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首页合作平台在线期刊中华医学研究杂志2004年第4卷第12期论著

非小细胞肺癌中细胞粘附分子E-cad和CD44v6表达及临床意义

来源:INTERNET
摘要:【摘要】目的探讨E-cad,CD44v6与NSCLC的发生及临床病理特征,以及淋巴结转移的关系。方法采用免疫组化染色法,对40例原发性NSCLC中及20例良性病变中E-cad,CD44v6表达情况进行检测。结果E-cad在20例良性病变中表达阳性率为100%,NSCLC中表达阳性率为37。CD44v6在20例良性病变中均为阴性表达,NSCLC中阳性表达率70......

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    【摘要】 目的  探讨E-cad,CD44v6与NSCLC的发生及临床病理特征,以及淋巴结转移的关系。 方法  采用免疫组化染色法,对40例原发性NSCLC中及20例良性病变中E-cad,CD44v6表达情况进行检测。 结果  E-cad在20例良性病变中表达阳性率为100%,NSCLC中表达阳性率为37.5%。CD44v6在20例良性病变中均为阴性表达,NSCLC中阳性表达率70%,差异有显著性(P<0.05)。E-cad阴性表达,CD44v6阳性表达在NSCLC中与性别年龄,与病理组织类型及组织分化程度无关,与TNM分期和淋巴结转移具相关性。 结论  NSCLC中E-cad低表达,CD44v6高表达,提示病情进展,预后不良,可作为判断预后的指标。
     

    
  Expression and their clinical significances of E-cadherin and CD44v6

  in non-small cell lung cancer 

  Sun Wei,Zhang Lianghua,Fu Xiangning
    
  Department of Thoracic and Cardiac Surgery,Tongji Hospital,Tongji Medical College of Huazhong University of Science&Technology,Wuhan430030.

     【Abstract】 Objective Study the expressions of E-cadherin and CD44v6in non-small cell lung carcinoma(NSCLC)and their relationship to clinicopathological factors and prognosis.Methods 40cases with NSCLC and20cases with benign disease were investigated to detect the expressions of E-cadherin and CD44v6by immunohistoche-mistry(S-P method).Results (1)In normal lung tissues,E-cad positive expression,and CD44v6negative ex-pression.(2)In NSCLC E-cad negative,CD44v6positive expression compare with normal lung tissues significant dif-ferecnce(P<0.05)were found.But has no ralationship with age gender,pathological type,and tumor difference grade.(3)In NSCLC,E-cad CD44v6expression were associated with TNM stage and lymphnode metastasis.E-cad negative expression,CD44v6positive expression were associated with advanced clinical stage and lymphnode metasta-sis.Conclusion E-cad negative expression,CD44v6positive expression may be a better prognostic marker of NSCLC.
   
        
  肺癌是目前世界上发病率和死亡率最高的恶性肿瘤之一,近30年来肺癌发病率逐年上升,死亡率居各类恶性肿瘤首位 [1] 。肺癌的高死亡率与其高侵袭性及转移相关,90%的患者死于转移相关并发症。研究表明粘附分子在肿瘤的浸润和转移的过程中发挥重要作用。粘附分子表皮型钙粘素E-cad和CD44v6,与多种肿瘤(如胃癌,乳腺癌,结肠癌等)的浸润和转移密切相关 [2,3] ,但二者联合检测在肺癌中报道不多,我们采用免疫组化的方法,联合检测E-cad,CD44v6分子在非小细胞肺癌(non-small cell lung can-cer,NSCLC)组织和正常肺组织中的表达,探讨它们与NSCLC的发生及临床病理特征,以及淋巴结转移的关系,对临床治疗以及预后判断提供重要信息。

  1 材料与方法

  1.1 材料

     1.1.1 标本来源 组织标本来源于华中科技大学同济医学院附属同济医院病理科,为2002年2月~2003年2月同济医院胸心外科手术切除、石蜡包埋标本。共选取40例原发性NSCLC,男31例,女9例,年龄42~75岁,平均58岁。
     
  其中鳞癌28例,腺癌12例,组织学分级:高中分化26例,低分化14例。临床分期:UICC97分期,Ⅰ期4例,Ⅱ期16例,Ⅲ期14例,Ⅳ期6例。无淋巴结转移18例,有淋巴结转移22例。另取同期手术良性病变病理证实为正常肺组织的标本20例做对照。

     1.1.2 试剂 一抗鼠抗人E-cad单克隆抗体和鼠抗人CD44v6单克隆抗体,SP试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司。DAB试剂和其余试剂由华中科技大学同济医学院病理教研室提供。

  1.2 方法

     1.2.1 实验方法 按免疫组织化学染色(过氧化物酶标记的链霉卵白素S-P法)步骤进行。以已知阳性表达的肺癌切片为阳性对照,阳性细胞胞浆呈棕黄色染色。以PBS代替一抗作阴性对照。

     1.2.2 结果判定 E-cad染色阳性为细胞膜成棕黄色,其结果采用如下方法判定 [4,5] 。E-cad染色(-)阳性细胞数<60%,(+)阳性细胞数>60%。CD44v6阳性表达于细胞膜,为棕黄色染色,根据染色强度和染色细胞百分数分为,阴性(-),未见阳性细胞;弱阳性(+),浅棕色,阳性细胞数<5%;阳性(++),棕黄色,阳性细胞数5%~75%;强阳性(+++),阳性细胞数>75%。将阴性和弱阳性合计为阴性表达,阳性和强阳性合计为阳性表达。计数方法在400倍光镜下找5~10个视野,数100~200个细胞。共1000个细胞,计算阳性细胞百分比。
    
  1.2.3 统计学方法 用χ 2 检验,精确概率计算法,α=0.05为显著性水平。
    
  2 结果
  
  E-cad和CD44v6蛋白的表达情况见表1。
    
  表1 E-cad和CD44v6与肺癌组织生物特性的关系略

     2.1 在不同组织类型中的表达 E-cad在肺癌组织和非癌组织中均有表达,在非癌组织中表达的阳性率100%,与癌组织之间37.5%比较差异有显著性P<0.05,CD44v6非癌组织中不表达,在肺癌组织中表达较高70%,两者之间差异有显著性,P<0.05。

     2.2 E-cad和CD44v6与肺癌组织生物特性的关系

     2.2.1 E-cad、CD44v6与肿瘤病理类型的关系 NSCLC中E-cad阴性表达,CD44v6阳性表达,与性别年龄无相关性。与病理组织类型及组织分化程度无关。

     2.2.2 NSCLC中E-cad与CD44v6与TNM分期和淋巴结转移相关性 TNM分期Ⅰ+Ⅱ期与Ⅲ+Ⅳ期比较,E-cad阳性表达率分别为55%和20%,二者比较差异有显著性,P<0.05。E-cad阳性表达率无淋巴结转移组阳性率为61%,有淋巴结转移组阳性率为18.2%,二者比较差异有显著性P<0.05。同样NSCLC中CD44v6高表达,与TNM分期和淋巴结转移相关性。

     2.2.3 E-cad与CD44v6在淋巴结转移相关性 见表2。

  表2 E-cad与CD44v6在淋巴结转移NSCLC中的表达略
      
  22例淋巴结阳性的标本中,E-cadherin阴性和CD44v6阳性同时表达的病例有17例占总例数的77%,统计检验提示二者密切相关,P<0.05。
     
  3 讨论
    
 肿瘤转移是一个多步骤、多因素参与的复杂过程。20世纪90年代后粘附分子(cell adhesion molecules,CAMs)的发现后,研究表明细胞粘附在肿瘤的浸润和转移的过程中发挥重要作用,成为研究的热点。

    E-cad属于细胞粘附分子中钙粘蛋白家族,一般位于细胞膜的侧面,是保持上皮细胞极性和细胞-细胞间紧密连接的关键分子。E-Cad是关键的黏附分子,当其表达下调或功能障碍时,将使同种细胞失去黏附,对于正常组织而言,意味着不能正常发育成形 [6,7] ;Shiozaki等 [8] 对各种器官恶性肿瘤研究发现,正常上皮组织细胞之间,甚至在正常细胞与肿瘤组织之间均有稳定的E-cad。在本实验中也证实了这一点,在正常肺组织中,E-cad阳性表达率为100%。

    本实验研究结果显示,在非NSCLC中,E-cad表达较正常肺组织明显减低,这与大多数试验研究的结果一致。在NSCLC中E-cad表达与年龄、性别、病理类型和细胞分化无关。在肿瘤分期和淋巴结转移的关系方面,大多数研究认为E-cad基因为抑癌基因,E-cad表达的降低提示病情进展或淋巴结转移。本实验研究中发现在NSCLC中,E-cad在TNM分期在临床I+II期阳性表达为55%,而临床III+IV期阳性表达仅为20%;两者有显著差异P<0.05,提示E-cad低表达与预后差相关。淋巴结转移组也可以看到无淋巴结转移组阳性率为61%,有淋巴结转移组阳性率为18.2%,两组有显著性差异,提示E-cad低表达与淋巴结转移相关。因此E-cad在NSCLC中可作为判断淋巴结转移和预后的指标。

    CD44是一类与肿瘤转移密切相关的粘附分子,又称透明质酸受体,为分布极广泛的细胞表面跨膜糖蛋白分子,在淋巴细胞、成纤维细胞和上皮细胞表面均能检测其表达,参与细胞与细胞,细胞与基质之间的特异性粘连过程。CD44分子分为两类:一类为标准型(CD44s),另一类是变异型(CD44v)。CD44及其变异体的表达在肿瘤的预测,早期诊断,病程进展转移潜能与预后的估计等方面有潜在的价值。研究表明大多数腺癌中,CD44v6上调表达与肿瘤转移相关。Wielenga等 [9] 发现正常粘膜中无CD44v6表达,而CD44v6在早期腺癌,进展期腺癌和浸润性腺癌的阳性率为9%,42%,68%。

    本实验结果显示,在正常肺组织内不表达CD44v6。在NSCLC中CD44v6高表达阳性表达率为70%,但是与性别年龄无关。在鳞癌中表达阳性率为78.5%高于腺癌中的50%,。上述研究与Fasano [10] 发现鳞癌中表达高于腺癌的结果一致,但是两组无统计学显著差异。在临床TNM分期和伴有淋巴结转移的分组中阳性表达情况为在临床Ⅲ+Ⅳ期为90%,而临床Ⅰ+Ⅱ期阳性表达仅为50%。两组统计学有显著差异(P<0.05)。淋巴结转移分组也可以看到:有淋巴结转移的CD44v6高表达86.4%,与无淋巴结转移组50%相比有显著差异(P<0.05),提示在NSCLC中CD44v6高表达与较晚的临床分期和淋巴结转移相关。CD44v6可作为判断预后的指标。

    在伴有淋巴结转移的22例淋巴结阳性的标本中,E-cad阴性和CD44v6阳性同时表达的病例有17例占总例数的77%,统计检验提示二者密切相关,P<0.05。提示二者有协同作用。联合检测可以提高对淋巴结转移的敏感度。检测NSCLC的E-cad与CD44v6蛋白的表达可以作为一项较好的判断肺癌淋巴扩散能力、判断预后的指标,以指导临床NSCLC患者的综合治疗。
    
  参考文献
    
 1 Greenlee RT,MurrayT,Bolden S,et al.Cancer Statistics,2000CA Can-cer J Clin,2000,50:7-30.

    2 Nakayama H,Yasui W,Yokozaki H,et al.Reduce expression of nm23is associated with metastasis.Jpn J Cancer Res,1993,84(2):184.

    3 Comman DR.Decreases mutual adhesiveness,property of cells from squamous cell carcinomas.Cancer Res,1994,4:625-92.

    4 Desplaces A,Poupon MF.The metastatic process.Bull Cancer1994,81:751-754.

    5 Saiki I.Inhibition of tumor cell adhesion and metastasis.GanTo Kogaku Ryoho,1993,20:363-72.

    6 Larue L,Ohsugi M,Hirchenhain J,et al.E-cadherin null mutant em-bryos fail to form a trophectoderm epithelium.Proc Natl Acad Sci USA,1994,91:8263-8267.

    7 Riethmacher D,Brinkmann V,Birchmeier C.A targeted mutation in the mouse E-cadherin gene results in defective preimplantation develop-ment.Proc Natl Acad Sci USA,1995,92:855-859.

    8 Shiozaki H,Tahara H,Oka H,et al.Expression of immuno-reactive E-cadherin adhension molecules in human cancer,Am J pathl,1991,139:17-25.

    9 Wielenga VJ,van der Neut R,Offerhaus GJ,et al.CD44glycoproteins in colorectal cancer:expression,function,and prognostic value.Adv Can-cer Res,2000,77:169-87.

    10 Fasano M,Sabatini MT,Wieczorek R,et al.CD44and its v6spliced variant in lung tumors:a role in histogenesis?Cancer,1997,80(1):34-41.      

  作者单位:430030华中科技大学同济医学院附属同济医院心胸外科

  (收稿日期:2003-10-26)

作者: 孙威 张良华 付向宁 2005-7-26
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