点击显示 收起
关键词 ELISA HBsAg 洗板方式 假阳性
Study on the influence of HBsAg results with ELISA of different cleaning the troughs Mo Haolian
The Futian Center for Disease Prevention and Control，Shenzhen518033.
【Abstract】 Objective To study the influence of HBsAg results with ELISA of different cleaning the troughs Methods The hemolysis or feculent serum samples is frequent in the ordinary work.The HBsAg test by ELISA of the samples are often present fake positive.For eliminating the fake results，we test the samples repeatedly by different ways with the same reagent-box.Results We found the result of the samples are mostly aroused by hemolysis or feculent serum and the way of eliminating the fake result is the different way of cleaning the troughs.Conclusion We should select ideal cleaning the troughs according to different serum samples.
Key words ELISA HBsAg cleaning the troughs fake positive
酶联免疫法检测HBsAg具有灵敏度高、特异性强等优点而被广泛应用，但在日常检测HBsAg工作中常遇到阳性率高、重复性不好的现象，假阳性结果易给广大体检人员（HBsAg假阳性者）造成强大的精神压力，易引起对检测人员的投诉，同时对检测机构易造成不良的声誉。因此，本人针对这一现象，为使检验结果更加准确，采用同一种试剂盒对阳性结果通过不同的方法进行重复测定分析，结果发现:引起假阳性结果主要来源于有溶血或浑浊的血清，而消除其假阳性结果的方法主要在于不同的洗板方式。
1 材料与方法
1.1 血清标本 采静脉血做两对半的血清标本主要为来自我区公共场所和食品卫生行业人员的复检标本。
1.2 试剂 由北京万泰试剂有限公司生产的乙肝HBsAg酶联免疫试剂盒。
1.3 方法 在按照试剂盒操作说明书操作之余，同时改变不同的温育时间和不同的洗板方式进行重复检测，在检测过程中，小心吸取血清部分，尽量避免吸取到血球或其它浑浊的血清，并记录标本的溶血或其它原因引起的混浊现象，对有怀疑的阳性结果进行重新核实并复检两对半。
2 结果
2.1 温育时间对检测结果的影响 取两对半的血清标本450份（其中有浑浊可溶血的标本15份），分别在加入酶标物后以37℃温育30min和37℃温育60min，检测HBsAg，其结果见表1。
表1 不同温育时间检测结果（略）
经χ 2 检验，χ 2 =0.04，χ 2 <χ 20.05（1） =7.88，P>0.05，说明两种不同的温育方法检测HBsAg其阳性结果差异无显著性。因此，没有必要对其阳性结果进行核实复检。
2.2 洗板方式对检测结果的影响 对430份两对半血清标本（其中65份标本有溶血现象，7份标本有白蛋白类物质存在的浑浊现象），以不同的洗板方式对HBsAg进行检测，然后对具争议性的阳性结果者再进行一次抽血复检确认。具体结果见表2。对不同洗板方法阳性结果的核对:其差异全部来源于溶血的血清标本。经χ 2 检验，常规的洗板方法与其它三种洗板方法对检测HBsAg结果差异有显著性（其中方法1，χ 21 =4.21;方法2，χ 22 =5.74;方法3，χ 23 =4.78;χ 21 ，χ 22 ，χ 23 >χ 20.05（1） =3.84，P<0.05），而除常规机洗外的其他三种洗板方式差异无显著性。
2.3 溶血或其它原因对检测结果的影响 由于溶血等现象引起的血清浑浊的现象同样可以引起两对半其它结果出现假阳性或假阴性的现象，因此，对具有争议性的HBsAg（+）者进行重新采样（共33份），并进行两对半检测确认，结果HBsAg全部为阴性。
表2 不同洗板方法检测结果（略）
注:常规洗板:每次洗板后浸泡1min，然后再洗板，机洗+振摇:每洗板一次振摇1min，然后再进行下一次洗板（在洗板机中设定），人工洗:每次洗板必须浸泡1min后，然后在吸水纸上进行拍板，机洗+人工洗:在常规洗板2次后，在吸水纸上进行用力拍板，再洗板4次
3 讨论
不同的温育时间对HBsAg检测结果基本没有影响，说明在30min的温育时间内酶标物能与HBsAg结合并完全“牢固”地吸附在酶标板上，而温育时间较长的HBsAg（+）结果相反较多（主要出现在溶血现象的标本上），这可能由于影响酶标反应的残留物在较长时间内沉积在酶标板上， 在洗板的过程中较难被洗去，这与高菊华 ［1］ 所报道的结果不一致，这可能与其使用不同的试剂盒有关。
由检测结果可以看出:不同的洗板方法检测HBsAg对较“澄明”的血清而言，它们的结果是一致的，而对溶血等对引起血清浑浊的血样来说，它们的结果相差较大，这由于影响酶标反应的残留物虽一定程度上吸附在酶标板上，但经不同程度的拍打和振摇，可以“完全”把其洗脱，在不同的洗板方式中，经方式2为最理想的洗板方法，这可能由于更大力拍打使残留吸附物得以更完全的洗脱。
综上所述，为使结果更加准确，检测的特异性更高，我们应针对血清样本存在的具体情况（是否溶血等现象），选择较理想的洗板方法。
参考文献
1 高菊华，高海英.不同温育时间的酶联免疫法对HBsAg结果的影响.中国卫生检验杂志，2000，10（5）:606.
（收稿日期:2004-07-04）
作者单位:518033广东省深圳市福田区疾病预防控制中心
（编辑刘 静）