Literature
首页医源资料库在线期刊成都医学院学报2006年第1卷第1期

蜂胶中总黄酮的分离及其含量测定

来源:成都医学院学报
摘要:【摘要】目的利用聚酰胺柱层析分离蜂胶中总黄酮,并运用紫外分光光度法(UV)对其进行含量测定。方法利用聚酰胺柱层析,干法上样,分别用30%、95%不同浓度的乙醇进行洗脱,盐酸—镁粉反应定性检测及分光光度法定量测定,并对分光光度法进行了改进。结果经定性检测,30%乙醇洗脱液几无黄酮,紫外分光光度法测量95%......

点击显示 收起

【摘要】    目的 利用聚酰胺柱层析分离蜂胶中总黄酮,并运用紫外分光光度法(UV)对其进行含量测定。方法 利用聚酰胺柱层析,干法上样,分别用30%、95%不同浓度的乙醇进行洗脱,盐酸—镁粉反应定性检测及分光光度法定量测定,并对分光光度法进行了改进。结果 经定性检测,30%乙醇洗脱液几无黄酮,紫外分光光度法测量95%洗脱液中总黄酮的含量为0.956mg/ml。结论 利用聚酰胺柱层析初步纯化蜂胶中总黄酮,并提供了测量蜂胶中总黄酮含量的一种快速、准确的方法—紫外分光光度法,为进一步分离其中的单体黄酮及研究其药理活性打下了基础。

【关键词】  蜂胶;总黄酮;聚酰胺柱层析;分光光度法

   Separation and Determination of Flavonoids in Proplis

    GAO Xiu-rong,ZAN wang

    (Department of Pharmacy,Chengdu Medical College,Chengdu 610083 China)

    Abstract:Objective To separate the flavonoids in proplis by polyamide column chromatography and to establish the method of UV for determination of flavonoid.Methods Flavonoid of proplis was separated by polyamide column chromatography with 30%,95% ethanol and determined by Hd-Mg reaction and ultraviolet-visible spectrophotometry.Results There was almost no flavonoid in eluate of 30% ethanol,the concentration of eluate of 95% ethanol was 0.956mg/ml by U-V Spectrophotometry.Conclusion The flavonoid was primarily purified by polyamide column chromatography,and a fast,accurate method— ultraviolet-visible spectrophotometry was put forword.

    Key words:proplis;flavonoid;polyamide column chromatography;ultraviolet-visible spectrophotometry

    蜂胶(proplis)是蜜蜂从植物树芽、花苞和树干处采集的树胶,并混入蜜蜂上颚腺分泌物和蜂蜡等成分而成的一种具有芳香气味的褐色胶状固形物。蜂胶的化学成分极为复杂,其主要活性成分包括黄酮类、萜烯类、有机酸、芳香醛、酯类及多种氨基酸、酶、维生素、矿物质等[1]。黄酮类是蜂胶中最主要的活性物质,具有抗癌,治疗糖尿病,抗菌,抗病毒,抗氧化,调节免疫等多种功能。蜂胶中的黄酮类成分有上百种,但到目前为止仅分离了30多种。为了更加明确蜂胶的有效成分,更加有效地利用蜂胶,本文利用聚酰胺柱层析分离蜂胶中的总黄酮,并运用分光光度法进行了含量测定。

    1 材料与方法

    1.1 主要试剂和仪器

    1.1.1 仪器 北京市朝阳区来广营医疗器械厂GD65-1型鼓风干燥箱;上海良平仪器仪表有限公司YB电子天平;上海沪西分析仪器厂DHL-A电脑恒流泵;安捷伦科技上海分析仪器有限公司751GW分光光度计。

    1.1.2 原料 蜂胶原料购自成都永丰养蜂场。

    1.1.3 试剂 芦丁标准品(中国药品生物制品鉴定所提供);100~200目聚酰胺粉(江苏临江化工厂);95%乙醇(成都化学试剂厂);Al(NO3)3(成都科龙化工厂);NaNO2(成都化学试剂厂);NaOH(成都化学试剂厂)

    1.2 方法

    1.2.1 聚酰胺柱层析分离蜂胶总黄酮 取-20℃冻存的蜂胶块20.0g,粉碎,80%乙醇回流提取3次,3次乙醇液分别为100ml,80ml,60ml(每次45min),提取液合并,减压浓缩,得总浸膏7.0g。

    利用聚酰胺柱色谱粗分,用95%乙醇洗去吸附剂中的醇溶性杂质,干法上样,分别用30%和95%乙醇洗脱,盐酸—镁粉反应,30%洗脱液呈阴性,95%洗脱液呈阳性,证明30%洗脱液中几无黄酮,95%洗脱液中为总黄酮,为供试液。

    1.2.2 运用分光光度法测定供试液中总黄酮的含量1.2.2.1 标准液的配制 精密称取芦丁标准品20mg,置100ml容量瓶中,80%乙醇溶解,定容,即得0.2mg/ml芦丁标准液。

    1.2.2.2 标准曲线的制备 精密吸取芦丁标准液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0ml于10ml容量瓶中,加5%NaNO2试液0.4ml,摇匀,静置6min,加10%Al(NO3)30.4ml,静置6min,加4%NaOH 4.0ml,用蒸馏水补足,摇匀。另分别吸取芦丁标准液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0ml于10ml容量瓶中,蒸馏水定容,分别作为上述6管的空白对照(即加相同量的芦丁,不加显色剂作为空白对照);放置15min,510nm处比色。以浓度(C)与吸光度(A)进行线性回归,得回归方程为A=12.491C-0.002 5,R=0.999 2。

    1.2.2.3 测定样品含量 精密吸取供试品溶液0.5ml,置10ml容量瓶中,以供试液为空白对照,按标准曲线项下方法显色,平行测定5次,并根据标准曲线计算供试液中总黄酮含量。结果见表1。

    1.2.2.4 稳定性试验 吸取供试液适量,按标准表1 95%乙醇洗脱液中总黄酮的含量曲线项下方法在5min,10min,15min,20min时测定,以确定供试液的稳定性。

    1.2.2.5 精密性实验 吸取供试液适量,按标准曲线项下方法重复测定5次,计算其变异系数RSD。

    1.2.2.6 回收率实验 精密吸取已知含量的供试液适量,共5份,分别加入芦丁标准品适量,按标准曲线项下方法测定,计算其平均回收率和RSD。

    2 结果

    2.1 供试液中总黄酮的含量

    供试液经显色平行5次的平均吸光度A=0.597,代入回归方程,计算,得总黄酮含量为0.956mg/ml。

    2.2 稳定性实验

    加入显色剂后15min内,供试液吸光度值几乎无变化,15min后吸光度值急剧下降,且颜色变淡,证明测定应在加入显色剂后15min内进行。

    2.3 精密性实验

    精密性实验的变异系数RSD为1.1%,说明该方法精密性良好。

    2.4 回收率试验

    经回收率实验,测得平均回收率为99.76%,RSD为2.10%。结果见表2。

    3 讨论

    3.1 由于产地不同,蜂胶的成分及各种理化性质有较大的差异  针对这一特点,本文对成都地区产的蜂胶的提取所用乙醇最佳浓度进行了探讨,发现用80%乙醇提取时,提取液中总黄酮含量最高(文献报道用70%或95%提取[3]),确定80%乙醇为总黄酮的最佳提取浓度,为类似工作提供了参考。

    3.2 聚酰胺是分离总黄酮较为理想的吸附剂,而梯度乙醇是常用洗脱剂  在预实验中,分别用10%,30%,50%,70%,95%乙醇进行梯度洗脱,盐酸—镁粉反应检测各洗脱成分,10%,30%乙醇洗脱液中几无黄酮,50%,70%,95%乙醇洗脱液中均含有黄酮,所以在实验中用30%洗去水溶性和低醇溶性成分,用95%乙醇洗洗脱下总黄酮等有效成分,从而初步分离出蜂胶中的总黄酮。表2 回收率试验结果

    3.3 分光光度法测定总黄酮含量

    在510nm处,芦丁标准液和供试液的吸收值均较显色剂的吸收值大,所以测黄酮含量时分别以芦丁标准液和供试液为空白对照,而不以显色剂为空白对照,从而提高了实验的准确性,对分光光度法进行了改进。

    分光光度法测定蜂胶中的总黄酮含量的方法简便,快速,灵敏性高,是一种较好的方法。

【参考文献】
  [1]张源源,崔同.总黄酮含量分析法快速评价蜂胶原料质量[J].中国食品学报,2002,2(3):46.

[2]叶陆星,胡福良.蜂胶中黄酮类化合物的生物学活性[J].养蜂科技.2002,(2):9.

[3]胡福良.蜂胶的提取方法[J].养蜂科技,2000,(5):28.

[4]陈裕光.蜂胶制剂及其应用[J].养蜂科技,1996,(4):28.

作者: 高秀蓉昝旺作者单位:成都医学院药学教研室,成都6100 2013-2-27
医学百科App—中西医基础知识学习工具
  • 相关内容
  • 近期更新
  • 热文榜
  • 医学百科App—健康测试工具