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肺鳞癌组织Ezrin和CD44v6表达及意义

来源:齐鲁医学杂志
摘要:【摘要】目的探讨Ezrin和CD44v6在肺鳞癌组织中的表达及其与淋巴结转移、TNM分期的相关性。方法采用免疫组化EnVison法,检测Ezrin和CD44v6蛋白在60例肺鳞癌组织及其癌旁正常组织中的表达。结果Ezrin和CD44v6在肺鳞癌组织中表达阳性率高于癌旁正常组织,差异有显著性(Hc=35。Ezrin和CD44v6在肺鳞癌组织中的......

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【摘要】  目的 探讨Ezrin和CD44v6在肺鳞癌组织中的表达及其与淋巴结转移、TNM分期的相关性。方法采用免疫组化EnVison法,检测Ezrin和CD44v6蛋白在60例肺鳞癌组织及其癌旁正常组织中的表达。结果Ezrin和CD44v6在肺鳞癌组织中表达阳性率高于癌旁正常组织,差异有显著性(Hc=35.447、65.103,P<0.01);Ezrin和CD44v6在肺鳞癌组织中的表达呈正相关(rs′=32.646,P<0.01),且均与肿瘤TNM分期、分化程度及淋巴结转移相关(Hc=11.013~35.447,P<0.01),TNM分期越晚、分化越低、有淋巴结转移者,Ezrin和CD44v6表达的强度越强、阳性率越高。结论 Ezrin与肺鳞癌的发生和转移密切相关,其作用机制可能与CD44v6相关;Ezrin基因蛋白检测可能作为肺鳞癌进展程度及其预后的判断指标。

【关键词】  肺肿瘤;癌,鳞状细胞;Ezrin;CD44v6

EXPRESSION AND CLINICAL SIGNIFINANCE OF Ezrin AND CD44v6 IN LUNG SQUAMOUS CELL CARCINOMA WEI ZHAOXIA, YANG RONGHUA, ZHU KAI, et al (Department of Chest Surgery, The Affiliated Hospital of Qingdao University Medical College, Qingdao, 266003, China); Objective To explore the expressions of Ezrin and CD44v6 in lung squamous cell carcinoma (LSCC) and their association with lymph node metastasis. Methods EnVison immunohistochemical method was used to study the expressions of Ezrin and CD44v6 in 60 patients with LSCC and in paraneoplastic normal tissue. Results The positive expressions of Ezrin and CD44v6 in LSCC were higher than that in the paraneoplastic, the difference being significant (Hc=35.447,65.103;P<0.01); The expressions of Ezrin and CD44v6 in LSCC were positively correlated (rs′=32.646,P<0.01) and showed correlation with TNM staging, degree of differentiation, and lymp node metastasis (Hc=11.013-35.447,P<0.01). Their expressions were much stronger when TNM was more advance, the differentiation was poor,and with lymph node metastasis. Conclusion Ezrin is closely associated with occurence and metastasis of LSCC, and its mechanism of action maybe related to CD44v6. A detection of Ezrin can be used as a parameter to estimate the development and prognosis of this malignancy.

  [KEY WORDS] Lung neoplasms; Carcinoma, squamous cell; Ezrin; CD44v6

  侵袭和转移是恶性肿瘤的重要特征,也是病人死亡的主要原因。与肿瘤转移高度相关的基因是目前肿瘤转移机制研究的热点,这些基因及其产物可能成为肿瘤抗转移治疗新的靶点或观察病人预后的重要指标。近年来的研究显示,Ezrin在肿瘤转移过程中扮演重要角色,Ezrin可能通过调控黏附分子和参与肿瘤细胞信号转导等途径,在肿瘤发展、浸润和转移过程中起重要作用。CD44作为一种重要的黏附分子,与许多恶性肿瘤的侵袭和转移密切相关,CD44v6是其变异体。本文采用免疫组化EnVison法,检测Ezrin和CD44v6蛋白在肺鳞癌组织中的表达,并分析其相关性,以及其与肿瘤的TNM分期、肿瘤的分化程度和淋巴结转移的关系,以期为肺鳞癌的诊治提供新的思路。

  1 材料和方法

  1.1 标本及其来源

  60例肺鳞癌标本取自2003年1月~2005年6月间青岛大学医学院附属医院肺癌手术病人,均有明确病理诊断,均无肝炎、糖尿病及其他自身免疫性疾病,术前未行放化疗。其中男38例,女22例;年龄39~73岁,平均56.4岁。高中分化39例,低分化21例;淋巴结阳性32例,阴性28例;按UICC 1997年肺癌PTNM分期标准:Ⅰ期21例,Ⅱ期13例,Ⅲ期22例,Ⅳ期4例。所有病例同时取癌旁正常肺组织(距肿瘤切缘2 cm以上)作为对照。所有标本均经40 g/L甲醛溶液固定,石蜡包埋,5 μm厚连续切片,其中1张行苏木精伊红染色,核实诊断;其余切片行免疫组化检测。

  1.2 Ezrin和CD44v6表达检测方法

  Ezrin和CD44v6的检测采用免疫组化二步法(EnVison法), Ezrin(SC71080)鼠抗人单克隆抗体购自美国Santa Cruz公司;鼠抗人CD44v6单克隆抗体(克隆系:VFF7)及PV9000试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。标本经40 g/L中性甲醛溶液固定,石蜡包埋,切片厚3~4 μm,免疫组化染色。免疫组化采用EnVision二步法,高温、高压抗原修复, 修复液为1 mmol/L EDTA(pH8.0),Ezrin工作稀释度为1∶200,DAB显色,苏木精衬染后,脱水,透明,封片,光镜下观察。

  1.3 结果判断

  采用半定量法,于200倍光镜下随机选取5个视野,各计数200个细胞。Ezrin和CD44v6阳性染色均呈棕黄色颗粒状。两者均按染色强度和阳性表达细胞数,参考MATHEW等[1]分级标准分级:阳性细胞数在10%以内为(-),在10%~25%为(+),26%~50%为(),50%以上为()。

  1.4 统计学处理

  应用SPSS 10.0及PPMS 1.5[2]统计软件进行数据处理,数据间比较采用秩和检验、χ2检验,相关性检验采用Spearman rank相关分析。

  2 结 果

  2.1 Ezrin在肺鳞癌组织中的表达

  Ezrin阳性染色呈棕黄色颗粒状,主要位于癌细胞的细胞质内, 胞膜也有部分着色。在肺鳞癌组织中,Ezrin表达阳性率为90.00%,在癌旁组织中表达阳性率为46.67%,两者比较差异有显著性(Hc=65.103,P<0.01)。Ezrin蛋白表达在不同TNM分期之间(Hc=35.447,P<0.01)、不同肿瘤分化之间(Hc=12.967,P<0.01)、淋巴结有无转移之间(Hc=11.013,P<0.05)差异均有显著性。见表1。

  2.2 CD44v6在肺鳞癌组织中的表达

  CD44v6阳性显色呈棕黄色颗粒状,着色以细胞膜为主,少数有细胞浆着色。在肺鳞癌组织中,CD44v6蛋白的表达阳性率为81.67%,在癌旁组织中表达阳性率为25.00%,两者比较差异有显著性(Hc=46.705,P<0.01)。CD44v6蛋白表达在不同TNM分期之间(Hc=27.547,P<0.01)、不同肿瘤分化之间(Hc=13.616,P<0.01)、淋巴结有无转移之间(Hc=30.599,P<0.01)差异均有显著性。见表2。

  2.3 肺鳞癌组织中Ezrin表达与CD44v6表达的相关性

  60例肺鳞癌组织中,Ezrin和CD44v6均表达阳性者48例,二者均阴性者9例。Ezrin和CD44v6蛋白在肺鳞癌组织中的表达呈显著正相关(rs′=32.646,P<0.01)。见表3。 表1 Ezrin在肺鳞癌组织中的表达及其与各种临床病理参数之间的关系临床病理特征Ezrin表达表2 CD44v6在肺鳞癌组织中的表达及与各种临床病理参数之间的关系临床病理特征CD44v6表达表3 肺鳞癌组织Ezrin和CD44v6表达的关系(例)Ezrin表达CD44v6表达

  3 讨 论

  肿瘤转移是恶性肿瘤治疗失败和病人死亡的主要原因。目前已知肿瘤的侵袭、转移是一个多步骤、多阶段、多基因参与的复杂过程。近年来,分离和克隆肿瘤转移基因与肿瘤转移抑制基因,并对这些基因的调控因子和转移过程中的作用机制进行深入研究,已成为肿瘤转移分子机制研究的重要方向。

  Ezrin蛋白为膜细胞骨架连接蛋白, 是连接细胞膜和细胞骨架之间的EMR家族成员之一。Ezrin在细胞的多种正常生理活动中发挥着重要作用,如细胞形态的改变、细胞运动、黏附、有丝分裂、细胞极性等[3]。近年的研究表明,Ezrin与肿瘤的转移密切相关,通过调整黏附分子和信号转导等途径, 参与细胞与细胞、细胞与基质之间的相互作用, 从而在肿瘤发展、侵袭和转移过程中发挥重要作用。齐鲁医学杂志2009年12月第24卷第6期 Med J Qilu, December 2009, Vol.24, No.6

  KHANNA等[4]和YU等[5]的实验结果表明,Ezrin在具有高转移特性的鼠横纹肌肉瘤及骨肉瘤细胞株中高度表达,抑制其表达后两类细胞株的转移能力大大降低,当野生型Ezrin高度表达后可使原来无转移特性的细胞获得较高的转移能力,提示Ezrin的异常表达很可能与恶性肿瘤细胞的侵袭和转移能力有关。本文结果显示,肺鳞癌组织中Ezrin蛋白的表达阳性率高于癌旁组织,两者之间差异有显著性;Ezrin蛋白的表达在不同TNM分期之间、不同肿瘤分化之间、淋巴结有无转移之间差异均有显著性,肿瘤分期越晚、分化越低、有淋巴结转移者,Ezrin表达的阳性率越高,提示Ezrin基因可能在肺鳞癌的发生、发展过程中发挥着重要作用。Ezrin基因的高表达可能预示着病人的预后不佳,Ezrin表达测定有助于早期预后判断。

  CD44作为一种重要的黏附分子,在肿瘤的浸润和转移过程中发挥重要作用。这种作用是否与Ezrin促进肿瘤转移机制相关或存在内在联系尚不清楚。本文采用免疫组化EnVison法,同时检测了60例肺鳞癌组织标本及其癌旁组织中与肿瘤的浸润和转移密切相关的CD44变异体——CD44v6蛋白的表达情况,结果显示,在肺鳞癌组织中,Ezrin与CD44v6蛋白的表达呈正相关关系,CD44v6蛋白的表达阳性率高于癌旁组织,两者之间差异有显著性。CD44v6蛋白的表达在不同TNM分期之间、不同肿瘤分化之间、淋巴结有无转移之间差异均有显著性。分期越高、分化越低、有淋巴结转移者,CD44v6表达的阳性率越高。提示检测CD44v6的表达可作为判断肺鳞癌临床生物学行为的指标。

  关于Ezrin与CD44v6蛋白在肿瘤组织中表达的相关性研究较少。PUJUGUET等[6]研究显示,Ezrin可以直接与细胞基质透明质酸的受体CD44分子的胞浆部分发生作用,引起膜细胞骨架连接蛋白Ezrin 的功能激活,从而可导致骨肉瘤细胞系转移能力的增强。最近,ORIANROUSSEAU等[7]的实验显示,Ezrin与CD44结合的功能域相互作用,并通过MEK/ERK信号传导途径,诱导瘤细胞侵袭表型的发生。本文结果显示,Ezrin和CD44v6蛋白在肺鳞癌组织中的表达呈正相关,说明Ezrin在肺鳞癌的侵袭和转移中的作用与CD44v6有关,二者在肺鳞癌的进展过程中发挥协同作用。

【参考文献】
    [1]MATHEW J, HINES J E, OBAFUNWA J O, et al. CD44 is expressed in hepatocellular carcinomas showing vascular invasion[J]. J Pathol, 1996,179(1):7483.

  [2]周晓彬,纪新强,徐莉. 医用统计学软件PPMS 1.5的组成和应用特点[J]. 齐鲁医学杂志, 2009,24(1):2932.

  [3]MARTIN TA, HARRISON G, MANSEL R E, et al. The role of the CD44 /Ezrin complex in cancer metastasis[J]. Crit Rev Oncol Hematol, 2003,46(2):165186.

  [4]KHANNA C, WAN X, BOSE S, et al. The membranecytoskeleton linker ezrin is necessary for osteosarcoma metastasis[J]. Nat Med, 2004,10(2):182186.

  [5]YU Y, KHAN J, KHANNA C, et al. Exp ression p rofiling identifies the cytoskeletal organizer ezrin and the developmental homeop rotein Six21 as keymetastatic regulators[J]. Nat Med, 2004,10(2):175181.

  [6]PUJUGUET P, DEL MAESTRO L, GAUTREAU A, et al. Expressions of CD44s, MMP9, and Ki67: possible association with invasion, metastasis, andrecurrence of osteosarcoma[J]. Ai Zheng, 2002,21:745750.

  [7]ORIANROUSSEAU V, CHEN L, SLEEMAN J P, et al. CD44 is required for two consecutive steps in HGF/cet signaling[J]. Genes Dev, 2002,16:30743086.

 


作者单位:(青岛大学医学院附属医院,山东 青岛 266003 1 胸外科; 2 病理科)

作者: 魏朝霞,杨荣华,祝凯,牛兆山,李玉军 2010-1-13
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