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【关键词】 截瘫
截瘫病人可通过手术建立体神经-内脏神经反射弧，来重构膀胱的神经支配，达到功能重建的目的。在此过程中，出现了一种全新类型的突触躯体运动神经与内脏神经的吻合建立了突触联系，但囿于吻合术导致的组织粘连、炎性反应及组织成分的复杂性，无法去除“干扰”，迄今缺乏对该类突触的认识。交感神经的节前神经元释放的神经递质主要为乙酰胆碱（acetaldehyde,ACh），在神经节与节后神经元形成突触，运动神经元也能释放ACh，颈上神经节神经元(superior cervical ganglion neurons,SCGNs)上具有烟碱样ACh受体，那么，运动神经元与交感神经的节后神经元能建立有功能的突触联系吗？本研究将脊髓运动神经元（spinal motoneurons,SMNs）和SCGNs作共培养，对其突触形成进行初步研究。本研究中，首先用全培养液分离培养新生（小于24 h）Sprague-Dawley SD大鼠颈上神经节的SCGNs。全培养液包括Neurobasal培养基，B27复合添加剂，促运动神经元最强的细胞因子——胶质细胞源性神经营养因子（glial cell derived neurotrophic factor, GDNF），交感神经元生长不可缺少的神经生长因子（nerve growth factor,NGF），L-谷氨酰胺，青霉素和链酶素。然后，分离E16 d SD胎鼠脊髓腹侧组织细胞，经差速贴壁法对SMNs进行纯化后接种在培养有带红色荧光的SCGNs的盖玻片上，观察了它们生长情况。采用神经元的标志物NF200抗体分别与SMNs的标记物ChAT抗体和星形胶质细胞的标记物GFAP抗体作免疫荧光双标，辅以Hoechst核染荧光显示细胞核，计数培养细胞中SMNs量和SCGNs量；其次，共培养研究SMNs-SCGNs突触形成，用琼脂糖和PDL对培养盖片进行“微岛化”处理，在其上低密度培养SCGNs，随后用分子荧光探针DiI予以荧光标记，再将经差速贴壁的E16 d胎鼠脊髓腹侧组织制成的细胞悬液接种于其上，即作SMNs和SCGNs的共培养，用突触形成的标记物P38抗体和ChAT作免疫荧光双标，显示以SMNs为突触前神经元的突触形成情况，并用突触计数、Western blot和RT-PCR揭示突触形成的情况，再在SCGNs上记录微小自发突触后电流（miniature spontaneous current, mSPC），观测功能性突触的形成，皆与单纯培养作对照比较。再次，借助烟碱型受体的特异性阻断剂（HEX）和乙酰胆碱脂酶抑制剂（THA），辅以谷氨酸非NMDA受体阻断剂(CNQX)，对SMNs-SCGNs突触的神经递质和受体作初步研究。研究结果显示：①按此方法原代培养的SMNs和SCGNs生长状态好，SMNs在培养14 d后，生长晕消失，胞质内出现小的黑色颗粒和空泡状结构，突起断裂大部分细胞变圆、变暗，可见少许散在的细胞碎片，逐渐开始衰老；而SCGNs培养16 d时，仍生长晕清晰，细胞状态好。经NF200、ChAT免疫荧光显示：神经元纯度可达87.8％，SMNs纯度可达70.9％，而SCGNs纯度更高达95％；②SCGNs培养1 d后，可用DiI进行标记，经标记的神经元发红色荧光，荧光长期存在，且不会影响其存活状态；③SMNs和SCGNs能在经“微岛化”处理的盖片上作共培养，共培养组的突触计数要显著高于SCGNs组和SMNs组；④Western blot表明在SCGNs组未能检测出P38，而共培养组P38含量要显著高于SMNs组；⑤RT-PCR提示共培养组P38mRNA表达要显著高于SCGNs组和SMNs组之总和；⑥共培养组的SCGNs上记录到微小自发突触后电流，4 d时仅在共培养组能记录到微小自发突触后电流；⑦六烃季铵能阻断共培养组SCGNs上记录到的微小自发突触后电流，THA能增强其微小自发突触后电流，而CNQX对该录微小自发突触后电流无作用。根据以上研究结果，能初步得出以下结论：①用无血清全培养液能成功原代培养SMNs和SCGNs，且该方法能较有效地抑制胶质细胞的生长，神经元纯度高、生长状态好，SMNs存活13 d后可能会老化；而SCGNs则能存活更长时间，荧光染料DiI对它无显著的毒性作用，且荧光可保持较长时间。②虽然生理状态下，SMNs和SCGNs间并不存在突触联系，但在共培养条件下，二者之间能能形成功能性突触联系，建立SMNs-SCGNs突触模型；③SMNs-SCGNs突触的神经递质为乙酰胆碱，受体为烟碱型N1受体，这与生理状态下颈上神经节内交感节前神经元和节后神经元突触相似，只是突触前神经元变成了具同样神经递质的SMNs而已。总之，本研究通过分离培养SMNs和SCGNs，以微岛共培养的方法建立SMNs-SCGNs突触模型，并采用免疫荧光双标、Western blot、RT-PCR镜和膜片钳方法，研究其功能性突触的形成，初步确认其神经递质为ACh，受体为烟碱型N1受体，但SMNs-SCGNs突触形成的具体机制及其分子调控机制尚不清楚，有待进一步研究。本研究能为解除因脊髓或内脏神经系统损伤造成的脏器或组织功能障碍，实现内脏神经的功能重建提供理论参考，有助于全面认识突触的形成机制，为深入研究突触形成的调控机制提供新思路、新视角。
法定量和单位在医学论文中的应用·文摘·1.应严格执行GB 3100—3102-93《量和单位》中有关量、单位和符号的规定及其书写规则。2.各种量和单位除在无数值的叙述性文字和科普期刊中可使用中文符号外，均应使用量和单位的国际符号。非物理量的单位(例如个、次、件、人等)用汉字表示。3.量的符号通常是单个拉丁字母或希腊字母，用斜体印刷(pH例外)，符号后不加缩写点(圆点)。表示物理量的符号作下标时也应用斜体印刷。4.单位符号用正体印刷，无复数形式，符号后不加缩写点(圆点)。来源于人名的单位(例如Pa、Cy等)的首字母大写；“升”可用大写“L”，也可用小写“l”，推荐使用大写；其余单位符号均为小写。5.词头符号用正体印刷，并与紧接其后的单个单位符号构成一个新的单位符号，且两者间不留空隙。106以上的词头符号(例如M、G、T等)大写，其余小写。词头不能单独使用(例如“μm”不能写作“μ”)，也不能重叠使用(例如“nm”不应写作“mμm”)。6.表示量值时，单位符号应置于数值之后，数值与单位符号之间留1／4汉字空。但平面角的单位度(°)、分(′)和秒(″)，数值和单位符号之间不留空隙。7.在图、表中表示数值的量和单位时，对量的符号明确的物理量可采用量符号与单位符号相比的形式，量符号用斜体。例如：m／kg，t／min。鉴于医学专业领域中很多检测指标难以规范量的符号，仍然可以沿用国际通用的表达方式，即列出检测指标名称，在括号内写出单位符号。例如：血糖(mmol·L-１)；或在检测指标名称与单位符号之间隔以逗号“，”。可根据各期刊的实际情况选用其中一种表达方式。8.一般情况下，统一用(升)作为表示人体检验组分浓度单位的分母，而不使用mL(毫升)、dL(分升)、mm3(立方毫米)等作分母。但当涉及高精度微量测试，强调测试样品为微升、毫升等时，可以用mL(毫升)、μL(微升)等作分母。9.单位符号可以与非物理量的单位(例如件、台、人等)的汉字构成组合形式的单位。例如：件／d(件每天)。10.在一个组合单位符号中，斜线不应多于一条。例如：mg／kg／d应写为mg／(kg·d)或mg·kg-１·d-１。11.表示离心加速作用时，应以重力加速度(g)的倍数的形式表达。例如：6000×g离心10min。或者在给出离心机转速的同时给出离心半径。例如：离心半径8cm，12 000r／min离心10min。12.不能把ppm、pphm、ppb等缩写词作为单位使用。