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关键词 抑肽酶 缺血/再灌注损伤 肠 丙二醛 肿瘤坏死因子 超氧化物歧化酶
Effects of aprotinin on the SMAO model for TNFα
Qu Bo，Hou Wangping
The People’s Hospital of Jiangmen，Jiangmen529000.
【Abstract】 Objective To observe the protective effect of aprotinin on the intestinal ischemia reperfusion inˉjury，study effects of aprotinin for TNFα.Methods 24rabbits were randomly divided into three groups（n=8）:Conˉtrol group（A），SMA wasn’t obstructed，ischemia/reperfusion group（B）and aprotinin group（C）.SMAO model was prepared and obstructed time was45min，and reperfusion for2h.In the group C，aprotinin was injected into vein5min before clamping at30000kIU/kg，and was kept on at10000kIU·kg -1 ·h -1 malondialdehyde（MDA），Superoxide disˉmutase（SOD），tumor necrosis factor alpha（TNFα），of serum were measured before obstruction（I 0 ），at clamping for45min（I 1 ）and1h（R 1 ），2h（R 2 ）after reperfusion respectively.Changes of intestinal tissue were observed with microˉscope and electronic microscope.Results In group C，SOD were significantly higher than that of group B at I 1 -R 2 （P<0.05，P<0.01）.MDA，TNFαofserum were significantly lower than those of group B，the damage of intestinal mucosa in group C were significantly slighter than those of group B under the light microscope，the damage of intestinal villus，mitchondrion，endoplasmal reticulum of group B were more serious than that of group C under the electronic miˉcroscope respectively.Conclusion Aprotinin can inhibit the level of lipid peroxidation，and reduce the level of TNFαin the serum.It was marked that the protective effect of aprotinin on the intestinal mucosa.
Key words aprotinin ischemia/reperfusion injury gut malondialdehyde tumor necrosis factor superoxˉide dismutase
因抑肽酶能抑制胰蛋白酶和糜蛋白酶的活性，临床上首先用于急性胰腺炎的治疗。近来发现它可以减少OFR的释放，保护血小板 ［1］ ，降低术中及术后出血和减轻心肌缺血再灌注损伤 ［2］ 。它是否可以改变某些细胞因子和炎症介质，对炎症连锁反应有无影响未见报道。本实验采用家兔肠系膜上动脉阻断（SMAO）模型，以血清丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）和肿瘤坏死因子α（TNFα）、及肠粘膜组织形态学改变为主要指标，了解抑肽酶对TNFα的影响，探讨在I/R中的作用机制。
1 材料与方法
1.1 动物分组 选择健康日本大耳白兔24只（由湖北医科大学动物实验室提供），体重2.0～2.5kg，雌雄不拘，随机分 为三组（每组8只）:A组为假手术组，B组为缺血/再灌注组，SMA（肠系膜上动脉）阻断45min，再灌注2h。C组为抑肽酶处理组，阻断前5min一次性静注抑肽酶（30000kIU/kg），余量加入平衡液（LR）内以10000kIU·kg -1 ·h -1 维持直至实验结束 ［3］ 。
1.2 实验步骤与方法 术前动物禁食12h，自由饮水，2.0%戊巴比妥钠（30mg/kg）行静脉麻醉，用DH-1408型呼吸机机械通气，调节呼吸参数PETCO 2 在4.67～6.0kPa范围。多道生理仪（Life Scope9NIHONKOHDEN、日本）监测MAP、CVP、HR、ECG和体温。腹正中切口，由肠系膜静脉置管达门静脉处以备采血和血气分析。B、C两组均于肠系膜根部阻断SMA45min，随后松夹再灌注2h。实验结束前静注戊巴比妥钠100mg，处死动物，迅速取小肠组织，以备形态学观察。
1.3 检测主要项目
1.3.1 血清TNFα 用放射免疫法检测，按试剂盒说明书进行操作。
1.3.2 血清MDA和SOD 用硫代巴比妥酸（TBA）比色法测定MDA水平。用分光光度计法测定SOD水平。均按试剂盒说明书操作。
1.3.3 组织形态学检测 肉眼观察各组动物肠管及粘膜的变化，实验结束前迅速取5cm长小肠组织切片，在光镜下观察细胞形态学变化。上述指标依次在阻断前（I 0 ）、阻断45min（I 1 ）、再灌注1h（R 1 ）和再灌注2h（R 2 ）各检测一次。
1.4 统计学方法 各组数据以均数±标准差（ˉx±s）表示，组间比较用方差分析，根据总变异度计算组间变异，分析多 因素的交互影响。组内两两比较用F检验或q检验，F检验，P>0.05，则不用q检验 ［4］ ，以P<0.05表示差异有显著性。等级资料用秩和检验。
2 结果
2.1 血清MDA（nmol/L）、SOD变化（nU/ml） 三组血清MDA水平在I 0 时基本相同。C组MDA在I 1 -R 2 时低于B组同期值（P<0.05，表1），与A组比较差异无显著性。B组在I 1 -R2 时明显升高，同A组比差异有非常显著性（P<0.01，表1）。C组血清SOD浓度在I 0 -R 2 时明显高于B组（P<0.05，表1），同A组比较差异无显著性。B组SOD浓度在I 1 -R 2 时降低，同缺血前比较差异有显著性（P<0.05），见表1，同A组比较差异有显著性（P<0.05），见表1。表1 三组血清MDA（nmol/L）、SOD（nU/ml）的变化 （ˉx±s）（略） 注:与A组相比， ☆ P<0.05， ˇ P<0.01;与同组I 0 相比， △ P<0.05;与B组相比， ▲ P<0.05， ▲▲ P<0.012.2 血清TNFα（ng·ml）的变化C组血清TNFα水平在R 1 、R 2 时比A组略有升高，但差异无显著性，但明显低于B组（P<0.05），B组在R 1 、R 2 时比A组明显升高（P<0.05），见表2。
2.3 小肠组织形态学变化
2.3.1 肉眼观察 A组肠管红润，有光泽，肠蠕动正常，肠粘膜表面平整，呈正常肠管形态。B组呈暗红色，蠕动减弱，粘膜表面有散在出血点。C组呈红色，有蠕动现象，粘膜表面较平整，有少许出血点。表2 三组动物血清TNFα变化 （ng/ml，ˉx±s）（略）注:与A组相比， ☆ P<0.05， ˇ P<0.01;与同组I 0 相比， △ P<0.05， △△ P<0.01;与B组相比， ▲ P<0.05， ▲▲ P<0.012.3.2 分级 参照Chiu ［6］ 法将小肠组织粘膜损伤程度分为6级。光镜下见B组小肠组织固有膜水肿，有白细胞散