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关键词 乳腺肿瘤 组织芯片 免疫组织化学 癌基因
Comparative analysis on the expression of associated genes
production in breast carcinoma by tissue microarray and
by traditional pathological investigation
Li Xingong，Wen Li，Fu Jing，et al.
Department of Pathology，Central Hospital of Shengli Petroleum Administrative Bureau，Dongying257034.
【Abstract】 Objective To explore the significance of each type of tissue microarrary on the examination of asˉsociated genes production in breast carcinoma.Methods Tissue microarray technology and immunohistochemistry were used to detect the expression of ER，PR，nm23，Her-2and p53in31cases of breast carcinoma and compared the result with the traditional pathological investigation.Results No difference was found between the immunohistoˉchemistric result by1.0mm tissuemicroarray and by0.5mm tissue microarray.2cases of ER and1of PR were negaˉtiveby traditional pathological technology，but were positive by tissue microarray1case of nm23and1of Her-2were positive by traditional pathological technology，but were negative by tissue microarray.On the expressional strength of ER，PR，nm23，Her-2and p53，the negligible difference was found between by traditional pathological technology and by tissue microarray in some cases.Conclusion On the positive rate of ER，PR，nm23，Her-2and p53，no signifiˉcant difference was found between the result with the traditional pathological investigation and with the tissue microarˉray（P>0.05）.It has important practical significance and broad application prospect in pathology.
Key words breast neoplasms tissue microarray immunohistochemistry oncogene
组织芯片技术是近年发展起来的一种崭新的病理学技术，所需组织块小，信息含量大，可比性强，节省时间和经费，可用于许多研究工作中 ［1］ 。我们利用组织芯片技术检测乳腺癌相关癌基因产物ER、PR、nm23、Her-2、p53，并与常规制片免疫组化标记结果进行比较，探讨不同大小组织芯制成的组织芯片在乳腺癌相关基因产物检测工作中的应用价值。
1 材料与方法
1.1 材料 收集胜利石油管理局中心医院病理科2002年11月～2003年4月收检的外科手术切除乳腺癌标本病例，从中选择先期进行过ER、PR、nm23、Her-2、p53免疫组化检测的31例为观察对象，并选择1例因纤维腺瘤手术切取的瘤旁正常乳腺组织为对照。乳腺癌按照WHO分类标准进行分类。
1.2 方法 手术切取标本后及时用4%中性甲醛液固定，经梯度乙醇脱水，石蜡包埋。标本均先期进行常规制片，HE染色，并结合临床治疗需要进行了常规切片ER、PR、nm23、Her-2、p53免疫组化染色。研究中参考有关文献 ［2］ 报道制作组织芯片。首先复查原始切片，选取并标记具有代表性的区域，每例分别用自行研制的内径1.0mm及0.5mm组织芯穿取针在供体蜡块取材点位置采取2块组织蜡芯，并移送至受体蜡块的用细钻头制成的预制孔中，制成组织阵列蜡块。组织阵列蜡块上部安放直径1.0mm的组织芯，下部安放直径0.5mm的组织芯，每例所取2个组织芯均安放于阵列上下部对应位置以便认定观察。蜡块中央为对照的正常乳腺组织芯。每块组织阵列蜡块共安放63块组织。组织阵列蜡块按常规方法连续切片，厚4μm，裱于10%多聚赖氨酸处理的载玻片。采用S-P法免疫组化染色，0.01M枸橼酸盐缓冲液（pH6.0）高压煮沸抗原修复，苏木紫对比染色。以PBS替代第一抗体做阴性对照。单克隆抗体ER、PR、nm23、Her-2、p53及S-P试剂盒均购自福州迈新生物技术开发公司。ER、PR、p53阳性信号为棕黄色颗粒，定位于细胞核;nm23阳性信号位于胞质;Her-2阳性信号位于胞膜、胞质。
2 结果
2.1 临床资料 31例乳腺癌患者均为女性，年龄26～62岁，中位年龄49岁。病程5天～18个月。其中浸润性导管癌23例，浸润性小叶癌6例，粘液癌2例。肿块最大径1.4～6.5cm。
2.2 组织芯片质量 自行设计和制做的组织芯片能够满足观察研究的要求，但由于为手工所制，组织芯排列不够整齐，且0.5mm直径组织芯在HE染色和免疫组化染色过程中易发生位置滑动，并有少量脱片。
2.3 组织学检查 乳腺浸润性导管癌癌细胞异型性较显著，胞质丰富，红染、淡红染或透明，核大，核仁明显，核分裂像易见，成不规则条索、巢状、片状排列，可见腺样结构。浸润性小叶癌癌细胞较小，相互间粘附性差，稍松散，常呈单排列样浸润于胶原纤维束间，围绕正常导管呈同心圆状排列，部分病例见小巢状、腺泡状结构。粘液腺癌见小簇癌细胞成腺状、小巢状散在漂浮于粘液湖中。
2.4 免疫组化检查 各组免疫组化标记结果见表1。表1 31例乳腺癌常规和组织芯片免疫组化结果比较 （阳性/总例数 略 ） 注: ˇ 组织芯片有脱片;各组比较，免疫组化阳性率差异无显著性，P>0.05
31例乳腺癌常规切片免疫组化结果显示ER阳性22例（70.97%），PR阳性24例（77.42%），nm23阳性24例（77.42%），Her-2阳性20例（64.52%），p53阳性26例（83.87%）。组织芯片免疫组化ER阳性24例（80.00%），PR阳性24例（80.00%），nm23阳性23例（74.19%），Her-2阳性19例（61.29%），p53阳性26例（83.87%）。不同规格组织芯片相比较，免疫组化结果几乎完全一致，除个别脱片外，1.0mm组织芯片显示阳性的病例在0.5mm组织芯片同样显示阳性，而阴性病例结果也相同。常规制片免疫组化阴性，而组织芯片免疫组化阳性者包括ER2例，PR1例;常规制片免疫组化阳性，而组织芯片免疫组化阴性者包括nm23、Her-2各1例。而部分病例常规制片免疫组化和组织芯片免疫组化阳性表达强度略有不同。
3 讨论
3.1 乳腺癌相关癌基因产物表达的临床意义 癌症患者的预后因素与原发肿瘤的生长潜能和转移有关;预测因素与特殊治疗的敏感性和抵抗性有关 ［3］ 。乳腺癌患者的预后因素一般认为包括肿瘤体积、类型、分级、腋窝淋巴结状况、雌激素和孕激素受体（ER、PR）水平及肿瘤细胞的增殖活性。大量临床观察研究表明，乳腺癌组织中ER的存在状态与患者的预后及内分泌治疗结果密切相关，PR是一种孕激素相关蛋白，PR的表达表明ER具有良好的反应，提示患者内分泌治疗可有良好效果。在乳腺癌的临床治疗中，关于癌组织ER、PR、Her-2等的表达情况和表达水平的测 定，已经成为常规性的工作。而癌组织nm23、p53的表达对估计病人预后的意义也渐被认可。原癌基因Her-2（c-erbB-2）是生长因子受体家族的成员之一，人类Her-2基因位于染色体17q21，编码相对分子量为185000的跨膜蛋白。Her-2基因扩增与乳腺癌复发时间和总体生存高度相关，Her-2蛋白的过表达是Her-2基因扩增的结果，是乳腺癌病例预后不良的相关因素。nm23是一种转移抑制基因，其阳性表达与肿瘤的转移呈正相关，与病人预后呈负相关。免疫组化检测到的p53主要为突变型，是预后不良的一个指标。我院现在常规对住院治疗的乳腺癌化疗、放疗病人做ER、PR、Her-2、nm23、p53等的检测，以指导临床治疗。
3.2 芯片与常规切片免疫组化标记的比较 常规制片免疫组化阴性，而组织芯片免疫组化阳性者包括ER2例，PR1例;常规制片免疫组化阳性，而组织芯片免疫组化阴性者包括nm23、Her-2各1例。而部分病例常规制片免疫组化和组织芯片免疫组化阳性表达强度略有不同。组织芯片的免疫组化结果与常规制片免疫组化比较，统计学处理差异无显著性。3.3 规格组织芯片免疫组化效果的比较 在本观察中，使用1.0mm大小的组织芯进行免疫组化染色所得的结果和使用0.5mm组织芯所得结果一致，表明组织芯大小并不影响实验结果，关键是在组织芯片制作过程中认真观察原始常规切片，选取代表性区域并准确标记，在受体蜡块相应位置采取组织芯块。在同样面积的芯片，可以排列较多数量的小尺寸组织芯块，较容易包含大量研究病例。但根