制备  以相同的处方比例，制得不含黄芩的空白样品。按“2.3.2”项下方法制成空白对照溶液。

    2.3.4  测定法  分别精密吸取上述3种溶液各10 μl，按上述色谱条件分别测定，见图1～3。结果表明供试品色谱图中呈现与黄芩苷对照品保留时间相应的色谱峰，且空白对照无干扰。

    2.4  线性关系考察试验  取黄芩苷对照品10 mg，精密称定，置100 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5 ml，置10 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。精密量取上述溶液5、10、15、20、25、30 μl进样测定，记录峰面积。以浓度（C）对峰面积（A）进行线性回归，得回归方程为A=159.6629 C-49.9333，r=0.9997。结果表明黄芩苷在0.251～1.503 μg/ml范围内线性关系良好。

    2.5  精密度试验  精密吸取上述对照品溶液各10 μl，连续进样5次，所得峰面积积分值1516、1521、1535、1530、1538，结果峰面积平均值为1528，RSD为0.6%（n=5）。

    2.6  稳定性试验  精密吸取上述供试品溶液10 μl，于0、2、4、6、8 h测定峰面积，结果峰面积几乎不变，表明供试品溶液至少在8 h内稳定。

    2.7  重复性试验  分别精密量取同一样品（成都市湔江制药厂，批号：050401）6份，照“2.3.2”项下操作，测得含量平均值为17.6 mg/g，RSD为0.82％。

    2.8  加样回收率试验  精密称取同一已知含量样品（成都市湔江制药厂，批号：050401）约1 g共6份，定量加入适量的黄芩苷对照品，照“2.3.2”项下操作，并按上述色谱条件测定。结果见表1，平均回收率为98.1%，RSD为0.58％（n=6）。

   2.9  样品测定  按上述测定方法对三个厂家样品中黄芩苷含量进行测定，结果见表2。

    3  讨论

    （1）取黄芩苷对照品进行紫外线扫描（200～400 nm），结果在274 nm波长处有最大吸收，试验选择274 nm作为检测波长。（2）本文参照银黄口服液的色谱条件，以甲醇-水-磷酸（50∶50∶0.2）进行检测，样品色谱图的分离效果好，保留时间较长。（3）由表2可见不同厂家的样品中黄芩苷的含量差异太大，而现在对其含量没有一个统一的限度标准，应考虑增加含量测定项，以确保药品的质量，保证用药安全有效。（4）实验表明，本法测定操作简单，结果准确，精密度高，线性关系、重复性好，空白无干扰，可作为银黄颗粒质量标准含量测定方法。表1  加样回收率试验结果表2  样品测定结果

【参考文献】
  1 中华人民共和国卫生部药典委员会.中国药典.北京:化学工业出版社，2005，598-599.

2 陈遇英.紫外分光光度计测定辛芩口服液黄芩苷的含量.中成药，1998，20（9）：14.

3 陈发奎.常用中草药有效成分含量测定.北京：人民卫生出版社，1977，615.

4 张玲莉，彭燕，涂毅.高效液相色谱法测定黄芩口服液中黄芩苷的含量.中国药师，2005（5）：388-389.

作者单位：422000 湖南邵阳，邵阳市中心医院