豚鼠逼尿肌不稳定模型的建立与评估方法的改进

【摘要】  目的 寻找一种简单、可靠的方法建立并评估豚鼠膀胱逼尿肌不稳定模型。方法 成年雌性豚鼠经会阴部尿道结扎，6周后行膀胱穿刺充盈性膀胱测压，观察膀胱压力、容量变化及逼尿肌不稳定的发生情况。结果 实验组逼尿肌不稳定发生率35.9%，对照组无发生，其中逼尿肌不稳定膀胱组膀胱最大压力和最大容量较对照组显著增加(P<0.01)。结论 经会阴部尿道结扎、膀胱穿刺充盈性膀胱测压是建立及评估豚鼠膀胱出口梗阻引起逼尿肌不稳定模型的一种简单、可靠的方法。

【关键词】  豚鼠；膀胱出口梗阻；逼尿肌不稳定；动物模型

    The establishment and evaluation methods of the model of detrusor instability in guinea pig

    Li Yinglong, Wang Qinzhang, Ding Guofu, Wang Jiangping

    (Department of Urology, The First Affiliated Hospital of Medical College, Shihezi University, Shihezi 832008, China)ABSTRACT: Objective  To look for a simple and reliable method to establish and evaluate the model of the detrusor instability in guinea pig. Methods  We ligated the perineal urethra of the adult female guinea pigs and then performed punctio vesicae 6 weeks later, followed by a filling cystometry. And then we observed the bladder pressure, capacity changing and the probability of detrusor instability. Results  Detrusor instability ratio of the experiment group was 35.9%; the control group had no detrusor instability. Compared with those in the control group, the maximum capacity and pressure of the bladder increased significantly in the detrusor instability group (P<0.01). Conclusion  Ligating the perineal urethra and filling cystometry after punctio vesicae are a simple and reliable method to establish and evaluate the model of the bladder outlet obstruction in guinea pig leading to the detrusor instability.

    KEY WORDS: guinea pig; bladder outlet obstruction; detrusor instability; animal model
   
    逼尿肌不稳定(detrusor instability, DI)是临床最常见的膀胱尿道功能障碍之一，与尿频、尿急、紧迫性尿失禁等多种症状的产生有关。膀胱出口梗阻(bladder outlet obstruction, BOO)是引起膀胱功能改变、出现膀胱逼尿肌不稳定的最常见原因。近年来国内外采用了多种动物和方法建立膀胱出口梗阻模型，用于研究梗阻后膀胱病理生理变化以及DI的发生机制，但建立及评估模型的一般方法操作复杂，易导致实验失败。而豚鼠被认为是目前研究BOO的最佳实验动物[1]，本实验探讨了用改进的方法建立及评估豚鼠BOO引起DI的动物模型，为进行DI的各项研究提供实验基础。

    1  材料与方法

    1.1  实验动物  雌性豚鼠50只(购自昆明医学院动物中心)，体重250-300g，用随机数字表法分为实验组(40只)和对照组(10只)。

    1.2  仪器  Dantec DUET Logic尿动力学分析仪(丹麦丹迪公司)；LION WZ50C2型微量灌注泵(浙江大学医学仪器有限公司)；密闭式静脉留置针(24GA×0.75IN，苏州碧迪医疗器械有限公司)。

    1.3  BOO模型的建立  用戊巴比妥钠(40mg/kg)腹腔注射将豚鼠麻醉后，仰卧位固定，碘伏消毒尿道口及周围。用硬膜外导管(直径1mm)经尿道插入膀胱，于尿道口与阴道口之间，横行剪开皮肤约0.5cm，以硬膜外导管为支架，小心游离尿道，游离至膀胱颈口，20丝线结扎近膀胱颈口处尿道，结扎松紧度以线结刚靠近尿道为宜，拔出导管， 可吸收线缝合皮肤。对照组只在相同部位做相同的手术操作，但不结扎尿道。平均手术时间一般约5-8min，手术出血量极少。术后每只单笼喂养，保持动物笼清洁干燥，可不给抗生素。

    1.4  尿流动力学检测  6周后取豚鼠，给予利尿剂呋噻米1mg腹腔注射。5min后乌拉坦(1g/kg)腹腔注射麻醉，仰卧固定，待耻骨上触及充盈的膀胱后，将2个儿科用密闭式静脉留置针耻骨上0.5-1.0cm处经皮穿刺入膀胱，其中一个与尿动力仪相连，另一个与微量灌注泵相连。生理盐水膀胱灌注，速度为0.25mL/min。

    1.5  观测指标  描记实验组及对照组膀胱内压力图，每只动物至少测量10个排尿周期。根据国际尿控学会(ICS)定义判断DI的标准[2]：低压充盈期，无抑制性收缩压达到三分之一排尿压时，即为DI。将实验组分为DI组和逼尿肌稳定组。膀胱排尿压力取10个排尿周期的均值，膀胱容量=(排尿量+残余尿量)，残余尿量则在最后一次排尿结束后，通过膀胱穿刺针直接测量。

    1.6  统计学处理  数据以±s表示， 采用SPSS 10.0统计分析软件，t检验。

    2  结    果

    实验组1只死亡(术后感染)，死亡率2.5%(1/40)，对照组全部存活，均无漏尿发生。分析膀胱内压力图，其中实验组14只出现DI，25只未出现，DI发生率35.9%(14/39)。对照组无DI发生。DI组膀胱最大压力和最大容量较对照组显著增加(表1)。表1  实验组与对照组膀胱测压结果比较

    3  讨    论

    BOO是临床上最常见的引起DI的原因。基于BOO与DI发生的关系，目前DI研究模型通常采用BOO法建立，建立的方法多样，其模型在出现膀胱功能改变的同时，均不同程度地产生了DI[35]。

    国外用于制作BOO模型的动物包括大鼠、豚鼠、兔、猫、狗、猪等，其中以大鼠最为常用。建立BOO动物模型的常用方法为切开下腹部，分离尿道，于膀胱颈部结扎尿道[6]。如果需要对BOO模型评估，手术同时在膀胱内留置造瘘管。此法缺点：①手术时间长，操作复杂，出血量大，对动物损伤大；②易损伤输尿管及膀胱周围血管神经丛，从而可能对观察结果产生影响；③术后局部瘢痕有可能造成膀胱变形和尿道缩窄程度的差异，不利于实验结果的标准化；④由于在梗阻后观察时间较长，不易喂养，感染率、漏尿率高，死亡率也偏高[7]。

    由于雌性豚鼠的尿道位于耻骨与阴道之间，且尿道口与阴道口间皮肤平滑，阴道前壁易于暴露，因而具备建立BOO模型的良好条件。而理论上，膀胱穿刺测压较膀胱造瘘测压及经尿道膀胱测压的结果更准确。以上两点为本技术改进的理论基础。通过技术改进的实际操作体会及实验结果分析得出，本研究模型的建立及评估方法有以下几个优点：①只需在尿道口与阴道口之间切开皮肤，分离结扎尿道，手术时间短，出血量极少，减少了创伤和局部瘢痕，对动物的生理解剖结构影响小，接近生理状态的豚鼠DI模型；②术后便于动物喂养，感染发生率极低，几乎无漏尿出现，从而保证了动物模型的成活率，DI发生率达到35.9%；③行充盈性膀胱测压时，使用经皮膀胱穿刺造瘘的方法，操作简单，对动物损伤小，避免尿外渗及感染的发生，减小了手术因素对测量结果的影响；④经皮膀胱穿刺造瘘使用双通道的方法，避免了单通道造瘘中，灌注与测压使用共同通道对测压结果的影响。具体操作过程需注意：①游离尿道时，动作要轻柔，避免损伤尿道导致尿漏；②尿道结扎时，结扎过紧有导致尿道破裂及尿路完全梗阻的危险，结扎松紧度以线结刚靠近尿道为宜。

    豚鼠目前作为研究BOO的最佳实验动物，已被越来越多的应用在尿流动力方面的研究中。本实验研究通过建立BOO模型及对模型的评估，成功获得豚鼠DI模型，说明该方法作用确切，效果明显，操作简单，可作为研究DI可靠的实验方法。

【参考文献】
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[3]Williams JH, Turner WH, Sainsbury GM, et al. Experimental model of bladder outflow tract obstruction in the guineapig [J]. Br J Urol, 1993, 71(5):543554.

[4]Kato K, Monson FC, Longhurst PA, et al. The functional effects of longterm outlet obstruction on the rabbit urinary bladder [J]. J Urol, 1990, 143(3):600606.

[5]Malmgren A, Sjogren C , Uvelius B, et al. Cystometrical evaluation of bladder instability in rats with infravesical outflow obstruction [J]. J Urol, 1987, 137(6):12911294.

[6]Matsuura S, Downie JW. Effect of anesthetics on reflex micturition in the chronic cannulaimplanted rat [J]. Neurourol Urodyn, 2000, 19(1):8799.

[7]OConnor LT Jr, Vaughan ED Jr, Felsen D. In vivo cystometric evaluation of progressive bladder outlet obstruction in rats [J]. J Urol, 1997, 158(2):631635.

作者单位：(新疆石河子大学医学院第一附属医院泌尿外科，新疆石河子 832008)