菟丝子的超微指纹特征研究

【摘要】  目的 通过对菟丝子标准样品及市场抽检样品进行研究,建立菟丝子的超微指纹鉴别方法。方法 应用扫描电子显微镜技术对菟丝子标准品及样品进行超微指纹特征研究,并进行了3种不同方法对比试验。结果 扫描电子显微镜下菟丝子样品的超微指纹特征明显。结论 该方法简便、快速、结果准确率高,可用于菟丝子的鉴定。

【关键词】  扫描电子显微镜;菟丝子;超微指纹特征

　【Abstract】 Objective To establish the identification method of Semen Cuscutae by the research of standard sample and the sample of selective examination.Method To probe the ultramicofingerprint features of Semen Cuscutae by sanning electronic microscope.Meanwhile three methods were were analyzed contrastively.Result The obvious ultramicofingerprint features of Semen Cuscutae was observed by electronic microscope.Conclusion This method is fast,convenient and accurate,and it can be used for identification of Semen Cuscutae.

　　【Key words】 Scanning Electronic Microscope;Semen Cuscutae;Ultramicrofingerprint features

　　中药菟丝子在《中国药典》2010年版中收载为旋花科植物菟丝子Cuscuta chinenisis Lam.的干燥成熟种子[1]。味辛、甘性平,归肾经,具有补阳益阴、固精缩尿、明目止泻的功效[2]。因应用广泛,全国销量颇大。但因其种子种类繁多,个头较小,不宜与正品分辨,造成了伪品的掺杂。研究表明,性状、显微及理化是菟丝子的主要鉴别方法[3]。

　　扫描电子显微镜简称扫描电镜,其样品制备方法简单,而且药材不需要制作切片和染色,放大倍数可以从20连续调节到20万倍,景深较大,成像富立体感。近年来,扫描电镜在立体、清晰、多观察角度等方面均较普通光显微镜有不可比拟的优越性,使得其在中药显微鉴定领域的应用越来越受到重视[4]。我们采用扫描电镜[49]对菟丝子标准品及抽检样品进行了检测,探讨其是否能达到准确的鉴别目的,以期为保障临床用药安全有效提供依据。

　　1 材料和方法

　　菟丝子标准品(吉林市食品药品检验所标本室),由吉林省食品药品检验所专家鉴定的标本;菟丝子市场抽检样品1、2为安国药材市场抽检样品,经吉林省药品使劲检验所专家鉴定:样品1为正品菟丝子样品,样品2为伪品。QUANPA200型扫描电子显微镜(荷兰菲利普公司)。

　　分别洗去菟丝子标准品及市场抽检样品表面污物后干燥,储于指形管内备用。将双面导电胶带粘在载物铜台上,然后将其观测样品均匀地弹撒在胶带上,于镀膜机中喷镀纯金,置QUANPA200型扫描电子显微镜下观察其样品的微观结构。分别选择80、300、1000三个不同放大倍数进行观测和摄影,获取其样品的电镜超微指纹特征。

　　同时,分别采用性状鉴别法[1]、薄层色谱法[1]、超微指纹鉴定法,对菟丝子标准品、样品1(正品)、样品2(伪品)各进行20次盲检,进行方法对照。

　　2 结果

　　80倍电子显微镜观察发现,菟丝子标准品整体呈天然浮石块状,表面有细小网络纹理(图1A);菟丝子样品1整体呈天然浮石块状,表面有细小状网络纹理(图1B);菟丝子样品2整体呈杏核状(图1C),表面较平滑,无细小网络纹理。

　　300倍电子显微镜观察发现,菟丝子标准品表面呈现明显蜂窝状纹理,并有明显不规则突起褶皱(图2A);菟丝子样品1表面呈现明显蜂窝状纹理,并有明显不规则突起褶皱(图2B);菟丝子样品2表面呈现细小的疣状纹理,突起不明显(图2C)。

　　1000倍电子显微镜观察发现,菟丝子标准品表面呈现明显的絮状纹理,凹陷处有不规则的颗粒状分泌物(图3A);菟丝子样品1表面呈现明显的絮状纹理,凹陷处有不规则的颗粒状分泌物(图3B);菟丝子样品2表面较平滑,突起不明显,呈现不规则疣状纹理(图3C)。

　　性状鉴别法、薄层色谱法、超微指纹鉴定法3种方法,对菟丝子标准品、样品1、样品2盲检结果表明:在菟丝子的真伪鉴别上,超微指纹特鉴定法准确率明显优于其他方法,且重现性良好(表1)。图1 80倍电镜下菟丝子标准品和样品的电镜指纹特征图2 300倍电镜下菟丝子标准品和样品的电镜指纹特征图3 1000倍电镜下菟丝子标准品和样品的电镜指纹特征表1 超微指纹特征鉴定法与其他方法的对比观察

　　3 讨论

　　通过扫描电镜对菟丝子进行超微指纹研究,样品1与标准品相似度极高,可鉴定为菟丝子;样品2与标准品明显不同,可鉴定为伪品,与专家鉴定结果一致。结果表明菟丝子与其伪品扫描电镜特征区别明显,尤其是在1000倍电镜下,菟丝子表面呈现明显的絮状纹理,且凹陷处有不规则的颗粒状分泌物,超微显微特征明显,可作为该样品的鉴别方法应用。

　　目前现行的《中华人民共和国药典》(2010版)中对于菟丝子的鉴别为性状鉴别,理化鉴别(薄层色谱)[1]。性状鉴别仅凭鉴定者经验进行鉴别,受人为因素影响较大,缺乏可以让人信服的科学依据;而薄层色谱法对掺杂伪品的样品鉴别效果不理想。扫描电镜从微观结构对中药材进行鉴定,理论依据更加充分,且准确率更高。

　　通过扫描电镜方法和性状鉴别法、薄层鉴别法的对照实验,结果表明扫描电镜方法准确率明显优于其他2种方法,完全可以代替目前菟丝子的鉴定方法。此外,本方法操作简便易行,结果可靠,值得推广。

【参考文献】
  　　[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].中国医药科技出版社作,2010.

　　[2] 辛宁,廖月葵.中药菟丝子鉴别研究概述[J].广西中医学院学报,1998,15(2):5657.

　　[3] 朱利祥,杨令家,纪长龙.一种伪品菟丝子的鉴别[J].时珍国医国药,2003,14(11):671672.

　　[4] 闫冲,董凤兰,李连怀.两种黄芪种子的扫描电镜与紫外光谱鉴别[J].时珍国医国药,2005,16(8):720721.

　　[5] 王文兰,傅彩文,傅正良.青葙子、鸡冠花子及苋菜子的鉴别与合理应用[J].河北中医,2007,29(7):645646.

　　[6] 蔡逸平,曹岚,范崔生.枳壳、枳实类中药的电镜扫描鉴定研究[J].江西中医学院学报,1999,11(2):8284.

　　[7] 苑冬敏,鞠庆波,康廷国.扫描电镜在中药显微鉴定中的应用[J].中草药,2004,35(8):附1315.

　　[8] 李金连，胡昌江.胡芦巴盐灸前后指点文图谱对比研究[J].成都医学院学报，2009,4(3):202204.

　　[9] 李洪宇，张丽华，苑广信，等.牛黄解毒丸红外指纹图谱的研究[J].成都医学院学报，2010,5(1):3638.