海蛇发酵去腥后与其生药材的对比研究

【摘要】  目的 探讨海蛇经发酵去除腥味后,与其生品在生药学方面的差异,确定发酵对海蛇各方面的影响。方法 利用性状、显微、薄层及红外扫描四个方面对海蛇生品与发酵品进行研究。结果 海蛇生品与发酵品的生药学特征,发酵前后有一定的差别。发酵品与生品含有同样的氨基酸成分,海蛇在发酵去腥后,仍保持良好的功效。结论 发酵对海蛇的生药学特征影响不大,采用发酵去除海蛇腥味具有一定的可行性。

【关键词】  海蛇;去腥;发酵;生药学

　Comparative study of sea snakes and its deodorized product after fermentation

　　LUO Huanfeng1,HU Changjiang1,LEI Yu2,WANG Xia2

　　(1.Chengdu University of TCM,Chengdu 611173,China;2.Hainan Coconut Island(Group)Co.,Ltd,Haikou 570102,China)

　　【Abstract】 Objective To study pharmacognostical difference between sea snakes and its deodorized products after fermentation and ensure how fermentation affects sea snakes.Methods Sea snakes and its deodorized products after fermentation were comparatively studied in four aspects including characteristics,microscopy,TLC and IR.Results Pharmacognostical characteristics between sea snakes and its deodorized products after fermentation showed a certain difference.The fermented and nonfermented products contained similar amino acid,which proved out that deodorized sea snakes after fermentation had the same functions as before.Conclusion Fermentation can slightly affect sea snakes.It is feasible to deodorize sea snake by fermentation.

　　【Key words】 sea snakes;deodorization;fermentation;pharmacognosy

　《中华本草》[1]中有关平颏海蛇论述:为海蛇科动物平颏海蛇[Lapemis hardwichii(Gray)]的干燥全体。药性:味咸,性平。功能与主治:祛风湿,通络止痛,解毒。主治风湿痹痛,肌肤麻木,疥癣,皮肤湿痒,疮疖。可见海蛇有着广阔的市场潜力,但其本身含有腥味,影响进一步的开发利用。通过研究,确定了发酵去除其腥味[27]的工艺。据文献报道,发酵去腥应用很少,且其机理不清楚,故笔者分别从性状、显微、薄层及红外扫描对其进行研究,比较海蛇发酵前后的差异,确定发酵对海蛇的影响。

　　1 材料

　　1.1 材料

　　本品购于海南省海口市东门市场,经成都中医药大学卢先明教授鉴定为海蛇科平颏海蛇[Lapemis hardwickii(Gray)]的干燥全体。其多于夏、秋季捕捉,捕得后用沸水烫死,除去内脏,烘干或鲜用。

　　1.2 海蛇发酵品

　　用净海蛇段,依照如下操作,制得海蛇发酵品。①取5g酵母菌,加2﹪蔗糖液50 ml敞开活化30 min.②取海蛇段1 kg,将①的处理液转移至海蛇药材中,并加入3 000 ml 2﹪蔗糖液和pH=5缓冲液2 000 ml.充分搅拌,使液体均匀分布于海蛇体。③敞开放置在35～40 ℃培养箱内,发酵100 min,每20 min搅拌1次。④取出海蛇,尽量除去其携带的水,即得。

　　1.3 化学试剂

　　缬氨酸(批号:24200104)、丙氨酸(批号:624200104),均购自中国药品生物制品检定所,其余均为分析纯。

　　2 方法与结果

　　2.1 海蛇炮制前后的性状鉴定

　　海蛇生品全体长69.2～91.5 cm.头较长,鼻孔向上,鼻鳞彼此相接。体侧扁,全体带有深榄色宽横斑,横斑间距1～2鳞宽,在体侧下方尖出呈三角形,有的形成完整环纹。体背鳞片菱形,呈镶嵌状排列,除去内脏的腹面,肌肉土黄色,可见排列均匀而微隆起的肋骨。质坚韧,不易折断。气腥,味咸。

　　海蛇发酵品:海蛇干体长约0.6 cm横切小段。表面橄榄黄,较生药材颜色浅,发白,无腥味,有酵母粉的淡淡清香味,味咸。

　　2.2 海蛇炮制前后的显微鉴定[89]

　　本品粉末黄色或淡黄色,气腥,味淡。①角质鳞片淡灰色或近无色或淡黄色或红棕色,侧面观具半圆形或乳头状突起;表面观呈类圆形,分布有淡灰色或淡棕色细颗粒状物。②皮肤碎片淡黄色或近无色或近红棕色,表面密布棕色或黑色色素颗粒,常聚集成网状或分枝状,细胞界限较清楚。③横纹肌纤维较多,淡黄色或近无色,呈条状或方状,直径4～15 μm,具极细的横纹,明暗相间,横纹平直或稍弯,有的边缘不平整,断面观少见。④骨碎片近无色或淡灰色,呈不规则的碎块。骨陷窝长梭形,大多同方向排列,骨小管稀而稍粗,于横、纵断面均明显可见。

　　二者均具有基本的角质鳞片,皮肤碎片,横纹肌纤维,骨陷窝与骨小管,只是在结构上有微小差别。发酵品角质鳞片较生品少,且其淡灰色居多,无红棕色;侧面观乳头状突起不明显,表面观类圆形突起很大,未看到有棕色颗粒密布。发酵品皮肤碎片和骨碎片较多,其骨陷窝与骨小管常一起,而生品只能看到外露的骨陷窝,长梭形,大多同方向排列。可见发酵会使得海蛇结构上产生一定变化。结果见图1.

　　2.3 海蛇炮制前后的薄层鉴定[1012]

　　海蛇(海蛇发酵品)粉末(过药典三号筛)1 g,加甲醇10 ml,超声处理30 min,滤过,滤液水浴蒸干,加1 ml甲醇溶解,作为供试品溶液。取0.001 g缬氨酸,0.001 g丙氨酸,分别加1 ml甲醇溶解,制成1 mg/ml对照品液。照薄层色谱法实验,吸取上述溶液各1 μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以正丁醇冰醋酸水(4︰1︰1)与显色剂(0.5%茚三酮醇液)以10︰1的混合液及正丁醇冰醋酸乙醇水(5︰1︰1︰2)与显色剂同样的混合液为展开剂,展开,取出,晾干,105 ℃烘箱内烘至显清晰的斑点。2种展开系统供试品色谱中,生品、发酵品与对照品色谱相应的位置上均显紫红色的斑点,说明二者含有同样的化学成分,只是发酵品的含量很明显低于生品。其原因可能是在发酵处理过程中,有些成分溶于水,而损失部分含量。可见发酵未影响海蛇的氨基酸成分结构,只是含量有一定减少。结果见图2.

　　2.4 海蛇炮制前后红外图谱的对比研究[13]

　　2.4.1 仪器与试药 仪器:Prestige21型红外光谱仪(岛津国际贸易上海有限公司),FW4压片机(天津天光光学仪器有限公司),远红外灯,玛瑙研钵。试药:溴化钾分析纯。三批(090101、090102、090103)放大试验海蛇生品与发酵品粉末,过六号筛。

　　2.4.2 样品的制备 取KBr粉末与药材粉末以1︰200混匀,置烘箱烘干。测定时,取适量粉末置玛瑙研钵中研细,即得(操作在红外灯下进行)。

　　2.4.3 KBr的红外光谱图 取分析纯KBr约100 mg,研细,装入压片模具,用压片机加压至30 MPa,维持压力2 min后卸掉压力,得厚约1 mm的透明KBr片进行红外光谱测定,作为空白对照。

　　2.4.4 海蛇样品的红外光谱图 取各批次海蛇生品与发酵品样品适量.按2.4.3项下操作,进行样品红外光谱测定。

　　绝大多数有机化合物的基频振动出现在4 000～400 cm1 区域。6种样品均有明显的两种吸收峰:2 900～3 400 cm 1,1 540～1 660 cm 1.推测090101生品与发酵品,090102生品与发酵品含有酰胺键,而090103生品与发酵品含有CH3及C=O.090101生品与发酵品在3 000 cm 1以上的吸收峰有差别,前者为3 279.44 cm 1,后者为3 422.36 cm 1.在2 350 cm 1处,二者亦有一定差别,前者为波峰,后者为波谷。090102生品与发酵品对比情况同090101.090103生品与发酵品图谱基本相同。可见发酵对海蛇化学成分的官能团有一定影响,结果见图3.

　　3 结论

　　通过对海蛇生品与发酵品的性状、显微、薄层及红外扫描的对比研究,说明发酵对海蛇的结构及化学成分产生了一定影响,但二者含有同样的氨基酸成分,可认为海蛇在发酵去腥后,仍保持海蛇的生药学特征,应该不会影响其功效,进一步说明采用发酵去除海蛇腥味具有较好的可行性。另外,此次研究也为海蛇的基础研究提供了一定依据。

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