岩陀中岩白菜素的含量测定

【关键词】  白菜素

    Content determination of Bergenin in Rhizoma Rodgersiae

    LIU Qing-lin，ZHAO Zhi-min.The Hospital of Traditional Chinese Medicine in Changsha，Changsha 410002,China

    ［Abstract］  Objective  To study a RP-HPLC method that determined the Bergenin content in the Rhizoma Rodgersiae.Methods  Bergenin was separated completely on an C18 column，using a mixture of methanol and water （25∶75）as mobile phase，with UV detection at 275 nm.Results  Bergenin has better linear correlation between 0.36 μg and 3.6 μg.The results also have shown the recovery rate was 98.91%，RSD 2.28%.Conclusion  The method is very stable and accurate，and has good reappearance.It can be used for quality control of Rhizoma Rodgersiae.

    ［Key words］  RP-HPLC；Rhizoma Rodgersiae；Bergenin

    岩陀为虎耳草科植物岩陀（Rodgersia Sambucifolia Hemsel.）的干燥根茎。功效为解热、祛风、收敛，用于感冒疼痛、风湿骨痛、肠炎、菌痢、外伤出血［1］。岩陀中岩白菜素的含量测定还未见报道，因此，笔者建立反相高效液相色谱法测定岩陀中有效成分——岩白菜素的含量，来控制岩陀的质量，以确保临床疗效。

    1  仪器与试剂

    1.1  仪器  日本岛津LC-10AT高效液相色谱仪，SPD-10A紫外检测器；N3000色谱数据工作站，AS-3120超声波清洗机（天津奥特赛恩斯仪器有限公司）；BS110S电子天平（北京赛多利斯天平有限公司）。

    1.2  样品  岩陀（分别购自云南强发中药材有限公司、昆明菊花园中药材市场和成都五块石中药材市场，经湖南中医药大学中药鉴定教研室鉴定为虎耳草科植物岩陀的干燥根茎）；岩白菜素（供含量测定用，中国生物制品药品检定所，批号：111532-200202）。

    1.3  试药  甲醇为色谱纯，水为纯化水，其余试药均为分析纯。

    2  方法与结果

    2.1  色谱条件  （1）色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱（250 nm×4.6 mm，5 μm）；（2）流动相：甲醇-水（25∶75）；（3）检测波长：275 nm；（4）流速：1.0 ml/min，柱温：40 ℃。

    2.2  对照品溶液的制备  精密称取岩白菜素对照品适量，分别加甲醇-水（25∶75）配制成浓度为0.098 mg/ml和0.18 mg/ml的岩白菜素对照品溶液。

    2.3  线性关系的考察  分别精密吸取岩白菜素对照品溶液（浓度0.098 mg/ml）2 μl、4 μl、10 μl、12 μl、18 μl、20 μl，注入液相色谱仪，以岩白菜素进样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为Y＝2E＋06X＋32684（r＝0.9999）。结果表明岩白菜素在0.36～3.6 μg范围内具有良好的线性关系。

    2.4  精密度实验  精密吸取上述对照品溶液（0.098 mg/ml）20 μl，重复进样5次，得到峰面积积分值分别为3699181、3633579、3652094、3630391、3638198，RSD=0.78%。表明该方法精密度良好。

    2.5  样品测定  取岩陀药材细粉约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶，加甲醇25 ml，称定重量，超声处理45 min，取出，放冷，再称定重量，以甲醇补足减失的重量，滤过，精密量取续滤液2.5 ml，置25 ml容量瓶中，加甲醇-水（25∶75）至刻度，过微孔滤膜（0.45 μm）作为供试品溶液。精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20 μl，注入液相色谱仪，测定，即得。结果见表1。表1  药材含量测定结果

    2.6  重复性实验  取同一批岩陀药材细粉（购于云南强发中药材有限公司）5份，每份0.5 g，精密称定，按2.5项下的含量测定方法进行测定，结果分别为6.91%、6.85%、6.94%、6.88%、6.89%，平均为6.89%，RSD=0.49%。表明该方法具有较好的重复性。

    2.7  稳定性实验  取重复性实验项下的供试品溶液，置阴暗干燥处室温密闭放置，每2 h进样一次，每次20 μl，峰面积积分值分别为2243981、2292008、2264577、2350369、2284703、2296828，RSD=1.46%，表明样品溶液中岩白菜素在10 h内有良好的稳定性。

    2.8  回收率实验  取已知含量（6.89%）的岩陀药材细粉（购于云南强发中药材有限公司）6份，每份约0.25 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，按2.5项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定，计算回收率，平均回收率为98.91%，RSD=2.28%，见表2。表2  回收率实验结果

    3  讨论

笔者曾对提取溶媒进行了比较研究，结果在甲醇、无水乙醇、95%乙醇三者中以甲醇提取效果最佳；曾对回流提取法与超声波提取法进行了比较研究，结果以超声波提取法为佳；还对提取时间进行了筛选，结果表明超声提取45 min后岩白菜素的含量基本上不再增加。对流动相进行了优化，分别选择了乙醇-水（15∶85）、乙醇-水（10∶90）、甲醇-水（25∶75）、甲醇-水（30∶70）作为流动相，结果表明以甲醇-水（25∶75）为流动相效果最佳，岩白菜素峰形对称、尖锐，理论塔板数达6400（图1、2），且检验成本低，故确定流动相为甲醇-水（25∶75）。图1  岩白菜素的HPLC图谱

    选用RP-HPLC测定岩陀中岩白菜素含量，不仅操作简便、准确，且重现性好，可用于岩陀的质量控制。根据测定结果并考虑岩陀的采收季节、加工、储存等因素，可暂定岩陀中岩白菜素的含量不得少于3.50%。

【参考文献】
  1 贵州省卫生厅.贵州省中药材质量标准.贵阳：贵州人民出版社，1988，80.

作者单位：410002 湖南长沙，长沙市中医院