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首页医源资料库在线期刊成都医学院学报2010年第5卷第2期

蝙蝠葛酚性碱对BXPC3肿瘤组织中MMP2含量的影响

来源:成都医学院学报
摘要:【摘要】目的观察蝙蝠葛酚性碱对BXPC3肿瘤裸鼠免疫器官的影响和对BXPC3裸鼠瘤组织中MMP2表达的影响。方法建立BXPC3肿瘤裸鼠的动物模型,检测蝙蝠葛酚性碱对裸鼠免疫器官指数的影响。应用SP免疫组织化学方法,检测蝙蝠葛酚性碱对瘤组织MMP2表达的影响。结果蝙蝠葛酚性碱对肿瘤裸鼠的免疫器官指数无明显......

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【摘要】  目的 观察蝙蝠葛酚性碱对BXPC3肿瘤裸鼠免疫器官的影响和对BXPC3裸鼠瘤组织中MMP2表达的影响。方法 建立BXPC3肿瘤裸鼠的动物模型,检测蝙蝠葛酚性碱对裸鼠免疫器官指数的影响。应用SP免疫组织化学方法,检测蝙蝠葛酚性碱对瘤组织MMP2表达的影响。结果 蝙蝠葛酚性碱对肿瘤裸鼠的免疫器官指数无明显影响。蝙蝠葛酚性碱可以降低BXPC3肿瘤裸鼠瘤组织中MMP2的含量,与模型组比较具有统计学意义(P<0.05)。结论 蝙蝠葛酚性碱对BXPC3肿瘤裸鼠的免疫器官无严重影响,其抑瘤作用可能与降低MMP2含量有关。该研究为其在临床应用提供了一定的实验和理论依据。

【关键词】  蝙蝠葛酚性碱;抗肿瘤作用;作用机理;MMP2;BXPC3

 【Abstract】 Objective To observe the effects of PAMD on the immune organs of BXPC3 tumorbearing nude and on the expression of MMP2 in tumour tissues.Methods The metastatic tumor model of tumorbearing nude was established with BXPC3 cell line,the inhibition rate of tumor proliferation was detected after treatment with PAMD. Meanwhile,the effect on immune organ index was detected. Immunohistochemistry was carried out to confirm the expression of MMP2 after treating tumorbearing nude with PAMD.Results PAMD showed no remarkable effects on immune organ index. Meanwhile,PAMD could decrease the content of MMP2 in tumour tissues of tumorbearing nude,compared with the model control group with statistical significance (P<0.05).Conclusion PAMD shows obvious inhibition effect on the tumor growth of tumorbearing nude without serious adverse reaction. The antitumor mechanism of PAMD may be through decreasing the content of MMP2 in tumour tissues of tumorbearing nude,which provides stable scientific basis for reasonable exploiture and application in clinical practice.

  【Key words】 PAMD; antitumor effect; mechanism of action; matrix metalloproteinese2; BXPC3

  胰腺癌是消化系统常见的恶性肿瘤之一,近年来发病率呈逐渐上升趋势,近30年来发病率己增长3~7倍,病死率居恶性肿瘤的第4位[1]。

  蝙蝠葛酚性碱(PAMD)是从中药北豆根根茎中提取的生物碱的混合物,研究发现PAMD具有较好的抗心肌缺血[2]、保护脑缺血再灌注损伤的作用[3]及对人肿瘤细胞PC3、BT5637增殖的影响[4]等作用,且副作用小,蝙蝠葛酚性碱对体外培养人肿瘤细胞株的增殖有明显的抑制和杀伤作用[5]。

  本研究建立了BXPC3肿瘤裸鼠动物模型,应用SP免疫组织化学方法,检测对BXPC3肿瘤裸鼠瘤组织中MMP2含量的影响,初步探讨蝙蝠葛酚性碱的抗肿瘤机制,为寻求中医药防治恶性肿瘤的新途径和研制新药提供了一定的实验和理论依据。

  1 仪器与材料

  1.1 仪器

  电热恒温箱,上海一恒;moticcam3000显微摄影成像系统,美国motic公司;AO切片机,美国;18 cm不锈钢高压锅或电炉或医用微波炉;水浴锅;注射器1 ml若干,上海康寿医疗器械有限公司。

  1.2 材料

  (1)裸鼠40只,体重(20±2)g,雌雄各半,由黑龙江中医药大学药物安全性评价中心提供。(2)胰腺癌瘤株BXPC3由中国科学院上海生科院细胞资源中心提供。(3)蝙蝠葛酚性碱(PAMD)由黑龙江中医药大学药学院王栋教授提供,用时先以1 mol/L HCl溶解后,再用1 mol/L NaOH调pH值至中性,实验时加蒸馏水配制成所需溶液。(4)注射用环磷酰胺(Cyclophosphamide For Injection),江苏恒瑞医药股份有限公司,批准文号:国药准字H32020857.

  2 实验方法

  2.1 胰腺癌BXPC3裸鼠模型的建立

  取出冻存的胰腺癌细胞株BXPC3,立即投入37℃水中,1 min内融化,离心去除冻存液,用约10倍的冷RPMI1640完全培养液洗1次,接种于培养瓶中,待细胞贴壁后更换培养液。肿瘤细胞株培养在RPMI1640完全培养液中,于37℃、饱和湿度、5%CO2的培养箱中,隔日换液,细胞长成单层后,用0.25%胰酶EDTA消化、传代。待细胞进入对数生长期后,收集细胞并用RPMI1640完全培养基调整浓度为5×106个/ml的细胞悬液备用。40只裸鼠右腋窝皮下接种细胞悬液,每只鼠接种0.2 ml(约含瘤细胞数1×106个)。

  2.2 分组

  40只裸鼠于造模后随机分为5组,分别为蝙蝠葛酚性碱高、中、低剂量组;模型对照组;阳性对照药环磷酰胺组。

  2.3 给药

  每日给药剂量为蝙蝠葛酚性碱高剂量20 mg/kg,中剂量10 mg/kg,低剂量5 mg/kg,模型组每日给予同体积生理盐水,阳性对照组注射用环磷酰胺156 mg/kg(每周给药一次)。各组均腹腔注射给药,连续21天。

  2.4 统计学方法

  结果采用Spss11.5 for Windows统计软件分析处理,免疫器官重量结果采用t检验,所得数据以均数±标准差表示,MMP2免疫组化检测结果采用秩和检验,以P<0.05具有统计学意义或P<0.01作为显著性差异。

  3 结果

  3.1 蝙蝠葛酚性碱对BXPC3肿瘤裸鼠的免疫器官的影响

  表1实验结果表明,PAMD高、中、低剂量组的脾指数与模型组比较差异无显著性意义(P>0.05),阳性对照组脾脏指数明显降低,与模型组比较差异有显著性意义(P<0.01)。表1 蝙蝠葛酚性碱对BXPC3裸鼠免疫器官影响结果

  3.2 蝙蝠葛酚性碱对BXPC3肿瘤鼠瘤组织中MMP2表达的影响

  表2表明,MMP2在模型组瘤组织呈高表达,各实验组和模型组肿瘤组织MMP2的表达水平均较模型组有所降低;其中阳性对照组的MMP2表达水平显著降低,与模型组比较有显著性差异(P<0.01);各PAMD组也能降低MMP2的表达,与模型组比较差异有显著性意义(P<0.05)。表2 蝙蝠葛酚性碱对BXPC3肿瘤鼠瘤组织中MMP2表达的影响

  4 讨论

  近年来的研究表明,肿瘤细胞发现浸润和转移的关键步骤之一是对细胞外基质及基底膜的降解,肿瘤细胞分泌的基质金属蛋白酶中MMP2是降解Ⅳ型胶原最主要的酶之一。型胶原是细胞外基质的主要成分[6]。同时MMP2在瘤组织内新生血管的形成过程中起重要作用,血管侵袭阳性的胃癌MMP2前体阳性率显著高于阴性者[7]。在肿瘤结节内新生血管形成的早期MMP2有重要作用,可促使在继发部位不断增殖形成转移灶[8],MMP2的外源性抑制物或反义核酸均能导致肿瘤蛋白水解能力及新生血管能力丧失[9],有研究资料表明,在脑部恶性肿瘤[10] 、结直肠癌[11]和前列腺癌[12]等恶性肿瘤中MMP2的表达率与临床分期、病理分级及淋巴结转移有关。

  笔者采用血清药理学方法,研究PAMD的体外抗肿瘤活性,并对药物的敏感瘤株进行了筛选[4]。在筛选实验中发现,不同浓度蝙蝠葛酚性碱对人胰腺癌细胞株(BXPC3)具有明显抑制作用,剂量为20 mg/ml处理BXPC3瘤株,24 h的抑制率高达82.99%,半数抑制浓度(IC50)为2.034 mg/L.本实验结果表明PAMD可降低肿瘤组织中的MMP2表达水平,这可能是其发挥抑瘤作用的原因之一。

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  [12] Sato H,Kinoshita T,Takino T,et al.Activation of recombinant membrane type 1matrix metalloproteinase(MT1=MMP)by furin and its interaction with tissue inhibitor of metalloproteinase(TIMP)2[J].FEBSLett,1996,393(1):101104.

作者: 苏云明,李宜航,刘坤,章艳,崔艳,李薇婕作者单位:(黑龙 2013-2-27
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