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首页医源资料库在线期刊齐鲁医学杂志2007年第22卷第6期

经皮穿刺附睾取精行ICSI治疗梗阻性无精子症的效果

来源:《齐鲁医学杂志》
摘要:【摘要】目的探讨经皮穿刺附睾取精(PESA)结合卵细胞浆内单精子注射(ICSI)治疗梗阻性无精子症的有效性和安全性。方法对48例梗阻性无精子症病人进行PESA。女方常规超促排卵治疗以获取卵子,选择成熟的卵母细胞行ICSI。结果48例病人共接受60个周期的治疗,除1例病人第3个周期行附睾切开取精外,其余均行PESA取......

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【摘要】  目的 探讨经皮穿刺附睾取精(PESA)结合卵细胞浆内单精子注射(ICSI)治疗梗阻性无精子症的有效性和安全性。方法 对48例梗阻性无精子症病人进行PESA。女方常规超促排卵治疗以获取卵子,选择成熟的卵母细胞行ICSI。结果 48例病人共接受60个周期的治疗,除1例病人第3个周期行附睾切开取精外,其余均行PESA取精成功。共取卵636个,553个成熟卵子行ICSI,426个卵子正常受精,正常受精率77.0%;获得412个胚胎,卵裂率96.7%;优质胚胎265个,优质胚胎率64.3%。每个治疗周期移植胚胎2~3个,21例获得临床妊娠,周期临床妊娠率为35.0%。结论 PESA结合ICSI能有效地治疗梗阻性无精子症引起的男性不育症。

【关键词】  少精子症 卵细胞浆内单精子注射 经皮穿刺附睾取精

    PERCUTANEOUS EPIDIDYMAL SPERM ASPIRATION AND INTRACYTOPLASMIC SPERM INJECTION IN THE TREATMENT OF MALE INFERTILITY CAUSED BY OBSTRUCTIVE AZOOSPERMIAZHANG XIAOYU, WANG KUIJUN, CHU JIANFENG(Department of Reproduction, Yantaishan Hospital, Yantai 264001, China) [ABSTRACT]ObjectiveTo evaluate the efficacy of intracytoplasmic sperm injection (ICSI) with sperm obtained from percutaneous epididymal sperm aspiration (PESA) for male infertility caused by obstructive azoospermia (OA).MethodsPESA was performed in 48 patients with OA to obtain sperm. Matured Oocytes retrieval under transvaginal ultrasound were selected for ICSI.ResultsAll the couples received 60 cycles of ICSI. PESA was performed successfully in 59 cycles of 48 male patients except one receiving epididymotomy at the third cycle.  Of the female, 636 oocytes were retrieved in all cycles, 553 MⅡ oocytes were microinjected; 426 oocytes were normally fertilized and the fertilization rate was 77.0%; 412 fertilized oocytes cleaved to embryos and the cleavage rate was 96.7%. 2-3 embryos were replaced into uterus for each transfer cycle. Clinical pregnancy was 21,  the percycle pregnancy rate was 35.0%.ConclusionPESA combined with ICSI is an effective method to treat male infertility with obstructive azoospermia.

    [KEY WORDS]oligospermia; intracytoplasmic sperm injection; percutaneous epididymal sperm aspiration

    无精子症是引起男性不育症的一种较常见的原因,约占不育症的6.36%。它可分为睾丸生精功能障碍所致的非梗阻性无精子症(NOA)和各级输精管道阻塞所致的梗阻性无精子症(OA)两类。2002年2月~2006年2月,我们采用经皮附睾穿刺取精(PESA)结合卵细胞浆内单精子注射(ICSI)治疗梗阻性无精子症48例,取得了较好的临床效果,现将结果报告如下。

    1  对象与方法

    1.1  对象

    本组病人48例,平均年龄34.2岁(28~36岁),不育时间平均6.2年(3~10年),性生活正常,多次精液常规检查及精液离心沉渣检查均未见精子。体格检查第二性征发育良好,睾丸体积正常,附睾饱满。性激素测定值在正常范围,诊断性附睾穿刺液镜检可见到活动精子。配偶妇科检查未发现生殖系统异常。

    1.2  方法

    1.2.1  卵子的获取及处理  女方使用促性腺激素释放激素激动剂(达必佳)、卵泡刺激素(果纳芬)和人绒毛膜促性腺激素行常规超促排卵,阴道B超下行卵泡抽吸术获卵。卵丘复合物置于含体积分数0.10灭活人血清的人卵泡培养液(HTF)中,在37 ℃、体积分数0.05 CO2培养箱中培养4~6 h后,转移到含有透明质酸酶的HEPES缓冲的HTF培养液(MHTF)中剥离颗粒细胞,裸卵再放回HTF培养液中备用。

    1.2.2  精子的获取及处理  取卵后3~4 h男方行PESA。病人取平卧位,碘附消毒外阴部,局部麻醉后,5 mL注射器抽吸1 mL含有2 kU/L肝素的HTF液,注射器针头刺入附睾头部,抽吸获取附睾液。抽吸时应尽量避免血液污染,以免影响精子的观察和分离。如果镜检无精子,可重复穿刺或行对侧附睾穿刺。附睾液离心洗涤,去除杂质,优选形态正常、活动力良好的精子备用。

    1.2.3  卵细胞浆内单精子注射  应用英国RI公司生产的显微操纵仪,美国CooK公司生产的显微固定针和注射针。取一Petri皿,在其中央制作9个平行排列的体积分数0.10灭活人血清的MHTF微滴,石蜡油覆盖。处理好的附睾精子放入中间的微滴内,成熟的卵子放入精子周围的8个微滴内。用显微注射针制动形态正常的活动精子,先尾后头吸入精子,然后将其注入被显微固定针吸引固定的卵子胞浆内。固定卵子时应使第一极体位于11点钟或7点钟处,注射精子时应回抽胞浆以确保精子注入卵胞膜内并激活卵子。

    1.2.4  受精卵的培养  注射术后,将卵子置于体积分数为0.10灭活人血清的胚胎生长液(P1)中,在37 ℃、体积分数0.05 CO2培养箱中培养,16~18 h后观察卵子的存活及受精情况,40~48 h后观察卵裂情况。

    1.2.5  胚胎移植  选择质量优良的胚胎经阴道宫腔内移植。移植后2周检测尿人绒毛膜促性腺激素,阳性表示生化妊娠。移植后7周B超检查妊娠囊数目及胎心搏动情况,判断是否为临床妊娠。

    2  结    果

    2.1  穿刺取精情况

    48例梗阻性无精子症病人共接受ICSI术60周期,其中有2例病人分别接受了3个周期,8例病人分别接受了2个周期,38例病人分别接受了1个周期。除1例病人在第3周期穿刺取精失败而行附睾切开取精外,59个治疗周期均能通过PESA获取足够数量的活动精子,成功率为98.3%。所有病人均未出现血肿、感染或其他严重的并发症。

    2.2  卵子受精情况

    在60个治疗周期中,经超促排卵后共获卵子636枚,其中MⅡ的成熟卵子553枚。ICSI术后,共得到了双原核受精卵426枚,正常受精率为77.0%(426/553)。

    2.3  胚胎发育情况

    共有412枚受精卵发生分裂,卵裂率为96.7%(412/426)。共获得优质胚胎265枚,优质胚胎率为64.3%(265/412),其中17例病人剩余109个优质胚胎已冷冻保存。共移植胚胎156枚,平均移植胚胎数为每周期2.6枚。

    2.4  胚胎种植情况

    本组48例病人的60个治疗周期中,4例生化妊娠,21例临床妊娠,其中1例输卵管内异位妊娠,1例单胎孕3.5月时流产,1例双胎孕4月时流产,14例单胎及4例双胎妊娠者均娩出正常婴儿。胚胎种植率为16.7%(26/156),周期临床妊娠率为35.0%(21/60)。

    3  讨    论

    无精子症是一种难治的男性不育症,目前仍缺乏有效的治疗方法。梗阻性无精子症病人,虽然精液中不能找到精子,但睾丸具有一定的生精功能,仅仅是因为输精管道先天缺如或后天的外伤、手术、炎症梗阻等原因造成精子不能排出体外。有人尝试抽取附睾精子做体外受精胚胎移植(IVFET),然而附睾精子尚未发育成熟,自然受精能力不全,因此治疗效果并不满意[1]。卵细胞浆内单精子注射是辅助生育技术上的里程碑[2]。它不受精子的密度、活力和来源限制,只要有一条活精子就有可能实现生育的愿望。本文资料显示,在卵子受精率、卵裂率、优质胚胎率和临床妊娠率等方面,附睾来源的精子与同期开展的精液来源精子的ICSI相比,结果基本相似,与国内外的研究结果相近[3]。

    PESA具有快速、简便、易操作、痛苦小等优点。梗阻性无精子症病人的附睾饱满,更易获取较多的活动精子。PESA失败后可以行附睾切开取精,本研究中有1例病人在第3个周期中因PESA失败而行附睾切开取精。对于附睾取精失败的病人,也可以穿刺睾丸精子行ICSI,虽然有成功的报道,但受精率和临床妊娠率明显低于附睾精子,而流产率却很高,这可能与睾丸精子的成熟度较差有关[4]。为了减少反复的附睾穿刺给病人带来的痛苦和经济负担,有人尝试冷冻保存附睾精子,冻融精子的受精力和胚胎种植率与新鲜精子相比无统计学差异。但附睾取精的精子数量有时很少,冻融后精子的回收率很低。

    人们担忧ICSI技术有可能将亲代的致病基因尤其是生殖方面的缺陷传给子代。有研究显示,胎儿流产率与梗阻性无精子症的病因有关[5]。先天性因素造成的输精管道梗阻者,胎儿流产率较高;炎症因素造成输精管道梗阻者,婴儿活产率较低;而输精管手术切除或结扎者,婴儿活产率最高。令人高兴的是,出生儿童的统计资料表明ICSI并不增加遗传缺陷儿的发病率[6]。本组目前已出生的22例婴儿经过新生儿疾病筛查证实均未发现有遗传性疾病。可能的解释是异常胚胎的发育极易停滞于妊娠的某个阶段,表现为生化妊娠凋亡或者早产、流产等,因而并不增加患病儿童的出生率。 总之,本研究表明,经皮附睾穿刺取精行ICSI治疗梗阻性无精子症是安全有效的,值得推广应用。

 

【参考文献】
  [1]TEMPLESMITH P D, SOUTHWICK G, YATES C A, et al. Human pregnancy by in vitro fertilization(IVF)using sperm aspirated from epidedymis[J]. J In Vitro Embryo Transf, 1985,2(3):119122.

[2]PALERMO G D, JORIS H, DEVROEY P, et al. Pregnancies after intracytoplasmic injection of a single spermatozoon into an oocyte[J]. Lancet, 1992,340:1719.

[3]刘海宁,汤秀明,李强,等. 卵母细胞浆内单精子显微注射治疗男性不育的效果[J]. 齐鲁医学杂志, 2005,20(1):3132.

[4]BORGES E, ROSSI F L M, PASQUALOTTO F F, et al. Testicular sperm results in elevated miscarriage rates compared to epididymal sperm in azospermfic patients[J]. Sao Paulo Med J, 2002,120(4):122126.

[5]NICOPOULLOS J D, GILLINGSMITH C, RAMSAY. Does the cause of obstructive spermia affect the outcome of intracytoplasmic sperm injection:ametaanalysis[J]. BJU Int, 2004,93(9):12821286.

[6]汤丽莎,冯玉华,李延林,等. 79例卵母细胞浆内单精子注射术(ICSI)治疗男性不育临床和安全性研究[J]. 中国优生与遗传杂志, 2006,14(7):108109.


作者单位:烟台山医院生殖医学研究中心,山东 烟台 264001

作者: 张孝禹 2008-5-29
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