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【摘要】 目的 比较浸渍法、一般回流提取法、连续回流法、超声提取法、复合方法提取黄连中盐酸小檗碱的提取率。方法 通过选用正交实验法确立的试验体系和条件，采用紫外分光光度计来测定盐酸小檗碱的含量。结果 选择不同的提取工艺盐酸小檗碱提取率有显著差异。结论 最佳提取工艺是：第一为复合方法（浸渍法加超声），其次为乙醇回流、超声（聚能式）、连续回流、超声（发散式）、浸渍提取法。
【关键词】 黄连素；盐酸小檗碱；提取工艺；正交实验设计；提取率
Comparison on extraction rate of berberine in different extraction process
BIAN Jun-chang,YANG Jing,JING Hui,et al.Department of pharmacy,Xi'an Medical College,Xi'an 710021,China
［Abstract］ Objective To compare impregnation，extraction back to normal，continuous circumfluence，ultrasonic extraction，complex method of extraction of berberine hydrochloride in the Chinese extraction rate.Methods Through the selection of orthogonal experimental method to establish a pilot system and conditions，using UV spectrophotometer to determine the content of berberine hydrochloride.Results Chose a different extraction process berberine extraction rates were significantly different.Conclusion The best extraction process is: the first is composite method （impregnation plus ultrasound），followed by ethanol reflow，ultrasound （energy-gathered type），for the return of ultrasound （divergence type），impregnated extraction.
［Key words］ berberine;berberine Hydrochloride;extraction process;orthogonal experimental design;extraction rate
黄连为毛茛科植物黄连（Coptis Chinensis Franch）、三角叶黄连或云南黄连的干燥根茎。药材依次习称为“味连”、“雅连”、“云连”。根茎中化学成分：（1）多种异喹啉类生物碱：小檗碱（berberine）5%～8%、黄连碱（coptisine）、甲基黄连碱（worenine）、巴马汀（palmatine）、药根碱（jateorrhzine）、木兰碱、表小檗碱（epiberberine）、groenlandicine和berberastine等；（2）酸性成分：阿魏酸、绿原酸；（3）无机盐类：钾、磷、镁、钠等［1~4］。黄连素，又名盐酸小檗碱，是黄连中主要的成分之一，黄连素不仅抗菌谱广，还具有降压、降血糖、抗心律失常、抗癌等多种新用途。黄连素的提取方法很多，如浸渍法、煎煮法、渗滤法、一般回流提取法、连续回流法、超声提取法、超临界萃取等。本文主要比较几种常用提取工艺对黄连素提取率的影响。
1 仪器与试药
1.1 仪器 “弘祥隆”DCTZ-2000型三频多用途恒温超声提取仪（北京弘祥隆生物技术开发有限公司）;SB5200DT超声波清洗机（宁波新芝生物科技股份有限公司）；UV751GB型紫外分光光度计；索氏提取仪；旋转蒸发仪等。
1.2 中药 黄连（购自西安东郊药材公司，经鉴定为味连）；盐酸小檗碱对照品（来自中国药品生物制品检定所）；其他试剂均为分析纯。
2 方法
2.1 样品制备 粉碎黄连药材过60目筛，称30 g粉末，0.5%硫酸浸泡，取滤液加石灰乳调pH 8～9，产生沉淀，过滤，滤液加5%的食盐盐析，再加浓盐酸调pH 2～3，静置过夜，收集沉淀，蒸馏水溶解并加热，趁热过滤，滤液加盐酸调pH 2～3放冷结晶，即得精品。
2.2 标准曲线绘制 精密称取黄连素标准品4 mg置100 ml容量瓶中，加蒸馏水溶解，定容后得储备液。精密量取储备液1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0 ml于25 ml量瓶中，以蒸馏水做空白，在345 nm处测定吸光度，得回归方程C=15.6053A-0.124 其中A为吸光度，C为溶液浓度，相关系数r=0.9988，以此计算提取液中黄连素的浓度，求出提取率。
2.3 黄连素含量测定 提取液定容到100 ml，精密量取0.5 ml，稀释1 000倍，以蒸馏水做空白，操作同标准曲线，以对应的A值计算黄连素的浓度C，计算提取率［5］。
3 实验结果
3.1 单因素实验 以下七种不同提取工艺的操作为：每种提取方法皆取三份相同样品，平行操作，提取率计算时求其平均值。
3.1.1 浸渍法提取 30 g粉末，0.5%硫酸浸渍24h，提取三次，滤液处理同2.1项。
3.1.2 一般回流法 30 g粉末，9倍体积的50%乙醇85 ℃直接提取三次，挥去乙醇，浓缩至100 ml，滤液处理同2.1项。
3.1.3 连续回流提取法 30 g粉末，95%乙醇直接提取，挥去乙醇，浓缩至膏状，加蒸馏水100 ml，滤液加5%的食盐盐析，再加浓盐酸调pH 2～3，静置过夜，收集沉淀，精制同2.1项下方法。
3.1.4 超声提取法（聚能式 20 kHz） 30 g粉末0.5%硫酸浸渍后直接提取三次，滤液处理同2.1项。
3.1.5 超声提取法（发散式1，频率40 kHz） 30 g粉末0.5%硫酸浸渍后直接提取三次，滤液处理同2.1项。
3.1.6 超声提取法（发散式2，频率80 kHz） 30 g粉末0.5%硫酸浸渍后直接提取三次，滤液处理同2.1项。
3.1.7 复合方法 30 g粉末0.5%硫酸浸渍过夜后，用聚能式（20 kHz）超声提取三次，滤液处理同2.1项。
3.2 不同提取工艺下黄连素的平均提取率比较 见表1。表1 各处理方法提取率
4 讨论
（1）提取法采用正交实验设计的结果，即浓度为0.5%的稀硫酸提取，其中回流选用50%乙醇，9倍体积，85 ℃回流提取三次，每次1 h；连续回流乙醇浓度为95%，温度85 ℃提取至无色。（2） 影响提取率的因素：药材的来源、真伪优劣；药材的粉碎度；提取工艺及操作；溶剂的选择；提取的温度、浓度及时间；人为操作因素等。（3）盐酸小檗碱的性质 ：在热水、热乙醇中溶解度较大，在冷水、冷乙醇中溶解度小，在硫酸中溶解度大，在盐酸中溶解度小，加入NaCl可以促进其析出结晶，且NaCl用量5%~10%（W/V）最为理想。经长期实验观测，加盐顺序也很重要，次序为先加盐后再用浓盐酸调pH 2~3，这样黄连素收率高。（4）盐酸小檗碱的提取方法较多，根据上述结果笔者认为复合方法（浸渍加超声聚能式）、一般回流法，二者耗时较短、效率高、提取率高，可以适用于工业生产；经济方法可以选用浸渍法提取，成本低，经济实惠，但提取率低，时间长。
【参考文献】
1 黄志强，周民杰，毛献萍，等.黄连中小檗碱的超声提取工艺.化学工程师，2006，3（8）：1002-1124.
2 席国萍，何照范.黄连中小檗碱的提取工艺.山地农业生物学报，2004，23（6）：502-506.
3 杨志胜，秦秀芹，王蕊娥，等.提取黄连素最佳条件的选择.西北药学杂志，1996，11（1）：16-17.
4 吴剑峰，王宇.天然药物化学（本科），第4版.北京：人民卫生出版社，2007，71.
5 吴立军.天然药物化学（高职高专）.北京：人民卫生出版社，2008，82.
（编辑：陆 华）
作者单位：710021 陕西西安，西安医学院药学系