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1 实验原理
酱油在碱性条件下灰化，碘被有机物还原，通过放大反应，与碱金属结合生成的碘化物被溴水定量氧化为碘酸盐，加入甲酸钠除去多余的溴，在酸性条件下与溴化钾反应，发生褪色现象，根据褪色程度，于508nm下与标准系列比较定量。
2 材料与方法
2.1 仪器 高温电炉，772分光光度计，10ml具塞比色管，烘箱，水浴箱。
2.2 试剂 浓硫酸，溴化钾（AR），95%乙醇（AR），10mol/L氢氧化钾溶液，氯化钠（AR），饱和溴水，200g/L甲酸钠溶液;碘标准溶液:称取于110℃烘干至恒重的基准试剂碘酸钾0.1686g，用少量水溶解后移入1L容量瓶中，稀释至刻度，此液碘浓度为100μg/ml，临用前用水稀释成2μg/ml的碘标准使用液;甲基橙使用液:准确称取0.100g甲基橙，溶于100ml45℃左右的温水中，冷却至室温，加入20ml乙醇，移入1L容量瓶中，加水至刻度，再移取40ml此溶液于500ml容量瓶，加入200ml水，100g溴化钾，15ml浓硫酸，冷却后加水释释至刻度，此甲基橙使用液1ml约相当于2.0μg碘。
2.3 样品处理 称取10ml样品于坩埚中，加入10mol/L氢氧化钾溶液5.0ml，先在烘箱内烘干后，移入高温炉中于600℃灰化至呈白色灰烬，待冷却后取出，以10ml水浸渍，加热溶解，再用30ml热水分数次过滤于50ml比色管中，加入1ml浓硫酸，摇匀，滴加饱和溴水至溶液呈浅黄色，边滴边振摇至黄色不褪为止（10min内），置沸水浴中加热15min，再向管中加入甲酸钠溶液5滴，摇匀后水浴10min，取出冷却后稀释至刻度。
2.4 标准曲线的绘制 吸取0、0.5、1、1.5、2、3、4ml碘标准溶液于10ml比色管中，向各管加入0.4g氯化钠，5.0ml甲基橙使用液，加水至刻度，混匀，20min后于波长508nm下，1cm比色杯比色，以碘含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2.5 样品测定 取5.0ml样品处理液于10ml具塞比色管中，加入5.0ml甲基橙使用液，混匀，20min后比色，由标准曲线查得碘质量，从而求出酱油中碘的含量，同时做空白试验。
3 讨论
3.1 反应时间与温度的影响 标准管与样品的吸收液必须为同一批配制，否则结果相差较大。20℃时，样品加入甲基橙使用液20min后显色即稳定，至少稳定48h以上。
3.2 溴化钾用量的确定 从图1甲基橙使用液的吸收光谱可以看出，波长在505～510nm处，吸光度达到最大且变化很小，故本方法选定吸收波长为508nm。
图1 波长与吸光度的关系（略）
3.3 溴化钾用量的确定 溴化钾可明显加快反应速度，根据实验，本法选定在每5ml甲基橙使用液中加入1.0g溴化钾。
3.4 硫酸用量的选择 硫酸一方面使甲基橙使用液呈现红色，同时也参与反应。实验时吸取5.0ml未加硫酸的甲基橙使用液，加入10μg碘标准溶液，逐滴加入1.0mol/L硫酸溶液，当加入1.5ml时，红色即完全褪去，故本法选择浓硫酸用量为15ml。
3.5 检出限及线性范围 检出限为空白样品进行连续10次测量的标准偏差的3倍所对应的浓度，本法检出限为0.3μg，线性范围为0.3～10mg/L，标准曲线的|r|>0.9995。
3.6 共存离子的干扰 本次试验在10μg碘标准溶液中，加入一定浓度倍数的食品中经常存在的元素离子进行干扰实验，当结果偏离±10%以上时，即判断为有干扰。实验结果表明:100mg K + 、Na + 、Cl - ，20mg C 2 O 42- ，1mg Mg 2+ 、SO 32- 、NH 4+ ，0.35mg Ni 2+ ，0.2mg Cu 2+ 、Ca 2+ 、Fe 2+ 、Pb 2+ 、Zn 2+ 、Al 3+ 等均不影响测定，强氧化剂MnO 42- 、Cr 2 O 72- 、ClO 4- 有干扰。
3.7 精密度及加标回收实验 在本法优化的实验条件下，对样品加标1、2、5mg/L碘，结果表明:RSD为2.47%～4.20%（n=6），加标回收率为99.6%～106.7%，方法重现性良好，回收率满意，可满足分析要求。
表1 方法的精密度和回收率（略）
4 小结
本次研究建立了酱油中碘的甲基橙褪色分光光度测定法，在本法优化的实验条件下，采用加有硫酸和溴化钾的甲基橙使用液与样品中碘反应，发生褪色，于508nm下测定吸光度。检出限为0.3μg，线性范围为0.3～10mg/L，RSD2.47～4.20%，回收率99.6%～106.7%，方法简单干扰少、稳定性好，可适用于日常卫生监督监测工作。
参考文献
1 李立明.流行病学.第四版.北京:人民卫生出版社，2001，351-352.
2 中国预防医学科学院标准处编.劳动卫生国家标准汇编（2）.北京:中国标准出版社，1997，295-297.
作者单位:224002江苏省盐城市疾病预防控制中心