点击显示 收起
【摘要】 目的 探讨子宫内膜腺癌组织中转移抑制基因1（KAI1）蛋白的表达及其意义。方法 应用免疫组织化学EnviSion 法检测20例正常子宫内膜和70例子宫内膜腺癌组织中KAI1蛋白的表达水平。结果 子宫内膜腺癌组织中KAI1蛋白阳性表达率明显低于正常子宫内膜组织（χ2=12.22，P<0.01）；子宫内膜腺癌组织中KAI1蛋白的表达与病理分级、手术临床分期、肌层浸润深度及淋巴结转移有关（χ2=10.80～14.91，P<0.01）。结论 KAI1蛋白表达下调可能是子宫内膜腺癌发生发展及浸润和转移的重要原因之一。
【关键词】 蛋白质KAI1；子宫内膜肿瘤；免疫组织化学
EXPRESSION OF KAI1 IN HUMAN ENDOMETRIAL ADENOCARCINOMA AND ITS CLINICAL SIGNIFICANCEZHAO WENKE, NIU ZHAOSHAN（Department of Postgraduate, Qingdao University Medical College, Qingdao 266021, China） ［ABSTRACT］Objective To investigate the expression of KAI1 protein in human endometrial adenocarcinoma and its clinical significance. MethodsExpression of KAI1 protein was measured by immunohistochemical EnviSion method in the normal endometrium (n=20) and the endometrial adenocarcinoma (n=70). ResultsThe positive rate of KAI1 protein in the endometrial adenocarcinoma was significantly lower than that in the normal endometrium （χ2=12.22，P<0.01）. KAI1 protein expression in the endometrial adenocarcinoma closely correlated with pathological grade， clinical stage， myometrial invasion and lymph node metastasis （χ2=10.80－14.91，P<0.01）.ConclusionDownregulation in the expression of KAI1 may play an important role in the progression and lymph node metastasis of endometrial adenocarcinoma.
［KEY WORDS］protein KAI1; endometrial neoplasms; immunohistochemistry
浸润和转移是恶性肿瘤的重要特征，也是恶性肿瘤治疗失败和病人死亡的主要原因[1～3]。肿瘤转移是一系列有序事件的复杂、动态、连续的过程，整个过程受多种肿瘤转移基因和肿瘤转移抑制基因的调控。转移抑制基因1（KAI1）是一种新的肿瘤转移抑制基因, 属四跨膜超家族(TM4SF)的成员, KAI1/CD82对多种肿瘤的转移具有抑制作用[4],目前该基因已成为细胞生物学和肿瘤研究的热点之一。本研究旨在通过免疫组化方法检测KAI1蛋白在子宫内膜腺癌组织中的表达情况，探讨KAI1蛋白在子宫内膜腺癌发生、发展中的作用，为临床诊断、治疗该病提供理论依据。
1 材料和方法
1.1 材料
收集青岛大学医学院附属医院病理科1996年5月～2001年12月的子宫内膜癌手术标本70例，均为子宫内膜腺癌，按WHO标准进行子宫内膜腺癌病理组织学分级，G1级23例，G2级32例，G3级15例；按FIGO手术临床分期，Ⅰ期38例，Ⅱ期17例，Ⅲ期15例；≤1/2肌层浸润者30例，＞1/2肌层浸润者40例；无淋巴结转移者42例，有淋巴结转移者28例。70例病人中，年龄35～71岁，平均年龄55.8岁。另选择正常子宫内膜20例（其中分泌期组10例，月经期组10例）作为对照。所有标本均经40 g/L甲醛溶液固定，石蜡包埋。病人手术前均未接受化学药物、放射及性激素治疗。所有内膜组织均经病理学检查证实。
1.2 检测方法
免疫组化染色采用PV9000免疫组化二步法，KAI1兔抗人多克隆抗体及PV9000免疫组化试剂盒均购自北京中山生物试剂有限公司。阳性对照用已知阳性片；阴性对照省略一抗，以PBS代替。
1.3 免疫组化染色结果判断
KAI1蛋白免疫染色阳性信号定位于细胞膜上, 呈棕黄色颗粒。 参照文献[5、6]对结果进行判断。每个标本随机观察5个高倍视野, 每个视野计数200个肿瘤细胞, 取平均值。阳性细胞数<5%为阴性(-), 5%～25%为弱阳性(+), 26%～50%为中度阳性(), >50%为强阳性()。为便于结果分析处理, 将(+)～()列为阳性组。
2 结 果
2.1 KAI1蛋白在正常子宫内膜及子宫内膜腺癌组织中的表达
KAI1蛋白阳性多位于细胞膜上，少数伴细胞浆着色。本组病例中正常子宫内膜组织KAI1蛋白阳性表达率为100.0%（20/20），子宫内膜癌组织中KAI1蛋白阳性表达率为58.6%（41/70），两者比较差异有显著性（χ2=12.22，P<0.01）。
2.2 KAI1蛋白表达与子宫内膜腺癌临床病理特征的关系
不同年龄病人子宫内膜癌组织KAI1蛋白阳性表达率无显著性差异（χ2=0.02，P>0.05）。KAI1蛋白阳性表达率在病理分级之间差异有极显著性（χ2=10.80，P<0.01）；其中G1级与G2级、G3级相比，差异均有显著性（q=3.85、4.30，P<0.01）；G2级与G3级相比，差异无显著性（q=1.18，P>0.05）。KAI1蛋白阳性表达率在手术临床分期之间差异有显著性（χ2=14.91，P<0.01）；其中G1期与G2期、G3期相比，差异有显著性（q=3.76，4.95，P<0.01）；Ⅱ期与Ⅲ期相比，差异无显著性（q=1.16，P>0.05）。子宫内膜腺癌肌层浸润>1/2者其KAI1蛋白阳性表达率明显低于浸润≤1/2者（χ2=11.94，P<0.01）。有淋巴结转移者其KAI1蛋白阳性表达率明显低于无淋巴结转移者（χ2=14.25，P<0.01）。见表1。表1 KAI1蛋白与子宫内膜腺癌临床病理特征的关系临床病理特征
3 讨 论
KAI1是前列腺癌的转移抑制基因，该基因定位于人类染色体11p11.2，全长约80 kb，编码产物为含267个氨基酸的细胞膜糖蛋白，其分子结构中含有4个跨膜功能区和一个大的胞外糖基化功能区，因而结构上属 TM4SF 成员。KAI1蛋白作为TM4SF成员之一，虽然其抑制肿瘤转移的作用已被人们所接受，但其作用机制至今尚无明确的解释。目前的研究认为，这可能与其在细胞膜上的定位和广泛的糖基化，以及在细胞与细胞及细胞与细胞外基质的相互作用有关，故推测该蛋白可能介导细胞间及细胞与间质之间的黏附。KAI1的异常表达使KAI1蛋白正常功能减弱或丧失，导致癌细胞黏附力减弱、移动性增强、细胞分化降低，从而侵袭性加强，因而其表达的下调可能参与肿瘤细胞的转移。
KAI1在恶性肿瘤组织中表达下调的机制尚不清楚。有研究表明，KAI1低表达同基因杂合性缺失和复制错误无关[7]，基因突变在此过程中的作用未有定论。 MASHIMO 等[8]的研究显示，抑癌基因p53可以通过与KAI1的5′端上游区作用而直接激活KAI1,其与p53结合区定位于转录起始位点上游约860碱基处，并包含有典型的p53结合重复序列CAAG。该研究认为p53功能的丧失导致KAI1基因的下调，进而导致转移的发生。此外，由于KAI1基因5′区富含G+C，并有高密度的CpG双核酸，所以甲基化也可能是KAI1基因在人类肿瘤中下调的一种机制，这方面仍需进一步的深入研究。
KAI1蛋白与子宫内膜癌的关系目前报道较少。WHITE等[9]用Western blot方法检测了8种子宫内膜癌细胞株中KAI1蛋白的表达情况，并与正常子宫内膜细胞株比较显示，KAI1蛋白在其中7种癌细胞株中表达下调，提示KAI1可能在子宫内膜癌发展中发挥作用。LIU等[4]研究显示，KAI1蛋白在子宫内膜增生组织中高表达（17/18），但从早期原发内膜癌到发生转移癌KAI1蛋白表达明显下降，提示KAI1蛋白表达下调在内膜癌进展中是一个晚期事件。本研究结果显示，子宫内膜腺癌组织中存在KAI1蛋白表达下降的现象，KAI1蛋白作为参与细胞间黏附作用的重要黏附分子，其表达下降与子宫内膜腺癌细胞间的黏附力下降密切相关，导致子宫内膜腺癌细胞易于脱落，从而使子宫内膜腺癌细胞具有向肌层浸润性生长的条件。而本研究还显示，子宫内膜腺癌组织中KAI1蛋白表达下调与肿瘤分化有关，分化越差，KAI1蛋白表达越低，最终失去了其作为肿瘤转移抑制基因的作用，导致癌细胞的浸润转移。
本研究结果表明，KAI1蛋白在浸润深、有淋巴结转移的子宫内膜腺癌组织中低表达，说明KAI1蛋白的表达与肿瘤的浸润和转移有关。KAI1蛋白表达下调或缺失与多种肿瘤的转移有关，BOURAS等[10]通过对前列腺癌研究显示，KAI1蛋白表达下调可促使肿瘤进入发展期，进而发生转移。陈克林等[11]研究显示，KAI1基因表达降低可能是原发性肝细胞癌易发生早期转移的潜在因素之一，即由于这一基因作用下降，肝癌细胞易发生侵袭转移。李珊珊等[12]研究表明，KAI1基因的低表达或不表达可能是某些高转移潜能乳癌的特征。
总之，本研究结果提示，KAI1蛋白的低表达可能提高了子宫内膜腺癌的转移潜能，KAI1蛋白可作为检测子宫内膜腺癌转移潜能的一个指标。
【参考文献】
[1]戴淑真,郭慧方,王言奎,等. 子宫内膜癌组织中P16 mRNA及P16蛋白的表达[J]. 青岛大学医学院学报, 2003,39（4）:407409.
[2]马爱荣,崔竹梅,戴淑真,等. S100在子宫内膜癌中的表达及其意义[J]. 齐鲁医学杂志, 2004,19（6）:477480.
[3]葛伟平,齐卫红,兰晓明. Rb和rasP21蛋白在子宫内膜癌组织中的表达[J]. 齐鲁医学杂志, 2005,20（2）:139141.
[4]LIU F S, DONG J T, CHEN J T, et al. KAI1 metastasis suppressor protein is downregulated during the progression of human endometrial cancer[J]. Clin Cancer Res, 2003,9（4）:13931398.
[5]LEE H S, LEE H K, KIM H S, et al. Tumor suppressor gene expression correlates with gastric cancer prognosis[J]. J Pathol, 2003,200(1):39～46.
[6]牛兆山,张昭成,邹伟. 增生结节、肝硬化及肝癌组织中原癌基因CerbB2蛋白产物的表达[J]. 青岛医学院学报, 1997,33（1）:3032.
[7]DONG J T, SUZUKI H, PIN S S, et al. Downregulation of the KAI1 metastasis suppressor gene during the progress ion of human prostate cancer infrequently involves gene mutation or allelic loss[J]. Cancer Res, 1996,56（19）:43874390.
[8]MASHIMO T, WATABE M, HIROTA S, et al. The expression of the KAI1 gene, a tumor metastasis suppressor, is directly activated by p53[J]. Proc Natl Acad Sci USA, 1998,95（19）:1130711311.
[9]WHITE A, LAMB P W, BARRETT J C, et al. Frequent down regulation of the KAI1（CD82）,metastasis suppressor protein in human cancer cell lines[J]. Oncogene, 1998,16（24）:31433149.
[10]BOURAS T, FRAUMAN A G. Expression of the prostate cancer metastasis suppressor gene KAI1 in primary prostate cancers: a biphasic relationship with tumor grade[J]. J Pathol, 1999,188(4):382388.
[11]陈克林,李海华,李玉梅,等. KAI1基因在肝癌组织中表达的研究[J]. 世界华人消化杂志, 1998,6（12）:11021103.
[12]李珊珊,任秀花,闫爱华,等. 转移性和非转移性乳腺癌组织中KAI1基因的表达[J]. 河南医科大学学报, 2000,35（2）:101102.
作者单位：（青岛大学医学院，山东 青岛 266021; 1 研究生办公室； 2 人体显微结构学实验室）