子宫内膜样腺癌组织MMP2和Ki67表达及其意义

【摘要】  目的 探讨基质金属蛋白酶2(MMP2)和Ki67在子宫内膜样腺癌组织的表达及其临床意义。方法采用SP方法检测MMP2和Ki67在20例正常增生期子宫内膜、60例子宫内膜增生症和80例子宫内膜样腺癌组织中的表达。结果 MMP2、Ki67阳性表达率在子宫内膜样腺癌、子宫内膜不典型增生组中的表达均高于增生期子宫内膜及子宫内膜增生过长组，差异均有显著性(χ2=5.406～38.649,P均<0.05);而MMP2、Ki67阳性表达率在子宫内膜样腺癌、子宫内膜不典型增生组中比较差异均无显著性(P均>0.05);其在增生期子宫内膜、子宫内膜增生过长组之间比较差异也无显著性(P均>0.05)。子宫内膜样腺癌组织中MMP2的强阳性表达与病理组织学分级、淋巴转移及手术病理分期均有关(χ2=9.263～17.939，P均<0.05);Ki67的强阳性表达与病理分级有关(χ2=11.302，P<0.05)，而与淋巴结转移及手术病理分期无关(P均>0.05)。在80例子宫内膜样腺癌组织中，MMP2与Ki67蛋白阳性表达水平呈正相关关系(r=0.878，P<0.05)。结论 MMP2与Ki67协同促进子宫内膜腺上皮生长、增殖，可能在子宫内膜样腺癌的发生、发展过程中起重要作用，两者联合检测对于筛选癌前高危个体可能具有更大意义。

【关键词】  明胶酶A;Ki67抗原;癌,子宫内膜样;免疫组织化学

EXPRESSIONS OF MMP2 AND Ki67 IN ENDOMETRIOID ADENOCARCINOMA AND THEIR SIGNIFICANCE ZHANG WENHUA, WEI XIAOQIANG, DAI SHUZHEN (Department of Gynecology, The Second Affiliated Hospital of Qingdao University Medical College, Qingdao 266042, China); Objective To study the expressions of MMP2 and Ki67 in endometrioid adenocarcinoma (EA) and their significance. Methods The expressions of MMP2 and Ki67, in 20 cases of proliferative phase of endometrium (PPE), 60 cases of endometrial hyperplasia (EH) and 80 cases of EA, were detected with streptavidinperoxidase (SP) technique. Results The positive expressions of MMP2 and Ki67 in atypicalhyperplasia endometrium (AHE) and EA were higher than that in PPE and EH (χ2=5.406-38.649,P<0.05); but the difference of the expressions of MMP2 and Ki67 between the AHE and EA were not significant (P>0.05), and there was also no significant difference between PPE and EH (P>0.05). The overexpression of MMP2 in EA was related to its histology grading, pathology staging and lymphatic metastasis (χ2=9.263-17.939,P<0.05). The overexpression of Ki67 was associated with histology grading (χ2=11.302,P<0.05), but not with pathology staging and lymphatic metastasis (P>0.05). Of the 80 cases of EA, the positive expressions of MMP2 and Ki67 were positively correlated (r=0.878,P<0.05). Conclusion MMP2 and Ki67 synergistically facilitate endometrial glandular epithelium to proliferate and carcinogenesis. The occurrence of endometrial adenocarcinoma may be ralated with the expressions of MMP2 and Ki67. A combination detection of MMP2 and Ki67 may be more significant in screening precancerous highrisk individuals.

　　[KEY WORDS] Gelatinase A; Ki67 antigen; Endometrial neoplasms; Immunohistochemistry

　　子宫内膜样腺癌是妇科最常见的恶性肿瘤之一，与其他肿瘤一样，侵袭和转移是其重要特征，也是肿瘤病人死亡的主要原因。在肿瘤侵袭和转移的过程中基质金属蛋白酶(MMPs)是必不可少的。本文通过检测基质金属蛋白酶2(MMP2)及Ki67在子宫内膜腺癌、子宫内膜增生症、正常增生期子宫内膜组织中的表达情况，进一步阐明MMP2和Ki67在子宫内膜腺癌发生、发展中的作用。现将结果报告如下。

　　1 材料与方法

　　1.1 一般资料

　　选取2005年1月～2008年12月在青岛大学医学院第二附属医院妇科接受手术治疗，术后经病理确诊为子宫内膜腺癌的手术标本80例，子宫内膜增生症诊刮标本60例，其中子宫内膜增生过长标本30例(包括单纯增生20例及复杂性增生10例)，子宫内膜不典型增生标本30例，选同期同年龄段20例正常增生期子宫肌瘤病人子宫内膜诊刮标本作为对照。80例子宫内膜腺癌病人平均年龄(54.7±7.0)岁;FIGO分期：Ⅰ期60例，Ⅱ期15例，Ⅲ期5例;分化程度：G1级42例，G2级24例，G3级14例;淋巴结转移者4例。子宫内膜增生过长与不典型增生病人平均年龄分别为(51.7±9.7)与(53.8±7.5)岁。子宫内膜正常增生期子宫肌瘤病人平均年龄(50.2±8.2)岁。所有病人均1年内无宫内置节育环史，3个月内未服用过性激素类药物。3组年龄比较差异无显著性(P>0.05)。

　　1.2 试剂来源

　　本文MMP2、Ki67单克隆抗体，以及SPKITT9000试剂盒均由美国ZYMED公司提供，防脱片剂APES、显色剂DAB为北京中山生物技术有限公司产品。

　　1.3 实验方法

　　所有组织标本均经40 g/L的甲醛固定，石蜡包埋，连续4 μm厚切片，苏木精伊红(HE)染色。MMP2和Ki67的免疫组化检测按SP试剂盒说明书要求进行。

　　1.4 结果判断

　　光学显微镜下以细胞膜、细胞浆、细胞核中存在粗细一致的棕黄色颗粒为阳性,其中MMP2阳性颗粒分布于胞膜、胞浆，而Ki67阳性颗粒分布于胞核。光镜(400倍)下随机计数10个视野的细胞，根据染色的细胞数量分为4级：阳性细胞<10%为0分，阳性细胞10%～24%为1分，阳性细胞25%～49%为2分，阳性细胞≥50%为3分。根据细胞内染色的深浅将不显色、淡黄色、桔黄色和棕黄色分别评为0、1、2、3分，两者评分相加作为该切片的最终评分，将0～1分、2～3分、>3分分别定为阴性、阳性、强阳性。

　　1.5 统计学处理

　　采用PSS 13.0及PPMS 1.5[1]统计软件包进行统计学处理。

　　2 结 果

　　2.1 MMP2和Ki67在各组织中的表达

　　MMP2阳性颗粒主要定位于细胞浆和(或)细胞膜。子宫内膜不典型增生组中MMP2阳性表达率均高于增生期子宫内膜及子宫内膜增生过长组，差异均有显著性(χ2=17.391、8.076，P均<0.05)，子宫内膜样腺癌组中MMP2阳性表达率也均高于增生期子宫内膜及子宫内膜增生过长组，差异均有显著性(χ2=38.649、24.697，P均<0.05);而MMP2阳性表达率在子宫内膜样腺癌、子宫内膜不典型增生组中比较差异无显著性(P>0.05);MMP2阳性表达率在增生期子宫内膜、子宫内膜增生过长组之间比较差异无显著性(P>0.05)。Ki67阳性表达率在子宫内膜样腺癌组中均高于增生期子宫内膜及子宫内膜增生过长组，差异均有显著意义(χ2=21.007、16.369，P均<0.05)，在子宫内膜不典型增生组中Ki67阳性表达率也高于增生期子宫内膜及子宫内膜增生过长组(χ2=9.071、5.406，P均<0.05)。Ki67的阳性表达率在子宫内膜样腺癌、子宫内膜不典型增生组之间比较差异无显著性(P>0.05);Ki67阳性表达率在增生期子宫内膜、子宫内膜增生过长组之间比较差异无显著性(P>0.05)。见表1。

　　2.2 MMP2和Ki67表达与子宫内膜样腺癌临床病理特征的关系

　　子宫内膜样腺癌组织中MMP2的强阳性表达与病理分级、淋巴转移及手术病理分期均有关(χ2=9.263～17.939，P<0.05)。子宫内膜样腺癌组织中Ki67强阳性表达与病理分级有关(χ2=11.302，P<0.05)，而与淋巴结转移及手术病理分期无关(P>0.05)。见表2。

　　2.3 MMP2与Ki67在子宫内膜样腺癌组织中表达的相关性

　　子宫内膜样腺癌组织中MMP2与Ki67蛋白表达水平呈正相关(r=0.878，P<0.01)。见表3。

　　3 讨 论

　　MMPs是一类由结缔组织细胞分泌、参与细胞外基质(ECM)降解的Zn2+依赖的内源性蛋白水解酶。其中MMP2主要作用底物为Ⅳ、Ⅴ型胶原。在基底膜结构中，Ⅳ型胶原是最重要组成部分[2]。近年来研究表明，MMPs家族成员中的MMP2能表3 MMP2与Ki67在子宫内膜样腺癌组织中表达的相关性已有研究表明，MMP2在乳腺、肺及宫颈组织中由发育异常、癌变到浸润的过程均有高水平的表达[4～6]。本实验结果显示，MMP2在子宫内膜增生期呈低水平表达，并随着增生程度上调，MMP2的阳性表达率增高，在子宫内膜样腺癌组织中的阳性表达率显著高于子宫内膜增生、子宫内膜增生过长组，而不典型增生与子宫内膜样腺癌组间其阳性表达率比较无显著差异。这表明MMP2可能在子宫内膜出现癌变倾向的早期即发挥作用。本实验结果还显示，MMP2在子宫内膜样腺癌组织中表达显著增强，并与肿瘤的组织病理分级、淋巴结转移及手术病理分期密切相关，这与文献报道结果一致[7]。说明MMP2在子宫内膜样腺癌的发生发展过程中可能起重要作用。

　　Ki67蛋白是一种与细胞增殖相关的核抗原，存在于细胞周期的G1、S、G2、M期，而在G0期细胞中不表达，其表达与细胞增殖密切相关[8]。本实验结果显示，Ki67蛋白的阳性表达率在增生期子宫内膜、子宫内膜增生过长、不典型增生及内膜样腺癌组织中的阳性表达率依次升高，其在子宫内膜样腺癌中的表达均高于增生期子宫内膜及子宫内膜增生过长组,而在子宫内膜样腺癌、子宫内膜不典型增生组中表达差异无显著性，提示子宫内膜样腺癌的发生与细胞过度增殖有关，而且此过程开始于子宫内膜不典型增生阶段，据此推测Ki67在不典型增生内膜中的过度表达可作为预后不良的指标之一。同时，本实验还提示，Ki67与组织分化程度有关，而与手术分期、肌层浸润无关，组织分化程度越低，Ki67蛋白的阳性过表达率越高，因此，Ki67可作为评价子宫内膜样腺癌细胞增殖、分化状态的重要指标，可用于判断肿瘤的侵袭能力。

　　本实验同时显示，在子宫内膜样腺癌组织中MMP2与Ki67两者之间表达具有正相关性。提示MMP2与Ki67协同促进子宫内膜腺上皮生长、增殖并促进癌变，两者联合检测对筛选癌前高危个体可能会有更大意义。

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作者单位：(1 青岛大学医学院第二附属医院妇科，山东 青岛 266042; 2 青岛大学医学院附属医院妇科)