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首页合作平台在线期刊中华医学研究杂志2004年第4卷第10期论著

ELISA试剂“花板”问题的出现与分析

来源:INTERNET
摘要:我们在使用ELISA试剂进行血液HBsAg-HCV-HIV及梅毒等各项检验的过程中,经常发现空白和阴性,阳性对照以及室内质控孔(卫生部临检中心提供,HBsAg0。标本的阳性率很高,每板除对照孔外,有时阳性高达10孔之多,而大多数真阳性标本都出现弱阳性结果。这就是试验中所说的“花板”问题。1标本、试剂、仪器1。...

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    我们在使用ELISA试剂进行血液HBsAg-HCV-HIV及梅毒等各项检验的过程中,经常发现空白和阴性,阳性对照以及室内质控孔(卫生部临检中心提供,HBsAg0.5ng1ng-HCV-HIV梅毒均为2NCU)结果正常,而血液标本孔的OD值却比较高(大多数OD值≥0.070)。标本的阳性率很高,每板除对照孔外,有时阳性高达10孔之多,而大多数真阳性标本都出现弱阳性结果。这就是试验中所说的“花板”问题。这种现象对检验结果的正常判断造成了很大的影响。我们在试验中,针对这种“花板”现象进行了认真的分析及判断。总结如下。

  1 标本、试剂、仪器

    1.1 标本 出入境人员的血液标本。

    1.2 试剂 HBsAg、HCV、HIV、梅毒试剂均为不同厂家的ELISA试剂。

    1.3 仪器 LD4-2型脑心机BID RAD1575型洗板机BID RAD550酶标仪。

    2 方法

  所有被检出入境人员的血液标本,按照各个厂家提供的ELISA试剂说明书进行HBsAg-HCV-HIV梅毒等检验项目操作。所有试剂均在有效期内使用。

    3 结果

  所使用不同厂家的试剂有时会出现“花板”问题。

    4 分析

  在所有标本进行检测的过程中,所用的仪器及加样过程都处于正常状态的情况下,步骤均按照各种试剂说明书的要求去做,排除实验所用仪器和操作步骤对实验结果的影响外,试剂盒内的空白、阴性和阳性对照以及室内质控值都很正常,只有检测的血液标本情况异常。根据国家和疾控中心报告阳性率的比例不应该是很高的情况下,HBsAg在用ELISA之前都经过了快速金标试剂的检测,阳性标本得到了一定的控制。因此,原因可能是在标本的处理,特别是放置时间、离心速度和离心时间方面的问题。所以,标本的处理就成为实验结果的主要可疑因素。

    为了避免“花板”问题的出现,降低检测的假阳性率,获得更理想的实验结果,首先在选择ELISA试剂时,应选择灵敏度高、特异性好、稳定性好、批间差小、操作方便省时的试剂。并在检验的过程中应采取下列措施:(1)抽取样本时应抽出足够检验量的血液标本,按比例加抗凝剂,便于离心,得到足够的血清(血浆)。(2)血液标本应置于室温下1~2h,使血液凝固收缩,然后离心检测或让血液过夜后再检测。这样才能使得血液充分收缩,让标本中的非特异性物质所致的假阳性率降至最低。(3)检测之前,加大离心转速,尽量延长时间,使血细胞和纤维蛋白充分沉淀,让血细胞与血清彻底分离。(4)加样时不能加入红细胞或纤维蛋白,要按照操作说明书去做,否则会影响实验结果。(5)封板温育时,各孔一定要封严,防止阳性标本的液体蒸发,产生周边现象从而导致“花板”的出现。(6)手工洗板时应注意液体被溅出或孔与孔之间的液体溢出,连成整体液面后产生“花板”。用洗板机洗板时应防止针口有纤维蛋白或异物,这些异物在洗板的过程中易产生拖带现象而导致“花板”的出现。

  (收稿日期:2004-08-29)

  作者单位:1010051内蒙古国际旅行卫生保健中心

  2010010内蒙古血液中心 

  (编辑秋 实)

作者: 云华 丁齐虹 班美莲等 2005-7-25
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