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［关键词］ 骨和骨组织;脱钙技术;超声波
骨组织必须经过脱钙才能制作切片。选择适当的脱钙液、脱钙方法以及脱钙时间与骨组织的制片质量有密切关系。我们运用超声波技术及两种传统的脱钙方法对不同的骨性组织分组进行脱钙制片，并进行比较，发现该方法在不破坏组织结构及影响染色的同时，缩短了诊断时间，保证了切片质量。现将方法介绍如下。
1 材料与方法
选取本院手术切除的骨肿瘤、病变骨及钙化组织标本45例。根据标本的不同用骨钳或骨锯将标本处理成厚度为0.5 cm的薄片。先将10 mL浓硝酸溶于90 mL蒸馏水中，配制成体积分数为0.10的硝酸溶液;再将10 mL甲醛溶液溶于体积分数为0.10的硝酸溶液中配制成甲醛-硝酸溶液。其中用硝酸溶液脱钙者10例，用甲醛-硝酸溶液脱钙者35例。标本包埋切片时发现有钙化组织者16例。试剂均为北京化工厂产品。仪器为上海震康科技公司生产的PHT 400病理样品快速超声处理仪。将标本分为3组:骨密度较高的如下颌骨、股骨、颅骨、肋骨、牙齿等为第1组;骨密度较低的如病变的松骨骨组织、碎骨组织等为第2组;钙化组织为第3组。分别置于快速超声处理仪内进行脱钙。所需时间3组分别为4～6 h、 1～ 2 h 、0.5 h。快速超声处理仪内水温度控制在37 ℃左右，脱钙时最好用广口瓶，敞开瓶口，随时观察脱钙情况，每小时换溶液1次，最终以脱钙液内无气泡产生，组织变软或用大头针轻轻刺进为宜。脱钙后的标本经流水冲洗后，再按常规石蜡制片方法处理。钙化组织的脱钙:已包埋好的组织，切片时在切片机上修出钙化组织的切面后，将切面放入脱钙液中脱钙，以大头针能轻轻刺进为宜，超声处理仪内水温度控制在25 ℃左右。
2 结果
标本用硝酸溶液经超声波技术脱钙处理后切片质量与传统方法相近，而用甲醛-硝酸溶液处理的骨组织切片效果明显优于前者，切片完整，切片厚度可达3～4 μm，染色时切片不易脱落，骨组织结构完整，细胞核染色清晰，对比鲜明。
3 讨论
骨组织、骨肿瘤及钙化组织中含有大量的钙盐，钙盐遇酸溶解后，组织变软才能制作切片。而骨是由黏多糖和一些蛋白纤维构成的骨样组织及沉积于其中的无机盐所组成，无机盐以羟基磷灰石结晶的形式存在，其中大部分是磷酸钙和 碳酸钙。脱钙是应用化学或物理的方法将骨组织成分中的钙盐与胶原纤维分离，弃去钙盐，保留完整的胶质纤维成分。无论使用哪种脱钙液都是为了清除骨组织中的钙盐［1］。传统的脱钙方法是将标本取好材后直接放入体积分数为0.10的硝酸溶液中进行脱钙［2］，时间一般为1～7 d，经脱水包埋后，切片厚度在5 μm以上，切片染色时组织易出现脱片现象。如脱钙时间掌握不好不仅损坏刀刃，还可将骨细胞学形态完全破坏，而影响诊断。采用本方法处理的骨组织切片，既能保证苏木精-伊红染色的质量，又能进行特殊染色，有利于对疾病的诊断，尤其对疑难病的诊断。10例经体积分数为0.10的硝酸处理的标本苏木精-伊红染色细胞核的着色均不好，显微镜下观察:骨组织结构尚清晰，骨基质欠平整，大部分区域折叠卷曲，骨细胞大部分被破坏，核皱缩，胞浆界限不清，染色对比度差，嗜碱性区域偏红。可能与标本未固定而直接脱钙有关。因甲醛有固定标本的作用，所以我们把甲醛和硝酸按一定比例配制，使溶液既能起到固定的作用又能达到脱钙的目的。但在常温下脱钙速度很慢，远远不能满足临床诊断的需要。而PHT 400病理样品快速超声处理仪可提供每秒160万次高速超声振荡频率，使声波场内的极性分子随着超声波周期而快速地极化运动，使生物样品的组织和细胞产生周期性的缩张运动。使甲醛-硝酸溶液迅速穿透组织，并与组织成分发生交联，从而达到既快速固定又快速脱钙的目的［3］。不但将脱钙的时间缩短到1～6 h，同时保证了骨组织及骨组织中的软组织的生物形态，染色未受到任何影响，显微镜下观察:骨组织结构完整，细胞核染色清晰，染色对比鲜明，特殊染色均能清楚地显示。在日常切片中经常出现一些钙化组织，不但损伤刀片而且组织切片破碎重，这时将修整好切面的蜡块放入体积分数为0.10的硝酸内，经超声波处理，即可避免这种情况的发生。所以我们认为，超声波标本处理仪不但可快速处理一般组织标本，还是一种较高效实用的脱钙设备，有较重要的实用价值。
［参考文献］
［1］ 胥维勇，杨群. 脱钙方法与脱钙液的选择及应用［J］.中国组织化学与细胞化学杂志，2002，11（3）:263.
［2］ 王伯 ，李玉松，黄高升，等.病理学技术［M］. 北京:人民卫生出版社， 2001:944.
［3］ 赵洁，李玉军，魏志敏，等. 超声波快速石蜡切片在病理活检中的应用［J］.中华病理学杂志，2003，32（1）:74.
（本文编辑 马伟平）
（青岛大学医学院附属医院病理科，山东 青岛 266003）