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［摘要］ 目的 了解血浆脑源性神经营养因子（BDNF）、血管内皮细胞生长因子（VEGF）在多发性骨髓瘤（MM）病人中的含量，并探讨其在MM发病中的作用。方法 用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法，测定20例正常人（正常对照组）与56例MM病人血浆BDNF、VEGF的水平，并对不同免疫亚型、不同临床分期、治疗前后检测结果进行比较。结果 治疗前MM病人血浆BDNF、VEGF水平明显高于正常对照组，差异有显著性（t=15.859、13.517,P<0.001）。治疗有效的44例MM病人血浆BDNF、VEGF水平较治疗前明显下降，差异有显著性（t=12.35、10.26，P<0.01）；治疗无效的10例MM病人治疗前后血浆BDNF、VEGF水平无明显差异（t=1.56、1.78，P>0.05）。不同临床分期MM病人之间血浆BDNF、VEGF水平比较差异有显著性（F＝4.63、4.10，P<0.05），Ⅲ期病人血浆BDNF、VEGF水平明显高于Ⅰ期病人（q=3.86～3.90,P<0.05）。但MM病人不同免疫亚型之间血浆BDNF、VEGF水平无统计学差异（F＝1.49、1.31，P>0.05）。结论 血浆BDNF、VEGF水平在MM病人呈高表达，并且与其临床分期有关，可作为MM疗效判断的一个辅助指标。
［关键词］ 多发性骨髓瘤；脑源性神经营养因子；血管内皮生长因子类
VASCULAR ENDOTHELIAL GROWTH FACTOR IN PATIENTS WITH MULTIPLE MYELOMAJIA LAN, LIU ZHUZHEN, LI GUANGLUN, et al (Department of Internal Medicine, Qingdao Osteopathic Hospital, Qingdao 266021,China)
［ABSTRACT］ObjectiveTo investigate the plasma concentrations of brainderived neurotrophic factor (BDNF) and vascular endothelial growth factor (VEGF) in patients with multiple myeloma (MM), and to explore their relationship with the pathogenesis of the disease. MethodsPlasma concentrations of BDNF and VEGF in MM patients (n=56) and controls (n=20) were evaluated by ELISA. A comparison was made in terms of different immunesubtypes, different clinical stages, BDNF and VEGF levels before and after treatment between the two groups. ResultsPlasma BDNF and VEGF in patients before treatment were markedly higher than that in the controls （t=15.859,13.517;P<0.001）. Of 44 patients who showed response to the therapy, the BDNF and VEGF declined after the treatment （t=12.35,10.26;P<0.01）. For 10 patients who did not response to the therapy, the difference of BDNF and VEGF before and after the therapy was not significant （t=1.56,1.78; P>0.05）.The differences of BDNF and VEGF in patients of different stages were significant （F＝4.63,4.10;P<0.05）.The levels of BDNF and VEGF in stageⅢ patients were higher than those of stageⅠ patients （q=3.86-3.90, P<0.05）. No significant difference in levels of BDNF and VEGF was noted among the three immunesubtypes of MM (F=1.49,1.31; P>0.05). ConclusionThe high expression of plasma BDNF and VEGF is seen in patients with multiple myeloma, and it is related with different clinical stages, which could serve as helpful indexes to evaluate the therapeutic efficacy for the disease.［KEY WORDS］multiple myeloma； brainderived neurotrophic factor； vascular endothelial growth factors
血管新生在骨髓瘤的发病中起重要作用［1］。血管内皮生长因子（VEGF）是主要的促血管新生因子，脑源性神经营养因子(BDNF)在组织中过度表达时微血管密度增加。本文对多发性骨髓瘤(MM)病人及正常人血浆BDNF、VEGF水平进行检测，以探讨其在MM发病中的意义。
1 资料和方法
1.1 对象及分组
1.1.1 MM组 56例，为2002年2月～2005年2月在我院及青岛大学医学院附属医院住院的MM病人，其中男34例，女22例；年龄34~76岁，中位年龄59岁。病程为6～36月，平均8.5月。所有病例诊断均符合文献［２］MM诊断标准。其中IgG型29例，IgA型18例，其他类型9例。按DURIESALMON分期法，Ⅰ期8例，Ⅱ期21例，Ⅲ期27例。初治病人26例，难治性病人17例，复发性病人13例。
1.1.2 对照组 20例，为健康查体者，男13例，女7例；年龄36~74岁，中位年龄62岁。均排除肿瘤、心脑血管疾病、肝肾疾病、糖尿病，均无吸烟史。
1.2 治疗方法初治病人分别采用MP（马法兰、泼尼松）、M2(马法兰、泼尼松、长春新碱、卡氮芥、环磷酰胺)、VAD（长春新碱、多柔霉素、地塞米松）等不同方案化疗。难治性及复发性病人口服沙利度胺（常州制药厂生产），起始量100～200 mg/d，根据病人耐受情况每2周增加200 mg/d直至600 mg/d，每晚顿服或分早晚给药。按此量维持治疗并同时联合上述化疗方案治疗。12周为一治疗周期。按文献［２］标准判断疗效，分为缓解、部分缓解、无效。
1.3 BDNF、VEGF测定分别于治疗前、治疗后空腹采静脉血2 mL，EDTA抗凝,4 ℃、3 000 r/min离心20 min，分离血浆于-70 ℃冻存待测。应用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法测定BDNF、VEGF含量。按试剂盒说明书操作。
1.4 统计学处理本文实验数据用±s表示，组间均数比较采用t检验和方差分析。相关性采用Pearson单因素相关分析。
2 结 果
2.1 MM病人治疗前血浆BDNF、VEGF水平治疗前MM组血浆BDNF、VEGF水平明显高于对照组，差异有显著性（t=15.859、13.517,P<0.001）；血浆BDNF、VEGF水平在初治MM病人与难治性及复发性MM病人之间比较，差异无统计学意义（F=1.59、2.43,P>0.05）。见表1。
2.2 不同免疫亚型、不同临床分期MM病人血浆BDNF、VEGF水平比较不同临床分期MM病人之间血浆BDNF、VEGF水平比较差异有显著性（F＝4.63、4.10，P<0.05），Ⅲ期病人血浆BDNF、VEGF水平明显高于Ⅰ期病人（q=3.86～3.90,P<0.05）。但MM病人不同免疫亚型之间血浆BDNF、VEGF水平皆无统计学差异（F＝1.49、1.31，P>0.05）。见表2、3。
2.3 MM治疗前后血浆BDNF、VEGF水平比较本组56例MM病人治疗后24例缓解，20例部分缓解，10例无效，2例死亡。44例获得缓解病人治疗后血浆BDNF、VEGF水平［（2.34±0.56）、（89.5±20.70）ng/L］与治疗前［(5.32±0.75）、（154.71±22.47） ng/L］相比明显下降,差异有显著性（t=12.35、10.26，P<0.01）。10例经多疗程治疗无效 (2例死亡病例除外)的病人血浆BDNF、VEGF水平治疗前后差异无显著性（t=1.56、1.78，P>0.05）。表1 治疗前MM病人血浆BDNF、VEGF检测结果
2.4 MM病人血浆BDNF、VEGF水平的相关性MM病人治疗前血浆BDNF、VEGF水平具有相关性（r=0.421,P<0.005）。
3 讨 论
恶性肿瘤特别是实体瘤伴有明显的血管增生是一个普遍的现象，血管增生程度不但与肿瘤的生长、转移有关，而且与预后密切相关。MM是一种起源于骨髓单克隆浆细胞的恶性增生性肿瘤性疾病。近年研究发现，MM的血管增生可能与碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）和VEGF及其受体的过量表达有关。另外，TNFα、TGFβ、IL1等因子也具有协同促进血管新生的作用。VEGF是其中最重要的因子之一，它可促进内皮细胞增殖、迁移、血管形成及生存［3］。RAJKUMAR等［1］对骨髓瘤细胞VEGF表达的研究证实，骨髓瘤细胞VEGF表达有双重作用，它是骨髓瘤细胞的一个自分泌因子，同时还作为一个旁分泌因子，促使内皮细胞分泌IL6，反过来IL6作为旁分泌因子作用于骨髓瘤细胞进一步增加VEGF的产生。BDNF与神经生长因子（NGF）、神经营养素３，4，5（neurotrophin3,4,5）来源于同一基因家族，在神经细胞的生长发育、损伤修复中发挥重要作用。近年来人们已认识到BDNF功能具有多样性，在许多非神经组织表达，且与多种实体肿瘤有着密切的联系，过度表达BDNF的组织微血管密度增加［4，5］。VACCA等［6］观察到MM活动期骨髓微血管密度明显高于非活动期，其VEGF、BDNF均增高，且与浆细胞标记指数相关。本文研究结果显示，无论是初治MM病人还是难治性MM病人，其外周血BDNF、VEGF含量均明显高于对照组，且初治病人与难治性及复发性病人之间血浆BDNF、VEGF水平无显著性差异；动态监测发现，治疗有效MM病人血浆BDNF、VEGF水平则明显下降，而治疗无效者血浆BDNF、VEGF水平变化不显著；提示血浆BDNF、VEGF与骨髓瘤病情变化有关。骨髓瘤细胞分泌的VEGF水平也与疾病活动程度及疾病的进展有关。本文结果显示，MM病人不同免疫亚型之间血浆BDNF、VEGF的水平无显著差异，而Ⅲ期病人的血浆BDNF、VEGF水平明显高于Ⅰ期病人，提示两因子水平与MM临床分期有关。MM病人血浆BDNF水平与VEGF水平有相关性，推测BDNF可能同VEGF一样对骨髓瘤血管新生起调控作用。沙利度胺是一种血管生成抑制剂，也是一种免疫调节剂，近年用于临床治疗MM取得较好疗效。研究发现，沙利度胺除直接抑制骨髓瘤细胞的生长和生存外，还可逆转耐药及降低VEGF、肿瘤坏死因子水平，从而抑制肿瘤新生血管生成［7］。本文联合应用沙利度胺治疗后，获得缓解病人血浆BDNF、VEGF水平明显下降，提示化疗与沙利度胺的联合应用可能对MM病人血浆BDNF、VEGF的形成有一定的抑制作用。综上所述，血浆BDNF、VEGF水平与MM发病机制有一定关系，血浆BDNF、VEGF水平测定可作为观察MM病情变化及疗效的一项辅助指标。同时为抗血管新生剂应用于MM治疗提供了理论依据。
［参考文献］
［1］RAJKUMAR S V, LEONG T, ROCHE P C, et al. Prognostic value of bone marrow angiogenesis in multiple myeloma［J］. Clin Cancer Res, 2000,6:3111.
［2］张之南，沈悌. 血液病诊断及疗效标准［M］. 第2版. 北京：科学技术出版社， 1998:168194.
［3］SEZER O, NIEMOLLER K, EUCKER J, et al. Bone marrow microvessel density is a prognostic factor for survival in patients with multiple myeloma［J］. Ann Hematol, 2000,79:574.
［4］MIKNYOCZKI S J, WAN W H, CHANG H, et al. The neurotrophinTrk receptor axes are critical for the growth and progression of human prostatic carcinoma and pancreatic ductal adenocarcinoma xenografts in nude mice ［J］. Clin Cancer Res, 2002,(6)8:1924.
［5］LABOUYRIE E, DUBUS P, GROPPI A, et al. Expression of neurotrophins and their receptors in human bone marrow［J］. Am J Pathol, 1999,154(2):405.
［6］VACCA A, RIBATTI D, RONCALI L, et al. Bone marrow angiogenesis and progression in multiple myeloma［J］. Br J Haematol,1994,87(3):503.
［7］徐泽锋，肖志坚，郝玉书． 反应停治疗多发性骨髓瘤的现状与展望［J］. 国外医学：输血及血液学分册， 2003,26(1):5.
（1 青岛市骨伤医院内科，山东 青岛 266021； 2 青岛大学医学院附属医院血液内科） （本文编辑 黄建乡）