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单细胞凝胶电泳技术，又名彗星试验，是近年来发展起来的一种在单细胞水平上检测DNA损伤的新方法。Singh氏法为经典的彗星试验方法，为国内外常用 ［1］ ，但步骤较多，且受多因素的影响 ［2］ 。本人经过多次试验，发现如在常规彗星试验基础上稍做修改，将可使实验步骤更简单，省时，且不会影响试验结果。下面为常规彗星试验和改良彗星试验分别检测大鼠外周血淋巴细胞体外H 2 O 2 染毒后DNA损伤情况比较。
1 材料与方法
1.1 材料与主要试剂 清洁级昆明种小鼠（湖南农业大学动物部提供）;肝素钠（浙江三利生物制品厂）;淋巴细胞分离液（上海化学试剂二厂）等。
1.2 方法
1.2.1 受试物处理 取昆明种小鼠40只，平均体重23.16g，雌雄各半，随机分为两组，采用股动脉放血法，每只采血约2ml，肝素抗凝，振荡摇匀后，加于已加淋巴细胞分离液的离心管中（1100pr/min）离心约18min，4℃备用。
1.2.2 细胞悬液制备 从每离心管中取0.5ml淋巴细胞悬液与0.5ml PBS充分混匀，构成1ml反应体系。
1.2.3 体外染毒试验 在1ml反应体系中加H 2 O 2 （8.0mmol/L）于37℃染毒2h后，3000r/min离心8min，弃上清，留约0.5ml，混匀，4℃备用。
1.2.4 常规彗星试验操作步骤（详见参考文献 ［3］ ） 胶板制备→裂解→解旋→电泳→中和→染色→脱色→阅片→显微照像
1.2.5 改良彗星试验操作步骤 为节省实验时间，本研究将铺三层胶法改为铺一层胶法，同时在中和及染色等步骤进行了改良，具体操作如下:将已染毒的淋巴细胞悬液与40℃的1%低溶点琼脂糖等浓度混匀后，取70μl混合液直接滴加在磨毛玻片上，加盖玻片，4℃冷凝，20min后揭盖片;4℃于碱性裂解液中裂解1h;解旋20min;4℃电泳（25V，300mA）30min;中和5min;加碘化丙啶，暗处染色10min，加盖片;于莹光显微镜下镜检，照像。
1.2.6 统计学方法 本研究的结果采用SPSS10.0软件包处理。
2 结果 试验结果见表1。
表1 两种方法检测的小鼠淋巴细胞DNA损伤情况（略）注:拖尾率比较经χ 2 检验，P>0.05;彗星迁移度采用LSD方差分析，P>0.05
3 讨论
从表中可以看出，两种彗星试验检测结果无显著差异，且改良彗星试验在铺胶、中和及染色几个方面节省时间，提高了实验成功率，减少了干扰因素。彗星试验已被广泛用于各种受试物、射线、生物因素等引起细胞DNA损伤的检测，DNA损伤与修复研究，致突变剂的初筛等 ［4］ 。在临床上主要用于DNA修复缺陷病的诊断，细胞凋亡的检测，肿瘤放、化疗敏感性的监测 ［5～6］ ，药效评估以及临床用药短期和长期遗传毒性的评价等，其试验步骤的简化将可大大缩短试验流程，提高工作效率。
参考文献
1 Kassie F，Parzefall W，Knasmuller S.Single cell gel electrophoresis as-say:a new technique for human biomonitoring studies，Mut RES2000，463（1）:13-31.
2 马爱国，藏金林，刘四朝.单细胞凝胶电泳技术影响因素的分析.中华预防医学杂志，1999，33（3）:165.
3 赵忠桂.杀虫剂万蛾灵对小鼠遗传物质影响的研究.硕士学位论文.中南大学，2003，5-7.
4 蔡颖，庄志雄.镍和镉对人体外周血淋巴细胞DNA损伤作用.中华预防医学杂志，1999，33（2）:75-77.
5 王芳，张双全，戴祝英，等.抗菌肽CM4组分对K562癌细胞染色质DNA断裂作用的SCGE研究.生物化学与生物物理进展，1998，25（1）:64.
6 Comet assay in genetic ecotoxicology:a review.Environ Mol Mutagen，1999，34（4）:246-255.
作者单位:421001湖南衡阳湖南环境生物学院医学部