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【摘要】 目的 建立测定丹参提取液中丹参素、丹参酮ⅡA含量的HPLC法。方法 用Hypersil-ODS色谱柱分别进行测定，丹参素以甲醇-醋酸为流动相，检测波长281 nm，丹参酮以甲醇-水为流动相，检测波长268 nm。结果 丹参素在0.1～2.0 μg范围内线性关系良好（r=0.999，P<0.01）,高、中、低3种浓度日内、日间精密度小于10%;丹参酮ⅡA在0.25～4.00 μg范围内线性关系良好（r=0.999,P<0.01），高、中、低3种浓度日内、日间精密度小于10%。样品中丹参素的含量：水提取液为1.38 mg/g，体积分数0.50的乙醇提取液为0.48 mg/g, 体积分数0.95的乙醇提取液为0.28 mg/g。丹参酮ⅡA的含量：水提取液为0.04 mg/g, 体积分数0.50的乙醇提取液为0.64 mg/g,体积分数0.95的乙醇提取液为7.57 mg/g。结论 该方法快速、准确、简便，可用于丹参提取液中丹参素和丹参酮ⅡA含量的测定。
【关键词】 丹参
DETERMINATION OF DANSHENSU AND TANSHINONE ⅡA FROM DANSHEN EXTRACT BY HPLCJI HENG-SHENG, XU HUI-XIA, HAN JIAN-XIANG（Department of Traditional Chinese Medicine, The Affiliated Hospital of Qingdao University Medical College, Qingdao 266003, China） ［ABSTRACT］ObjectiveTo establish HPLC technique for determining the contents of Danshensu and Tanshinone ⅡA in Danshin extract. MethodsHypersil-ODS chromato bar was used for detection. For Danshensu: its mobile phase was CH3OH-CH3COOH, detection wavelength was 281 nm; Tanshinone ⅡA: its mobile phase was CH3OH-H2O; the detection wavelength was 268 nm. ResultsThe linear ranges of Danshensu was 0.1-2.0 μg （r=0.999,P<0.01） and Tanshione was 0.25-4.00 μg （r=0.999,P<0.01,） respectively. The RSDS of within-day were less than 10%. ConclusionA quick, exact and convenient method is established to determine the contents of Danshensu and Tanshinone in extract of Tanshin.［KEY WORDS］Stratography, high-pressure liquid phase；Danshen root; Danshensu; Tanshinone ⅡA
丹参的干燥根及根茎含脂溶性的多种丹参酮类及水溶性的原儿茶酚醛和儿茶酚的衍生物［１］。其有效成分脂溶性丹参酮ⅡA和水溶性丹参素有缓解心绞痛、降低氧耗、缩小心肌梗死范围等作用［2］。本实验探讨以高效液相色谱（HPLC）法测定丹参提取液中丹参素、丹参酮含量可行性。现将结果报告如下。
1 材料和方法
1.1 实验器材Waters-2690高效液相色谱仪（美国沃特斯公司产），MILLI-Q纯水制备仪（美国密理博公司产），AE 240型分析天平（德国METTLER），KQ-300DE型医用超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。
1.2 实验试剂丹参素钠（中国药品生物制品检定所提供,批号0855-200102），丹参酮ⅡA（中国药品生物制品检定所提供，批号 0766-9909）。
1.3 色谱条件 采用Hypersil-ODS色谱柱（4.6 mm×250 mm,5 μm），其中丹参素：流动相为甲醇-体积分数0.001的醋酸（12∶88），流量为1.0 mL/min，检测波长281 nm；丹参酮ⅡA：流动相为甲醇-水（85∶15），流量为1.0 mL/min，检测波长268 nm。
1.4 方法精密称取丹参素钠5.71 mg（相当于5.00 mg丹参素），置10 mL容量瓶中定容至刻度，精密量取2 mL于10 mL容量瓶定量至刻度，作为丹参素对照品，精密量取对照液制成浓度为0.02、0.04、0.10、0.20、0.40 g/L溶液，分别取样5 μL 进样，按上述色谱条件测定。以峰面积（y）为纵坐标，浓度（x）为横坐标，绘制标准曲线。同时，精密称取丹参酮ⅡA 2 mg，定容至10 mL，精密量取1 mL定容至10 mL作为丹参酮ⅡA对照品，精密量取对照液制成浓度为0.05、0.10、0.20、0.40、0.80 g/L溶液，分别取样5 μL进样，按丹参酮ⅡA色谱条件测定。以峰面积（y）为纵坐标，浓度（x）为横坐标，绘制标准曲线。分别取丹参素（0.02、0.10、0.40 mg/L）、丹参酮ⅡA（0.05、0.20、0.80 mg/L）3种浓度行精密度实验。取丹参药材500 g，水加热回流5 h至250 mL，精密量取1 mL于10 mL容量瓶中定容至刻度，精密量取2 mL用0.45 μm滤膜过滤后进样，另取对照液进样，根据峰面积二者对照，求出丹参药材中丹参素的含量。同样取500 g丹参药材用体积分数0.50和0.95乙醇超声提取浓缩至250 mL溶液,同法测定丹参酮ⅡA含量。
2 结 果
丹参素在0.1～2.0 μg范围内与峰面积呈线性关系，回归方程为y=29.642x-0.120（r=0.999,P<0.01）。丹参酮ⅡA在0.25～4.00 μg范围内呈线性关系，回归方程为y=63.948x-0.135（r=0.999,P<0.01）。丹参素日内和日间RSD分别为1.26%、1.68%、1.82%和2.34%、2.54%、2.66%；丹参酮ⅡA日内和日间RSD（%）分别为2.55%、2.87%、2.35%和2.95%、2.75%、2.33%。 样品中丹参素的含量：水提取液为1.38 mg/g，体积分数0.50的乙醇提取液为0.48 mg/g, 体积分数0.95的乙醇提取液为0.28 mg/g。丹参酮ⅡA的含量：水提取液为0.04 mg/g, 体积分数0.50的乙醇提取液为0.64 mg/g, 体积分数0.95的乙醇提取液为7.57 mg/g。
3 讨 论
丹参有效成分为丹参素、原儿茶醛、原儿茶酸等。据文献报道,丹参素和丹参酮ⅡA含量较高［3］,故选择丹参素、丹参酮ⅡA作为本实验质量考察的指标。本文结果显示，丹参素水溶性条件下提取收率较高，丹参酮ⅡA脂溶性条件下提取回收率较高，此方法变异较小，方法稳定。所以，应用HPLC法对丹参中有效成分丹参素和丹参酮ⅡA进行测定快速、准确、简便。
【参考文献】
［１］陈新谦,金有豫,汤光. 新编药物学［M］. 北京：人民卫生出版社, 2003:353.
［2］徐叔云. 现代实用临床药理学［M］. 北京：北京华夏出版社, 1997:1219.
［3］倪坤仪,张国清. 反相高效液相色谱测定丹参注射液的三种有效成份［J］. 药学学报, 1998,23（4）:293.
作者单位：（青岛大学医学院附属医院, 山东 青岛 266003 1 药剂科; 2 中医科）