宫颈癌介入化疗前后MMP2和Ki67表达及意义

【摘要】  目的 探讨MMP2和Ki67在宫颈癌介入化疗前后表达的变化及其对预测介入化疗敏感性的作用。方法 在介入化疗前后用免疫组化方法测定46例宫颈癌组织MMP2、Ki67蛋白的表达。结果 宫颈癌介入化疗临床总有效率为78.26%，介入化疗有效率与临床期别无关(χ2=0.161，P>0.05)。介入化疗前后宫颈癌组织中MMP2、Ki67蛋白的表达差异均有显著性(χ2=4.792、5.134，P<0.05)。介入化疗前MMP2阳性者介入化疗有效率为82.86%，MMP2阴性者介入化疗有效率为63.64%，两者比较差异无显著性(χ2=1.817，P>0.05);介入化疗前Ki67阳性者介入化疗有效率为83.78%，Ki67阴性者介入化疗有效率为55.56%，两者比较差异有显著性(χ2=7.521，P<0.05)。结论 介入化疗能显著改变宫颈癌组织中MMP2和Ki67蛋白的阳性表达率，抑制肿瘤细胞的增殖和浸润;介入化疗前检测宫颈癌组织中Ki67蛋白的表达可能用于预测介入化疗的临床疗效。

【关键词】  宫颈肿瘤;药物疗法;明胶酶A;Ki67抗原

　THE EXPRESSIONS AND THEIR SIGNIFICANCE OF MATRIX METALLOPROTEINASE2 AND Ki67 IN CERVICAL CANCER BEFORE AND AFTER INTERVENTIONAL CHEMOTHERAPY YANG XIUFENG, WEI XIAOQIANG, ZHANG WENHUA(Department of Gynecology and Obstetrics, Central Hospital of Qingdao, Qingdao 266042, China); Objective To explore the expressions of MMP2 and Ki67 in cervical cancer before and after interventional chemotherapy (IC), and its role in predicting the sensitivity of IC. Methods Expressions of MMP2 and Ki67 protein in 46 samples of cervical cancer were checked by immunohistochemistry before and after IC. Results The total effective rate of IC was78.26%, which was not correlated with clinical stages (χ2=0.161,P>0.05). The differences of expressions of MMP2 and Ki67 before and after IC were significant (χ2=4.792,5.134;P<0.05). Those with positive MMP2 before IC, the effective power was 82.86%; for those with negative MMP2, 63.64%, no significant difference was found between them (χ2=1.817,P>0.05). Those with positive Ki67 before IC, the effective power was 83.78%; and those with negative Ki67, 55.56%, the difference between them being significant (χ2=7.521,P<0.05). Conclusion Interventional chemotherapy could significantly change the positive expression rate of MMP2 and Ki67 in cervical cancer tissue and suppress generation and infiltration of cancer cells. Before IC, a detection of Ki67 expression in the cancer tissue is possible to predict the efficacy of the therapy.

　　[KEY WORDS] uterine cervical neoplasms; drug therapy; gelatinase A; Ki67 antigen

　　宫颈癌是全球妇女最常见的恶性肿瘤之一。长期以来，化疗治疗晚期或复发性宫颈癌，处于辅助性和姑息性治疗的地位。随着介入放射诊断学和治疗学的不断发展，术前经髂内动脉介入化疗在宫颈癌术前治疗中的应用越来越受到重视。本研究通过检测经髂内动脉介入化疗前后46例ⅠB2～ⅡB期宫颈癌组织中MMP2、Ki67蛋白表达的变化，探讨介入化疗对宫颈癌组织浸润能力、细胞增殖的影响，为宫颈癌临床治疗方案的制定、介入化疗疗效和预后的判定提供客观依据。

　　1 资料与方法

　　1.1 研究对象

　　2005年1月—2008年10月，选择在我科住院并且经过介入化疗后获手术机会的宫颈癌病人46例，年龄36～54岁，中位年龄45岁。其中鳞癌43例，腺癌3例。按2000年国际妇产科联盟(FIGO)分期标准：ⅠB2期16例，ⅡA期18例，ⅡB期12例。入选标准：①局部肿瘤巨大(直径≥4 cm);②盆腔检查宫旁增厚，但弹性好;③病人血常规及肝肾功能检查均正常。

　　1.2 治疗方法

　　46例宫颈癌均经宫颈活组织病理检查确诊，术前检查确定无禁忌证。获得知情同意后，在水化基础上采用Sedlinger技术经股动脉穿刺插管，在X线透视下，注入造影剂观察髂血管分支及走行情况，选择子宫动脉或肿瘤主要营养血管，一次性注入化疗药物总量的1/3～1/2，然后退出导管经腹主动脉再次插入对侧髂内动脉，同法注入剩余药物。化疗方案：鳞癌用顺铂60 mg/m2+长春新碱1 mg/m2+博来霉素20 mg/m2;腺癌用顺铂60 mg/m2+阿霉素40 mg/m2+氟尿嘧啶500 mg/m2。栓塞化疗结束后观察阴道流血、流液及下腹痛等症状，化疗后10～14 d进行临床和辅助检查判定疗效，如有效但局部肿瘤仍较大或宫旁浸润仍较严重者，间隔3周后再行下一次介入治疗，但不超过2个疗程。1～2个疗程化疗结束2周后行妇科检查和B超检查，观察宫颈包块及盆腔情况，评定近期疗效。

　　1.3 疗效判断标准

　　化疗前后均由两位副高级职称以上妇科肿瘤专家行三合诊检查评估病变程度，根据妇科B超或CT测量的子宫颈病灶的最大直径和垂直径线大小的变化来评估疗效。根据世界卫生组织(WHO)实体瘤的近期疗效评定标准[1]，分为完全缓解(CR)、部分缓解(PR)、稳定(SD)、进展(PD)。以CR+PR为有效，计算有效率。

　　1.4 免疫组织化学检测

　　收集每例病人术前宫颈活检组织及手术后肿瘤切除组织进行检测。MMP2、Ki67的单克隆抗体、SPKITT9000试剂盒均由美国ZYMED公司提供，防脱片剂APES、显色剂DAB为北京中山生物技术有限公司产品。采用链霉素亲生物蛋白过氧化物酶连接法(SP法)检测，操作步骤严格按照说明书进行。用已知阳性切片作阳性对照，用PBS代替一抗作阴性对照。

　　1.5 免疫组化染色结果的判断标准

　　光学显微镜下以细胞浆、细胞核中存在粗细一致的棕黄色颗粒为MMP2、Ki67阳性，其中MMP2阳性颗粒分布于细胞浆，Ki67阳性颗粒分布于细胞核。每张切片在400倍光镜下随机观察10个视野，每个视野计数100个肿瘤细胞，阳性细胞数占全部肿瘤细胞数百分比(阳性表达率)≥25%为阳性表达，<25%为阴性表达。

　　2 结 果

　　2.1 介入化疗的临床疗效

　　本组46例宫颈癌中42例完成1个疗程介入化疗，4例完成2个疗程化疗。介入化疗后复查均发现包块缩小1/3～2/3，穹隆及盆腔原增厚的组织也明显变软，其中CR者6例，PR者30例，SD者10例，无PD病例，总有效率为78.26%。其中ⅠB2期有效率81.25%(13/16)，ⅡA期有效率77.78%(14/18)，ⅡB期有效率75.00%(9/12)，各期宫颈癌介入化疗有效率比较差异无显著性(χ2=0.161，P>0.05)。46例宫颈癌经介入化疗后均降低临床分期，化疗后行手术治疗。

　　2.2 介入化疗前后宫颈癌组织中MMP2和Ki67蛋白表达的变化

　　介入化疗前宫颈癌组织中MMP2和Ki67蛋白的阳性表达率分别为78.26%(35/46)、80.43%(37/46)，介入化疗后二者的阳性表达率则分别为54.35%(25/46)、58.70%(27/46)，介入化疗前后宫颈癌组织中MMP2、Ki67的阳性表达率比较差异均有显著性(χ2=4.792、5.134，P<0.05)。

　　2.3 MMP2和Ki67蛋白的表达与介入化疗疗效的关系

　　以介入化疗前宫颈癌活检标本作统计学分析，MMP2阳性者化疗有效率为82.86%，MMP2阴性者化疗有效率为63.64%，两者比较差异无显著性(χ2=1.817，P>0.05);Ki67阳性者化疗有效率为83.78%，Ki67阴性者化疗有效率为55.56%，两者比较差异有显著性(χ2=7.521，P<0.05)。

　　3 讨 论

　　手术是宫颈癌的主要治疗手段，但对于ⅠB2～ⅡB期的巨块型宫颈癌(原发肿瘤直径>4 cm)，因肿瘤负荷大，易脉管浸润、盆腔淋巴结转移，按以往常规手术治疗肿瘤易复发和转移，预后较差。近年国内外的研究显示，在术前采用髂内动脉介入化疗能减小肿瘤体积，消除亚临床病灶，降低其周围淋巴结转移的阳性率，明显提高巨块型宫颈癌病人的手术切净率和治愈率[2]。本研究观察了46例ⅠB2～ⅡB期的巨块型宫颈癌病人经介入化疗后的临床疗效，术后复查均发现包块明显缩小，穹隆及盆腔原增厚的组织也明显变软，术中解剖层次清楚，创面出血少，操作较容易，治疗总有效率为78.26%，临床有效率与有关文献报道基本一致[2]，再次证实了介入化疗的临床有效性。而对ⅠB2、ⅡA、ⅡB期宫颈癌介入化疗有效率的比较显示，其化疗有效率差异无显著性，与莫平等[3]的研究结果一致。

　　基质金属蛋白酶(MMPs)是一组由成纤维细胞、内皮细胞等合成和分泌，参与细胞外基质降解的蛋白水解酶家族。MMP2以酶原的形式分泌，被激活之后，形成Ⅳ型胶原酶，降解Ⅳ、V型胶原及明胶等细胞外基质，破坏基膜的完整性，促进微血管生成，使肿瘤细胞得以浸润和转移。国内外的许多研究证实，MMP2与宫颈癌的浸润和转移关系密切[4]。本文结果显示，ⅠB2～ⅡB期的巨块型宫颈癌病人介入化疗以后MMP2蛋白的表达显著下降(P<0.05)，提示介入化疗可能通过抑制宫颈癌组织中MMP2的表达，抑制肿瘤组织基底膜的破坏和新血管的生成，从而改善宫旁浸润，降低脉管转移率。但在介入化疗过程中，介入化疗前MMP2阳性组与MMP2阴性组化疗有效率比较差异无显著性(P>0.05)，原因可能为临床判断化疗效果主要以实体肿瘤大小改变为依据，而介入化疗对MMP2的抑制主要表现为改善宫旁浸润，降低脉管转移，对肿瘤细胞生长的抑制作用相对较小，因此，MMP2阴性宫颈癌病人介入化疗可能还通过其他机制抑制肿瘤细胞的生长。齐鲁医学杂志2010年10月第25卷第5期 Med J Qilu, October 2010, Vol.25, No.5

　　Ki67抗原是存在于增生细胞胞核的一种非组蛋白性核蛋白，与细胞增生密切相关。它在G1后期开始出现，在S期和G2期逐渐升高，M期达到高峰，有丝分裂后逐渐降解消失，半衰期短，且不表达于DNA修复状态的细胞，能准确地反映肿瘤细胞的增殖活性。恶性肿瘤的发生在很大程度上取决于细胞增殖与细胞凋亡的平衡和转化。当肿瘤细胞增殖、凋亡调控失常，即增殖大于细胞凋亡时，肿瘤就可能发展;反之，肿瘤就会缩小甚至消亡。本文结果显示，介入化疗后宫颈癌组织Ki67蛋白表达显著下降(P<0.05)，提示介入化疗降低了宫颈癌细胞的DNA合成速度，抑制了肿瘤细胞的增殖，反映在临床则表现为肿瘤体积的缩小。本文结果还显示，Ki67阳性表达与介入化疗的临床疗效也是一致的，介入化疗前Ki67阳性的宫颈癌病人化疗有效率显著高于Ki67阴性的宫颈癌，反映了化疗药物对增殖活跃的肿瘤细胞杀伤力更强、疗效更好。因而我们认为，Ki67不仅能反映肿瘤细胞的增殖状态，而且能作为恶性肿瘤药物治疗疗效评价的一种重要的参考指标，而在化疗前检测Ki67表达的变化，有望成为预测宫颈癌介入化疗疗效的指标之一。

【参考文献】
  　[1]中华医学会妇产科分会,中华妇产科杂志编辑委员会. 妇科常见肿瘤诊断与治疗规范(草案)[J]. 中华妇产科杂志, 1998,33(11)：694.

　　[2]YAMAKAWA Y, FUJIMURA M, HIDAKA T, et al. Neoadjuvant intraarterial infusion chemotherapy in patients with stage Ⅰb2-Ⅲb cervical cancer[J]. Gynecol Oncol, 2000,77(2)：264270.

　　[3]莫平,马德花,赵淑萍. 介入栓塞化疗对局部晚期宫颈癌组织VEGF表达及MVD影响[J]. 齐鲁医学杂志, 2008,23(6)：213216.

　　[4]罗仪,陈双郧,刘永珍,等. Survivin、CD44v6、MMP2在宫颈癌组织中的表达与侵袭、转移的关系[J]. 实用妇产科杂志, 2006,22(1)：3033.