紫外分光光度法测定川明参中总香豆素类成分含量

【摘要】  目的 建立川明参药材中总香豆素含量测定方法。方法 采用紫外分光光度法，以8羟基5甲氧基补骨脂素为对照品，检测波长为273 nm。 结果 在1.53～7.65 μg/ml质量浓度范围内，对照品8羟基5甲氧基补骨脂素的吸光度和浓度线性关系良好，r=0.9991。平均回收率为101.8%，RSD=2.37%（n=6）。 结论 该法简便，可靠，为有效控制川明参药材质量奠定了一定的基础。

【关键词】  川明参； 总香豆素； 紫外分光光度法； 含量测定

Determination of the Content of Total Coumarin in Chuanminshen Violaceum by UV Spectrophotometry

    CHEN Liwei, LIU Jing, ZHAO Bo, LI Hong, ZHANG Mei  (School of Pharmacy, Chengdu University of TCM, Chengdu 610075, China)

    【Abstract】  Objective  To establish a method for determination of the content of total coumarin in Chuanminshen viloaceum. Methods  With 8hydroxy5methoxypsoralen as the standard, the Coumarin in C. viloaceum was detected at 273 nm by UV spectropho tometry. Results  The absorbency and concentration of  8hydroxy5methoxypsoralen had a good linear relation in the range of 1.53～7.65(g/ml (r=0.9991).The average recovery rate was 101.8%, RSD=2.37%（n=6）. Conclusion  This method of content determination is simple and repeatable. Our research has laid a foundation for the quality evaluation on crude chuanminshen.

    【Key words】  Chuanminshen viloaceum； total coumarin； UV spectrophotometry;  content determination

    川明参为伞形科川明参属植物川明参(Chuanminshen violaceum Sheh et Shan)的干燥根，为我国特有单种属植物，是四川道地药材［1］。川明参具有润肺化痰、和胃、生津、解毒等功效，主治肺热咳嗽、热病伤阴，适用于病后补虚和强壮身体，为一药食同源植物，应用广泛。但对该药的质量控制仅《四川中药材标准》1987年版有简单的外观性状描述，2005年版中国药典尚未收载。

    本课题组成员在对川明参药效物质基础进行深入研究，确定了川明参祛痰止咳，滋阴强体药效活性部位（主要含各种香豆素类成分）基础上［23］，以课题组成员从川明参药材中分得的单体化合物为对照，采用紫外分光光度法建立了川明参药材中总香豆素含量测定方法。该法简便，可靠，为有效控制川明参药材质量奠定了基础。

    1  实验部分

    1.1  仪器与试药

    UV1100型紫外分光光度计（上海天美科学仪器有限公司）；电子天平（SartoriusBP211D，十万分之一；SartoriusBP121S，万分之一）；8羟基5甲氧基补骨脂素（由本室制备，纯度>98%）；川明参药材采自四川苍溪、巴中、金堂、中江，由成都中医药大学郭平博士鉴定为伞形科川明参属植物川明参(Chuanminshen violaceum Sheh et Shan)的干燥根；其余试剂为分析纯。

    1.2  方法与结果

    1.2.1  样品溶液的制备  取川明参药材（产地：四川中江）约0.5 g置于100 ml烧瓶中，加20 ml甲醇回流提取两次，每次2 h，合并滤液，水浴挥干。残渣用蒸馏水溶解后用乙醚萃取，乙醚萃取液定容至10 ml，即得样品溶液。

    1.2.2  对照品溶液的制备  取8羟基5甲氧基补骨脂素对照品适量，精密称定，用乙醚溶解并定容，得到对照品溶液（0.051 mg/ml）。

    1.2.3  检测波长的选择  取对照品溶液，样品溶液和空白试剂溶液，于200～400 nm扫描，对照品溶液及供试品溶液均在273 nm处有最大吸收（图1A,B），峰形变化平缓，且空白试剂无干扰，便于定量测定，故选择检测波长为273 nm.

    1.2.4  线性关系考察  分别精密吸取浓度为0.051 mg/ml的8羟基5甲氧基补骨脂素对照品溶液0.3，0.5，1，1.2，1.5于10 ml量瓶中，乙醚定容至刻度，在273 nm下测定不同浓度8羟基5甲氧基补骨脂素的吸光度值A，以浓度(C)为横坐标，吸光度(A)为纵坐标作图，得到回归方程： y=0.086 9x+0.003 8，r=0.999 1.结果表明：在1.53～7.65 μg/ml范围内，对照品8羟基5甲氧基补骨脂素的吸光度和浓度线性关系良好，见图2.

    图2  8羟基5甲氧基补骨脂素浓度和吸光度的关系

    Fig.2  The relation between concentration and absorbency of 8-hydroxy-5-methoxy psoralen

    1.2.5  精密度试验  取上述川明参药材约0.5 g，置于100 ml烧瓶中，按1.2.1项下制备样品溶液，在273 nm波长下测定其吸光度，重复测定6次，其吸光度值的RSD=0.35%，结果表明精密度良好。

    1.2.6  稳定性实验  取上述川明参药材约0.5 g，置于100 ml烧瓶中，按1.2.1项下制备样品溶液。在273 nm波长下于0 min、30 min、60 min、90 min、120 min、180 min分别测定其吸光度值，RSD=2.16%，结果表明供试品溶液在3 h内稳定性良好。

    1.2.7  重复性实验  称取上述川明参药材样品约0.5 g共6份，按1.2.1项下制备样品溶液。在273 nm波长下测定其吸光度并计算含量，RSD=3.63%，结果表明重复性良好。

    1.2.8  加样回收试验  精密称取已知含量的上述川明参药材样品约0.25 g，精密加入14 μg/ml 8羟表1  加样回收率实验结果基5甲氧基补骨脂素对照品溶液2.5 ml，按1.2.1项下制备样品溶液，计算得到8羟基5甲氧基补骨脂素的平均回收率为101.8%，RSD=2.37%.

    1.2.9  样品测定  取不同产地川明参药材样品，按照拟定的含量测定条件进行测定，计算各产地样品中总香豆素含量，结果见表2.表2  川明参药材中总香豆素含量测定结果（n=3）

    2  讨论

    2.1  对样品溶液的制备本实验考察了以下方法

    ①药材用甲醇提取后直接测定；②甲醇提取液挥干，残渣用蒸馏水溶解后分别用乙醚，正己烷萃取后进行测定；③甲醇提取液挥干，残渣用蒸馏水溶解后分别用乙醚、石油醚和乙酸乙酯萃取，萃取液挥干后用甲醇溶解后进行测定。结果表明采用甲醇提取液挥干，残渣用蒸馏水溶解，乙醚萃取后进行测定能满足定量分析要求。

    2.2  本次实验中采用的四川苍溪产川明参药材样品是其作为保健品销售的药材，表面光洁白净，测定结果其中总香豆素含量较低，可能是因为药材前加工次数较多所致。

    2.3  通过高效液相色谱质谱法分析了解到川明参药材中各种单体香豆素类成分含量均较低，故本实验采用紫外分光光度法测定川明参药材中总香豆素的含量。测定结果为川明参药材质量标准建立提供了实验依据。

【参考文献】
  ［1］佘盂兰，单人骅.伞形科两新属——环根芹属和川明参属［J］．植物分类学报，1980，18(1)：4549.

［2］张梅，雨田，苏筱琳，等.川明参镇咳祛痰药理作用研究［J］. 时珍国医国药，2006，17（7）：1 1211 122.

［3］张梅，苏筱琳，雨田，等.川明参药理作用初步研究［J］.中药药理与临床，2007，23（2）:4950.