健胃消炎颗粒有效成分含量测定方法的建立

【摘要】  目的 建立健胃消炎颗粒有效成分含量测定方法，控制健胃消炎颗粒的产品质量，确保其临床疗效。方法 采用高效液相色谱法对健胃消炎颗粒中白芍、赤芍的有效成分芍药苷含量进行了测定，并进行了方法学研究；同时应用薄层色谱法对其君药党参进行定性鉴别。结果 芍药苷进样量在0.108 6～0.543 0 μg之间有良好线性，回收率理想。结论 薄层色谱法对样品分离效果好。

【关键词】  健胃消炎颗粒 薄层鉴别 高效液相色谱 芍药苷

    THE METHOD OF ASSAYING ACTIVE COMPONENT OF JIANWEI XIAOYAN KELIZHUANG MINGRUI, XU LIHUA(Shandong Provincial Institute for Drug Control, Ji′nan  250012, China) ［ABSTRACT］ObjectiveTo control the quality of Jianwei Xiaoyan Keli and ensure its effect in clinical application.MethodsUsing phase liquid chromatography, the active component of paeoniflorin in radix paeoniae alba and radix paeoniae rubra of this medicine was determined,  and radix codonopsis used as primary constituent of Jianwei Xiaoyan Keli was detected using TLC scanning method.ResultsThe sample size of paeoniflorin at  0.108 6～0.543 0 μg showed good linearity with ideal recovery rate. ConclusionThinlayer chromatography is good for sample separation.

    ［KEY WORDS］Jianwei Xiaoyan Keli; thinlayer chromatography; phase liquid chromatography; paeoniflorin

    健胃消炎颗粒主要由党参、白芍、赤芍、茯苓、白术（麸炒）、丹参等中药组成，具有健脾和胃、理气活血等功效，用于脾胃不和所致的上腹疼痛、痞满纳差以及慢性胃炎等症的治疗。由于该药成分较多，且彼此之间相互影响，为了控制产品质量，确保临床疗效，本文采用高效液相色谱法对该药中白芍、赤芍的有效成分芍药苷含量进行了测定，并对君药党参进行了薄层色谱鉴别，现将结果报告如下。

    1  材料与方法

    1.1  材料

    硅胶G，青岛海洋化工有限公司生产；健胃消炎颗粒，山东步长制药有限公司提供；TSP P4000UV1000AS3000高效液相色谱仪，色谱柱为Inertsil ODS3,C18(5 μL，250 mm×4.6 mm）；乙醇、磷酸为分析纯，乙腈为色谱纯（美国进口TEDIA）。芍药苷对照品购自中国药品生物制品检定所，编号为110736200321。

    1.2  党参的定性鉴别

    取供试品5 g，研细，加甲醇50 mL，加热回流1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加丙酮2 mL，超声溶解，取上清液作为供试品溶液。另取党参对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。取阴性样品（按处方量，取除党参之外其他药材同工艺方法制备阴性样品）同供试品制备方法制成阴性对照溶液。按照薄层色谱法[1]，吸取上述3种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿甲醇冰醋酸水（30∶20∶2∶1）为展开剂展开，取出，晾干，喷以体积分数0.10磷钼酸乙醇溶液，105 ℃加热至斑点显色清晰。

    1.3  芍药苷测定方法的建立

    1.3.1  色谱条件及系统适应性[1]  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈体积分数0.001磷酸溶液（15∶85）为流动相，检测波长为230 nm，柱温40 ℃；进样量10 μL（定量环进样）；流量1 mL/min；理论板数按芍药苷峰计算应不低于3 000。

    1.3.2  样品溶液制备  对照品溶液的制备：精密称取经S2O5减压干燥器中干燥36 h的芍药苷对照品适量，加甲醇制成20 mg/L浓度的溶液，摇匀，即得。供试品溶液的制备： 取装量差异项下的本品，研细，取约1 g,精密称量，精密加体积分数0.50乙醇50 mL，称质量，超声处理（300 W，50 kHz）30 min，放冷，再称质量，用体积分数 0.50 乙醇补足质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定。

    1.3.3  线性关系的考察[2]  精密称取经S2O5减压干燥36 h的芍药苷对照品5.43 mg，置25 mL量瓶中，加体积分数0.50乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，再取上述溶液5 mL，置50 mL量瓶中，加体积分数0.50乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取5、10、15、20、25 μL，分别注入高效液相色谱仪，测定其峰面积的积分值，计算回归方程。峰面积分别为：115 527、240 004、369 486、500 683、632 882。回归方程：y=1 192 807.55x-16 900.30，r=0.999 98。进样量在0.108 6～0.543 0 μg之间，进样量与峰面积积分值呈良好的线性关系。

    1.3.4  精密度试验  取浓度为0.217 2 g/L的对照品溶液10 μL，连续进样5次，峰面积积分值分别为：241 552、240 052、241 526、241 000、240 470，平均240 920，RSD=0.27%。提示仪器精密度良好。

    1.3.5  稳定性试验  取供试品溶液10 μL，在12 h内分别进样5次（0、2、4、8、12 h）试验，测定峰面积积分值分别为：296 344、296 639、295 319、296 189、296 932，平均296 284.6，RSD=0.206%，供试品溶液在12 h内稳定性良好。

    1.3.6  重复性试验  按样品测定方法对批号为040301的样品进行测定，进样10 μL，共测5份，结果见表1。芍药苷平均含量为1.521 mg/g，RSD=2.03%，表明该方法重现性良好。表1  重现性试验结果样品称样量（m/g）峰面积含量

    1.3.7  回收率试验  取批号为040301的样品（含量为1.521 mg/g）约0.5 g，共5份，精密称定后，精密加入对照品溶液a或b（a：精密称取对照品6.89 mg置250 mL量瓶中，加体积分数0.50乙醇至刻度；b：精密称取对照品7.27 mg置250 mL量瓶中，加体积分数0.50 乙醇至刻度）25 mL，按1.3.1方法测定，计算回收率。回收率=（测得量-样品中含量）/加入对照品的量×100%。结果见表2。该方法回收率良好。表2  回收率试验结果样品称样量

　　1.3.8  空白试验  取不含赤芍和白芍的空白样品，按1.3.1方法进行试验，结果空白样品在与芍药苷峰相同的位置无干扰峰出现（图1）。

    2  结    果

    对照品溶液、 供试品溶液高效液相色谱图见图2，本文3批样品测定结果见表3。根据3批样品测定结果，规定本品每10 g含赤芍和白芍（以芍药苷C23H28O11计），不得少于11.0 mg。

    3  讨    论

    文献[1]中仅确定了大黄、靛玉红等的定性鉴别方法，而未制定药物有效成分 表3  3批样品测定结果（mg/10 g）批号含量1含量2平均含量04030115.3615.2015.304030213.5413.4513.504030312.3812.5712.5

    含量分析方法。本文建立了健胃消炎颗粒方中白芍与赤芍的有效成分芍药苷的含量测定方法，实验结果表明，芍药苷进样量在0.108 6～0.543 0 μg之间有良好线性，精密度试验测得RSD为0.27%，显示仪器精密度良好；稳定性试验结果显示，供试品溶液在12 h内稳定性良好；回收率试验结果显示，该方法回收率为97.9％，RSD为1.38%，表明该方法回收良好。本法精密度高，稳定性和重现性好，同时样品分离效果好，空白样品无干扰，简便易行。

    文献[4，5]曾对芍药苷的提取方法、提取溶媒、提取时间等做了对比研究，其结果显示， 体积分数0.50 乙醇及体积分数0.50甲醇提取效率最高，考虑到甲醇比乙醇的毒性大，故采用体积分数0.50乙醇作为提取溶媒较理想；超声处理1 h和加热回流1 h相比，色谱分离效果相差不大，故选择操作简单的超声处理方法作为提取方法；以体积分数0.50乙醇为提取溶媒[5]，分别超声提取10、15、20、30、40、60 min，本文结果显示，10、15、20 min含量偏低，但与30、40、60 min相比，含量无显著差异，故采用超声处理30 min。

【参考文献】
  [1]国家药典委员会. 中国药典2005年版一部[M]. 北京：化学工业出版社, 2002：6869.

[2]谢秀琼. 中药新制剂开发与应用[M]. 第2版.北京：人民卫生出版社, 2002：273274.

[3]毋福海，易军，宋粉云，等. 四物片中芍药苷的HPLC测定[J]. 中国医药工业杂志, 2004，35（4）：236237.

[4]林生文，李玮玲，朱炳辉. 仲景胃灵片中芍药苷的含量测定[J]. 分析测试学报, 2004，23（1）：114116.

[5]朱新科，张启明，宋丽丽，等. 妇科养荣丸中芍药苷的HPLC测定[J]. 中国医药工业杂志, 2005，36（4）：232233.

作者单位：山东省药品检验所,山东 济南 250012