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【摘要】 目的 探讨乙酰肝素酶（HPA）在喉鳞状细胞癌（喉癌）组织表达及其与喉癌临床分期、淋巴结转移和预后的关系。方法 采用免疫组化技术检测45例喉癌和癌旁组织组织中HPA的表达。结果 HPA在喉癌组织中表达阳性率为53.3%，癌旁组织为13.3%，二者比较差异有显著性（χ2=16.2,P<0.05）；HPA表达阳性率与喉癌的临床分期、淋巴结转移及5年生存率明显相关（χ2=4.86～5.18,P<0.05），与喉癌的组织分化程度无关（χ2=2.13,P>0.05）。结论 HPA在喉癌的侵袭和转移中可能起到重要作用，可作为判断喉癌生物学行为和预后的有用指标。
【关键词】 细胞癌
RELATIONSHIP BETWEEN EXPRESSION OF HEPARITINASE AND BIOLOGIC BEHAVIOR IN LARYNGEAL SQUAMOUS CARCINOMA SONG SHAN-FANG, HAOQING（Department of Otolaryngology, Central Hospital of Binzhou, Huimin 251700, China） ［ABSTRACT］ObjectiveTo study the correlation between expression of heparitinase and prognosis in patients with laryngeal carcinoma. MethodsForty five paraffin-embedded specimens of the carcinoma and adjacent tissues were included. Expression of heparitinase was examined by immunohistochemistry.ResultsThe rate of expression of heparitinase in cancer was significantly higher than that in adjacent tissues （χ2=16.2,P<0.05）. Its expression did not significantly correlate with the histological grade （χ2=2.13,P>0.05）, but correlated with the clinical stage, lymphatic metastasis and survival time （χ2=4.86-5.18,P<0.05）. ConclusionHeparitinase might play an important role in the development and metastasis of laryngeal carcinoma, which may be regarded as a valuable marker to evaluate its biological behavior and prognosis.［KEY WORDS］Laryngeal neoplasms; Heparitinase; Immunohistochemistry
乙酰肝素酶（HPA）是近年来克隆出来的一种内糖苷酶，可降解细胞外基质和基膜中的硫酸乙酰肝素。最近研究发现，HPA在多种人类恶性肿瘤中高表达，具有促进肿瘤细胞侵袭和转移的作用，并且与肿瘤新生血管的形成有密切关系［１］。本文采用免疫组织化学技术对喉鳞状细胞癌（喉癌）和癌旁组织中HPA的表达进行研究，探讨HPA与喉癌生物学行为的关系。
1 材料与方法
1.1 标本来源收集滨州市中心医院耳鼻喉科1995～2002年手术切除的喉癌组织标本45例。男33例，女12例；平均年龄57岁。按TNM分期标准（1997）分为Ⅰ～Ⅱ期16例，Ⅲ～Ⅳ期29例。组织学类型均为鳞状细胞癌，其中高分化15例，中分化27例，低分化3例。有颈部淋巴结转移者21例。术后5年生存率为44.4%（20/45）。所有病人手术前均未接受放、化疗或生物治疗。45例喉癌标本均取远离癌灶2 cm处的癌旁组织作为对照。
1.2 试剂与方法所有标本均经40 g/L的中性甲醛固定，石蜡包埋，4 μm厚切片。采用免疫组化PV 6000 法染色，具体操作步骤按说明书进行。鼠抗人HPA单克隆抗体为Santa Cruz公司产品（1∶200），PV 6000试剂及DAB显色试剂均购自北京中杉生物试剂公司。每次染色均设阴性及阳性对照。
1.3 结果判断HPA染色阳性为胞浆呈清晰棕黄色颗粒。光镜下每张切片随机选取5个高倍视野，每个视野计数200个细胞。染色强度分级［2］：无着色为0、淡黄色为1、黄色及棕褐色为2；阳性细胞数分级：阳性细胞数<50%为0、50%～75%为1、>75%为2。两项得分相乘，结果≥2为阳性表达。
1.4 统计学分析采用卡方检验，P<0.05为差异有显著性。
2 结 果
2.1 HPA在喉癌和癌旁组织中的表达本组45例喉癌组织HPA表达阳性率为53.3%（24/45），HPA蛋白主要定位于癌细胞质，癌巢边缘的癌细胞染色更强，间质血管内皮细胞和纤维母细胞也可见一定强度的表达；45例癌旁组织中HPA阳性表达率为13.3%（6/45）。HPA在喉癌组织表达阳性率明显高于癌旁组织（χ2=16.2,P<0.05）。
2.2 HPA的表达与喉癌临床病理学特征的关系临床分期Ⅰ～Ⅱ期的喉癌组织HPA表达阳性率为31.3%，Ⅲ～Ⅳ期为65.5%，二者间比较差异有显著性（χ2=4.86,P<0.05）。有颈部淋巴结转移的喉癌组织HPA表达阳性率（71.4%）高于无转移者（37.5%），其差异有显著意义（χ2=5.18,P<0.05）。而HPA表达阳性的病人术后5年生存率（29.2%）明显低于阴性表达者（61.9%）（χ2=4.86,P<0.05）。HPA在高、中、低分化的喉癌组织中的表达阳性率分别为53.3%、51.9%、66.7%，三者间比较差异无显著性（χ2=2.52,P>0.05）。
3 讨 论
肿瘤要实现浸润和转移需要借助降解细胞外基质的酶，以突破细胞外基质和基底膜屏障，其中最重要的是基质金属蛋白酶（MMPs）和HPA。近年来发现，HPA基因定位于4q22，包括14个外显子和13个内含子［3,4］，是体内唯一可降解乙酰肝素蛋白多糖的内源性酶。主要通过降解细胞外基质和血管基底膜、促使乙酰肝素释放和活化肝素结合型生长因子、诱导血管生成和促进释放尿激酶型纤溶酶原激活物和组织型纤溶酶原激活物等方式促进癌细胞的侵袭和转移。其表达水平的升高与肿瘤的浸润和转移能力密切相关。在正常情况下，HPA的表达主要限于胎盘、免疫器官和免疫细胞中，但在乳癌、结肠癌、肝癌、食管癌、胃癌、肺癌及胰腺癌等高转移性恶性肿瘤细胞中高表达，并且在肿瘤的浸润和转移中发挥重要作用 ［5,6］。TAKAOKA等［7］用RT-PCR技术检测胃癌组织HPA的表达显示，正常胃黏膜组织中无HPA的表达，胃癌组织中HPA的表达与肿瘤体积和局部淋巴结转移呈明显正相关性，高表达HPA的病人预后差。MIKAMI等［8］用免疫组化方法检测103例食管癌组织中HPA的表达显示，晚期食管癌HPA的表达强于早期食管癌，该酶的表达与食管癌的静脉及淋巴结转移呈正相关。国内学者报道HPA在子宫内膜癌组织中的阳性率为65.0%，并与组织学分级、临床手术分期、肌层浸润深度和淋巴结转移密切相关［9］。本文研究结果显示，HPA在喉癌组织中表达阳性率（53.3%）明显高于癌旁组织（13.3%）；在Ⅲ～Ⅳ期、有局部淋巴结转移和术后生存时间少于5年的喉癌组织中HPA表达阳性率明显高于Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移和术后生存时间超过5年者；然而，HPA表达阳性率与喉癌分化程度无关。提示HPA的表达可能与喉癌的发生和进展有关。推测喉癌细胞可分泌HPA，降解基底膜及血管壁中的乙酰肝素蛋白多糖，增加癌细胞的侵袭及转移能力。因此，HPA在喉癌的发生和浸润转移中发挥重要作用，可作为判断喉癌生物学行为和预后的有用指标。
【参考文献】
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［9］王琳. 乙酰肝素酶表达与子宫内膜癌临床病理学特征的关系［J］. 齐鲁医学杂志, 2006,21（4）:330-331.
作者单位：（滨州市中心医院耳鼻喉科,山东 惠民 251700）