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首页合作平台在线期刊中华医学研究杂志2004年第4卷第11期论著

高效液相法测定氢氯噻嗪片的含量

来源:INTERNET
摘要:【摘要】目的建立高效液相色谱法测定氢氯噻嗪片的含量。磷酸盐缓冲液(1mol/L磷酸二氢钾溶液,用磷酸调至pH3。流速1ml/min。94μg/ml的范围内与峰面积呈良好的线性关系,r=0。...

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    【摘要】 目的 建立高效液相色谱法测定氢氯噻嗪片的含量。方法 采用Hypersil ODS 2 5μm(4.6×250mm)柱;磷酸盐缓冲液(1mol/L磷酸二氢钾溶液,用磷酸调至pH3.0)-甲醇-水(4∶30∶66)为流动相;流速1ml/min;检测波长272nm。结果 氢氯噻嗪浓度在3.39~16.94μg/ml的范围内与峰面积呈良好的线性关系,r=0.9999,平均回收率为98.9%,RSD为0.4%。结论 本法简便、快速、准确,专属性强,可作为氢氯噻嗪片的含量测定方法。 

  Dai Jinyu,Lai Zengfa
    
  Sanming Institute for Drug Control,Fujian365000.
     
  【Abstract】 Objective To establish HPLC method for the determination of hydrochlorothiazide tablets.Methˉods The Hypersil ODS 2 column was used(4.6mm×250mm,5μm).The mobile phase was phosphate buffer(1mol/L potassiun dihydrogen phosphate,with pH3.0by phosphoric acid)-methand-water(4∶30∶66).The flow rate was1ml/min.The detection wavelength was272nm.Results The caoibration curve was linear(r=0.9999)within the range of3.39-16.94μg/ml for hydrochlorothiazide,and the average recovery was98.9%,RSD was0.4%.Concluˉsion The method was simple,rapid,accurate and specific.It can be used as the quantitative determination of hyˉdrochlorothiazide tablets.
     
  Key words hydrochlorothiazide tablets HPLC determination  

  氢氯噻嗪片是一种口服利尿、抗高血压药,临床常用于治疗高血压、各类水肿、慢性心功能不全等疾病。原质量标准 [1]  采用紫外分光光度法测定其含量,本文采用高效液相色谱法测定氢氯噻嗪片的含量,快速、准确、专属性强,可作为氢氯噻嗪片的含量测定。

  1 仪器与试药
   
  Agilint1100组合高效液相色谱仪(带自动进校器);Hyˉpersil ODS 2 5μm(4.6mm×250mm)柱;UV-2100可见紫外分光光度计(日本岛津);BP211D电子天平;氢氯噻嗪对照品(10309-0001,供含量测定用,99.4%)由中国药品生物制品检定所提供;氢氯噻嗪片(山西临汾云鹏药业有限公司生产,规格25mg,批号20030407,20040102;丹阳市药业有限责任公司生产,规格25mg,批号为20030531,20031026);甲醇为色谱纯;其余试剂为分析纯。

  2 方法与结果
   
  2.1 测定波长的选择 精密称取氢氯噻嗪对照品21.3mg 于50ml量瓶中,加甲醇适量超声溶解并定容,摇匀,作为贮备液。精密吸取贮备液0.6ml置25ml量瓶中,用磷酸盐缓冲液(1mol/L磷酸氢二钾溶液,用磷酸调节pH至3.0)-甲醇-水(4∶30∶66)的溶剂定容至刻度,以此溶剂为空白,在200~400nm波长范围内扫描,结果表明氢氯噻嗪在272nm波长处有最大吸收,且峰形对称,故在高效液相色谱法测定中选择以上溶剂为流动相,272nm波长为检测波长。同法配制空白辅料溶液,按上述色谱条件进行测定,结果没杂质峰出现,不干扰测定。(见图1)
   
  图1 高效液相色谱图(略)
   
  2.2 色谱条件 采用Hypersil ODS 2 5um(4.6×250mm)色谱柱;磷酸盐缓冲液-甲醇-水(4∶30∶66)为流动相;流速为1ml/min;进样量10μl;检测波长272nm。计算采用外标峰面积法。
   
  2.3 线性试验 精密吸取“2.1”项下贮备液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml至25ml容量瓶中,加流动相定容,摇匀,制成浓度分别为3.39、6.78、10.16、13.55、16.94μg/ml的溶液,进样10ul。以对照品浓度x(μg/ml)对峰面积y进行线性回归,回归方程为y=38.79x+5.63,r=0.9999。
   
  结果表明,氢氯噻嗪在浓度为3.39~16.94μg/ml范围内与峰面积具有良好的线性关系。

  2.4 对照品溶液的制备 精密吸取“2.1”项下的贮备液25ml置100ml的量瓶中,用流动相定容,摇匀,即得。
   
  2.5 精密度试验 精密取对照品溶液5ml用流动相定容至50ml,按上述色谱条件重复进样5次,测定其峰面积,RSD为0.3%(n=5)结查表明本法精密度良好。
   
  2.6 稳定性试验 取批号为20040102样品溶液,按上述色 谱条件分别在配制后0、2、4、6、8h进样测定,结果RSD为0.7%。表明供试品溶液在8h内稳定。
   
  2.7 回收率试验 精密称取已测知含量的氢氯噻嗪片(批号为20040102)的样品细粉适量(约相当于氢氯噻嗪20.56mg),置200ml量瓶中,用甲醇溶解并定容,摇匀,滤过,精密取续滤液5.0ml,共6份,分别置100ml量瓶中,各加入“2.4”项下的对照品溶液4,6,8ml,各2份流动相定容,摇匀。按上述色谱条件,依法测定。平均回收率为98.9%,RSD为0.4%(n=6)结果见表1。

  表1 回收试验结果 (略)

  2.8 样品含量测定 取本品20片,精密称定,研细,精密称取细粉适量(约相当于氢氯噻嗪20mg)置100ml量瓶中,加甲醇溶解并定容,摇匀,滤过,精密吸取续滤液5.0ml置100ml量瓶中,用流动相定容,摇匀,作为供试品溶液。取供试品溶液和对照品溶液分别重复进样5次,测定含量,结果见表2。

  表2 样品测定结果(略)
   
  3 讨论

  参照《中国药典》二部 [1]  复方盐酸阿米洛利片含量测定、《中国医药工业杂志》 [2]  复方卡托普利片中卡托普利和 氢氯噻嗪的HPLC测定。本实验取对照品贮备液2.5ml两份,分别用A磷酸盐缓冲液(1mol/L磷酸二氢钾溶液,用磷酸调节pH至3.0)-甲醇-水(4∶30∶66)和B0.01mol/L磷酸二氢钠溶液-甲醇-乙腈(60∶25∶10)用磷酸调pH至3.0,两种溶剂定容至100ml,照分光光度法,在200~400nm波长范围内扫描,结果表明氢氯噻嗪在272nm波长处均有最大吸收,且无干扰峰,符合药典规定,因乙腈价格贵且有毒,故本实验选用A溶剂作为HPLC法中的流动相。
   
  实验过程中对流动相比例进行摸索发现磷酸盐缓冲液-甲醇-水(4∶25∶71)时,氢氯噻嗪出峰时间约在20min。流动相比例(4∶35∶61)时,出峰时间约在3min。流动相比例(4∶30∶66)时,出峰时间约10min,且峰型对称,理论塔板数等均符合药典规定,故选择磷酸盐缓冲液-甲醇-水(4∶30∶66)为本实验的流动相。
  参考文献

  1 中国药典.二部,2002,486,514-515.
   
  2 王宜详,杨汉中,吴韶铭.复方卡托普利片中卡托普利和氢氯嗪的HPLC测定.中国医药工业杂志,2003,34(8):404-405.
    
  (收稿日期:2004-08-22)

  作者单位:365000福建省三明市药品检验所 

  (编辑刘 静)

作者: 戴金玉 赖增发 2005-7-25
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