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【摘要】 目的 探讨一种建立2型糖尿病大鼠模型的方法。方法 选择雄性大鼠46只，随机分为2组。模型组23只大鼠在左侧T6～11椎间关节处，手术置入特制的硅胶片，制作胰腺自主神经刺激大鼠模型；对照组23只大鼠仅行左侧T6～11椎间关节处切开手术。普通饲养28～45 d，期间分别测定血糖和胰岛素浓度，实验结束腹腔麻醉取大鼠胰腺作β细胞内颗粒病理检查。结果 模型组大鼠体质量增长变慢，血糖浓度显著高于对照组，胰岛素水平显著低于对照组(t=4.69～16.66，P<0.05）。模型组大鼠胰腺β细胞内颗粒减少。结论 脊神经刺激可诱导建立2型糖尿病大鼠模型，为中医推拿整脊治疗糖尿病提供了科学实验模型。
【关键词】 糖尿病,2型；模型,动物；大鼠；脊神经
ESTABLISHMENT OF TYPE 2 DIABETES RAT MODEL BY SPINAL NERVE STIMULATION
YU ZHAOHUA, CHEN FUXIANG, YU WEIJIE, et al
(Department of Rehabilitation Medicine, The Affiliated Hospital of Qingdao University Medical College, Qingdao 266003, China)
［ABSTRACT］ObjectiveTo establish a type2 diabetes rat model by spinal nerve stimulation. MethodsFortysix male rats were randomly divided into two groups: the model group (23 mice) received implantation of tailormade gel silica film on the left side of T6-11 vertebrae,and the control group (23 mice) received sham operation on the left side of T6-11 vertebrae. The rats were ordinarily bred for 28-45 days, during which blood glucose and insulin concentration were checked. At the end of the experiment, the rats were anaesthetized and pancreatic glands obtained for histology study.ResultsCompared with the control group, the increase of body weight in the model group was slowed down, the blood glucose level significantly increased, the insulin level decreased (t=4.69-16.66,P<0.05), and the number of granules in pancreatic βcells decreased. ConclusionA type2 diabetic rat model can be established via stimulation of spinal nerve. The model can be used for research in massage therapy of this condition.
［KEY WORDS］Diabetes mellitus, type 2; Model, animals; Rats; Spinal nerves
2型糖尿病动物模型分为实验性、自发性和转基因动物模型。通过大鼠胰腺自主神经间接刺激造模，其机制与人类2型糖尿病的发病机制相似，可以作为2型糖尿病模型进行研究。本研究采用一次硅胶片置入的方法，间接刺激大鼠胰腺自主神经，制作2型糖尿病模型，并观察其血糖、胰岛素水平及胰腺病理变化，现报告如下。
1 材料和方法
1.1 实验动物
4周龄雄性SPF级SD大鼠（青岛大学医学院实验动物室提供）46只，体质量(250±10)g。SPF级饲养环境，环境温度20～25 ℃,喂养基本饲料购自青岛实验动物部。将大鼠随机分为模型组23只，对照组23只。
1.2 主要仪器和试剂
罗氏公司（ROCHE）的优越血糖仪（ACCUCHEK ADVANTAGE），中国原子能科学院胰岛素放射免疫分析试剂盒。
1.3 动物模型的制作方法
大鼠腹腔注射水合氯醛(0.10～0.12 g/kg),麻醉满意后每小时追加1/3量维持,对其中23只SD大鼠行左侧脊神经根压迫，对照组23只大鼠行椎旁手术切开再缝合（假手术）。手术方法：剪毛、固定、消毒、铺巾；棘突旁切开皮肤,分离肌肉，拉钩牵开,咬除T6～11后关节突,充分暴露左、右侧T6～11神经根；模型组SD大鼠取15 mm×1 mm×1 mm大小的硅胶片，质量（60±3）mg（先置于体积分数为0.75 的乙醇中消毒3 h,再置于0.1 mmol/L 苯扎溴铵中保存），局部固定牢固, 逐层缝合,无菌纱布覆盖。术后大鼠苏醒,放回笼中观察。
1.4 观察指标和方法
1.4.1 一般情况
观察大鼠精神状态、体形、毛色、体质量等。
1.4.2 血糖和胰岛素浓度测定
大鼠于术后28、45 d进行葡萄糖耐量试验（OGTT），观察糖代谢的特征。测定前禁食12 h,取尾全血测定空腹血糖和胰岛素水平。用大鼠灌胃器灌注500 g/L葡萄糖0.5 g/kg，灌胃后30、60、120 min分别取尾血测定血糖浓度。
1.4.3 胰腺病理检查
受试SD大鼠于术后45 d取出胰腺做病理检查。腹腔注射水合氯醛麻醉，剖腹，充分暴露手术视野，在腹腔左上区胃大弯处找到脾脏，在脾门有较多的血管组织和有少量粉色类似脂肪组织（反光性强）处，分离出胰腺，从靠近脾脏部位快速留取如绿豆大小的胰腺组织标本数块。将标本迅速放入体积分数0.04的甲醇溶液中固定，用超敏反应试剂盒行胰腺石蜡切片染色，免疫组化阳性信号为棕黄色颗粒。
1.5 统计学处理
均数间比较采用t检验。
2 结果
2.1 一般情况
剔除麻醉手术失败死亡6只，40只（85%）完成实验全过程。对照组大鼠体形适中，精神状况良好，动作自如，反应灵敏，毛发平伏有光泽；模型组大鼠消瘦，精神萎靡，反应迟钝，毛竖无光泽，动作迟缓。模型组与对照组比较体质量增长缓慢（t=4.10、4.69,P<0.05）。见表1。表1 两组大鼠体质量的比较（略）
2.2 血糖、胰岛素变化
术后28、45 d，模型组大鼠空腹血糖、30、60、120 min血糖浓度显著高于对照组，空腹胰岛素水平显著低于对照组，差异有显著性(t=2.30～16.6,P<0.05）。见表2。表2 术后28、45 d时血糖和胰岛素水平（略）
2.3 胰腺病理改变
与对照组比较，模型组大鼠胰腺胰岛β细胞内颗粒减少。模型组大鼠胰岛素阳性细胞百分比为19.3%，低于对照组的28.12%。
3 讨论
目前制作大鼠糖尿病模型主要有4种方法，包括胰腺切除、化学物质诱导、自发性模型、转基因模型等[1]。通过脊神经压迫、间接刺激自主神经干预胰腺功能建立糖尿病模型未见报道。本研究通过硅胶片压迫刺激SD大鼠脊神经[2,3]，诱导大鼠胰腺自主神经功能减退，从而影响胰腺的糖代谢功能。本文结果显示，模型组大鼠糖代谢异常，血糖升高，内分泌相异常，胰岛素阳性细胞百分比低于对照组，胰岛β细胞内颗粒减少。
本模型设计制作关键在于选用成年雄性大鼠，避免在实验过程中因受孕影响观测数据；硅胶片在大鼠脊柱旁T6～11脊神经处置入。通过观察显示，模型组大鼠表现为明显多尿,多饮,多食,体质量增长缓慢,一般状态差，而对照组大鼠生长与营养状况良好；模型组大鼠术后28、45 d血糖浓度显著高于对照组，且28 d测定的数值低于45 d，符合2型糖尿病特征[4～6]。
此模型证实人类脊柱退变、小关节紊乱征及软组织损伤等因素可间接刺激内脏神经，影响胰腺自主神经功能，诱发糖代谢异常。该模型的建立有助于探讨人类部分糖尿病病人的发病机制和临床治疗，有一定的临床价值。
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作者单位：青岛大学医学院附属医院康复医学科，山东 青岛 266003