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【关键词】 红细胞计数；干粉染色法；诊断
网织红细胞（Ret）计数多采用煌焦油蓝活体染色后显微镜检查法［1］，在实际操作中检测结果往往误差较大。用仪器法检测网织红细胞结果较准确，但价格昂贵。我们对煌焦油蓝法进行改良，提高染色质量，制作薄血涂片，提高了计数的准确性。现报告如下。
1 材料与方法
1.1 材料
标本：20例正常人血液标本，男12例，女8例；年龄13～65岁。50例各种贫血病人血液标本，男21例，女29例；年龄2～74岁。仪器与试剂：10 g/L煌焦油蓝EDTA盐溶液（1 ｇ煌焦油蓝，2 ｇ EDTANa2·2 H2O，配成100 mL水溶液），10 ｇ/L煌焦油蓝生理盐水溶液，一次性带盖塑料离心管，双目显微镜（奥林帕斯），XE2100全自动血细胞分析仪及配套网织红试剂与质控物。
1.2 方法
干粉管的制备：取10 ｇ/L煌焦油蓝溶液约0.1 mL加入一次性带盖塑料离心管中，置37 ℃温箱烘干后将盖盖紧作为工作管备用。网织红细胞计数：采集静脉血0.1 mL加入干粉离心管内，用微量吸管轻轻吹匀，将盖盖紧置37 ℃温箱15～20 min，取出后加入1滴生理盐水稀释，轻轻混匀，推制成薄片，用米勒窥盘在油镜下计数1 000个红细胞，计算网织红细胞百分比。上述操作的同时，用同份静脉血分别用煌焦油蓝生理盐水计数网织红细胞（与干粉法条件相同）和XE2100血液分析仪检测网织红细胞。结果以x-±s表示，组间比较采用F检验。
2 结 果
干粉法染色，网织红细胞的蓝绿色网状结构着色较深，染色效果好。制作的血涂片薄，细胞平铺排列均匀，无重叠现象，红细胞排列疏松，便于对红细胞精确计数。血液无凝集现象，红细胞排列均匀，易于观察。三种方法检测网织红细胞结果，差异无显著性（P>0.05）。见表1。取Ret高值标本1份，多名工作人员用三种方法检测20次，结果显示，干粉法计数为0.115±0.008，CV值为6.96%；仪器法计数为0.118±0.005，CV值为4.08%；煌焦油蓝盐水法计数为0.112±0.012，CV值为10.70%。仪器法、干粉法重复性比煌焦油蓝盐水法好。
3 讨 论
煌焦油蓝生理盐水计数网织红细胞，对于严重贫血病表1 三种方法计数Ret结果比较人，由于稀释效应，计数误差较大，且试剂保质期短，用干粉法可以克服这一缺点。本方法的工作管在室温干燥环境中可以保存1年，染色效果清晰，抗凝效果好。由于EDTANa2的抗凝作用，工作管内血液不会产生纤维蛋白，对结果不会有影响。工作中我们往往在采血的同时对网织红细胞进行染色，在血常规检测完毕后可以根据血细胞比容大小在染色完毕的工作管中加入适量的生理盐水进行稀释，然后制成薄片，使红细胞在100或200个左右，便于计数，减少计数误差，提高计数的准确度。有报道EDTA盐对网织红细胞计数有一定影响，在37 ℃条件下，其误差无统计学意义［2］，我们采取37 ℃染色15 min，使干粉法染色充分。在干粉染色完毕后，加入1滴生理盐水稀释（重度贫血病人可不稀释），制成薄片进行镜检。由于生理盐水的加入，洗涤了附着于红细胞膜的染料颗粒，使红细胞膜更加透明，网织红细胞的结构更加清晰，易于辨认［3］。干粉法由于用的是带盖塑料离心管，水分不易挥发，虽然血液量少也不会造成凝固［4］。煌焦油蓝生理盐水长时间放置后会浓缩变质，渗透压增加，造成红细胞变形而影响网织红细胞计数，有时会引起血液凝集，造成红细胞排列不均匀或有纤维蛋白生成而导致染料渣增多，背景不清晰而影响计数，而干粉法则无此影响。大型医院对于网织红细胞计数多采用先进的流式细胞仪，或有网织红细胞检测功能的血液分析仪及设备，但网织红试剂价格贵，而且多依赖进口。大多数医院仍然应用煌焦油蓝生理盐水法，甚至有的医院仍然应用玻片法计数网织红细胞。干粉法计数网织红细胞，操作简单，染色效果清晰细致，结果准确，价格低廉，适用于基层医院。
【参考文献】
［1］叶应妩，王毓三. 全国临床检验操作规程［M］. 第2版. 南京：东南大学出版社， 1997：1415.
［2］王琳，滕佩红. EDTAK2抗凝血对网织红细胞染色的影响［J］. 临床军医杂志, 2003，31（2）：119120.
［3］毕永春，王图年. 煌焦油蓝改良法计数网织红细胞［J］. 临床检验杂志, 2004，22（2）：159.
［4］李红军，袁运菊. 干粉染色法计数网织红细胞的研究［J］. 现代检验医学杂志, 2004，19（1）：35.
作者单位：（临沂市人民医院综合检验科，山东 临沂 276003）